神经再生条件液中活性蛋白的分离和检测

目的了解神经再生条件液的生物活性。方法以ＳＤ大鼠的坐骨神经损伤后建立神经再生室模型，采用自然胶电泳分离法，将分离的各蛋白带分别与新生ＳＤ大鼠的后根神经节进行共同培养。结果应用自然胶电泳分离，神经再生条件液在分子量为６７～６６９ｋｕ区域有８条蛋白带。其中分子量在２３２～４４０ｋｕ区域的蛋白条带具有神经营养和趋化作用。结论神经再生条件液有促进神经再生的作用。

周围神经再生条件液中蛋白条带质谱分析

目的研究神经再生条件液（nerve regeneration conditioned fluid,NRCF）中具有神经再生趋化活性的蛋白成分,对相对分子质量为（232～440）×10^3的蛋白条带进一步行分离和定性。方法新西兰大白兔6只,体重1.8～2.5kg,取坐骨神经建立神经再生室模型。术后7d采集NRCF进行自然聚丙烯酰胺凝胶电泳（native-polyacrylamide gel electrophoresis,Native-PAGE）分离,切取相对分子质量为（232～440）×10^3区域的蛋白条带,采用Shotgun蛋白质组学策略、液相色谱-串联质谱对其组分进行定性分析。结果NRCF的Native-PAGE电泳结果显示,相对分子质量在669×10^3以上、（232～440）×10^3和（140～232）×10^3分别有1条蛋白带,在（67～140）×10^3有6条蛋白带。其中相对分子质量在（232～440）×10^3的蛋白条带共鉴定到54种蛋白质,主要集中在等电点5.5～8.0,相对分子质量为（10～40）×10^3范围内,其中4种是未命名蛋白质。这54种蛋白质可归类为结合蛋白（43%）、转运蛋白（30%）、酶（6%）、信号转导蛋白（4%）和分子功能未知（17%）。54种蛋白质的亚细胞定位主要是分泌性蛋白（63%）,其他的位于细胞膜和胞浆内等。结论采用Native-PAGE和Shotgun蛋白质组学分析NRCF中相关蛋白质,确定了NRCF中相对分子质量为（232～440）×10^3条带的蛋白质组分,为进一步研究其中的功能未知蛋白提供了线索,对明确其是否对周围神经再生具有促进作用。

神经再生条件液对运动神经元细胞活性的影响

目的 比较源于运动及感觉神经的再生条件液 (NRCF)以及碱性成纤维细胞生长因子 (b FGF)对体外分散培养的 SD大鼠运动神经元的生物学效应 ,探讨周围神经再生趋化特异性产生的机制。方法 建立运动及感觉神经再生室模型 ,收集术后 7天的运动及感觉神经再生条件液 (MD- NRCF,SD- NRCF) ,将两者以及 b FGF分别加入分散培养的 SD大鼠运动神经元的 DMEM无血清培养基中 ,在倒置相差显微镜下观察并摄片 ,运用细胞图像分析系统测量各组细胞的胞体面积及最长突起长度 ;并采用 MTT法检测各组神经元的细胞活性。结果 实验组运动神经元的胞体面积、最长突起长度及 OD值均大于对照组 ;其中 MD- NRCF组细胞的最长突起长度及 OD值大于 SD- NRCF组和 b FGF组。结论 MD- NRCF对于运动神经元的促突起生长作用及神经生物学活性优于 SD-NRCF及 b FGF。

骨髓基质细胞条件液联合神经干细胞移植对帕金森病大鼠行为认知功能的影响:效果优于单纯神经干细胞移植吗?

背景：将骨髓基质细胞和神经干细胞分别单独移植于帕金森病模型鼠脑内已取得良好效果,但尚未见联合移植的报道。目的：观察骨髓基质细胞条件液与神经干细胞联合移植对帕金森病模型大鼠行为认知功能的影响,并与单纯神经干细胞移植效果进行比较。方法：用Neurobasal＋B27培养3~6代的骨髓基质细胞24h后,收集并离心上清液,即为骨髓基质细胞条件液。体外分离培养大鼠神经干细胞后,行BrdU标记。55只大鼠随机取8只作为正常组,剩余47只采用立体定向仪单侧黑质致密部和腹侧被盖区注射6-羟基多巴胺建立帕金森病动物模型。32只造模成功,随机分为3组,选取右侧纹状体两个坐标点为移植点,单纯神经干细胞组每点注入神经干细胞悬液5μL,联合组每点注入神经干细胞悬液＋骨髓基质细胞条件液5μL,模型组不注入任何液体。观察帕金森病大鼠旋转行为的改变,通过水迷宫试验对大鼠认知功能进行评价,免疫组织化学染色检测黑质区酪氨酸羟化酶蛋白的表达及移植区BrdU的表达。结果与结论：与模型组比较,移植后1~8周单纯神经干细胞组、联合组大鼠旋转次数均显著减少（P〈0.01）,移植后第4,8周单纯神经干细胞组、联合组大鼠逃避潜伏期均明显缩短（P〈0.05）,在平台象限的游泳时间百分比、游泳距离百分比、穿越平台次数均明显增加（P〈0.05）;后2组间各指标比较均无明显差异（P〉0.05）。移植后第8周,各组大鼠6-羟基多巴胺注射侧黑质区酪氨酸羟化酶阳性神经元和神经纤维表达基本缺失;单纯神经干细胞组、联合组移植区可见一定数量的BrdU阳性细胞表达,多数位于针道附近,部分细胞沿胼胝体迁移。提示骨髓基质细胞条件液与神经干细胞联合移植能改善帕金森病模型大鼠的旋转行为和认知能力,与单纯神经干细胞纹状体移植的效果基本相似。

神经再生条件液中相对分子质量为22万的蛋白提取与鉴定

目的了解神经再生条件液（never regeneration conditioned fluid,NRCF）中蛋白质成分组成及相对分子质量为220×103的蛋白带中是否存在一类新的尚未知的神经活性因子。方法新西兰大白兔25只,体重1.8～2.5kg,取坐骨神经建立神经再生室模型。术后1周采集NRCF,采用凝胶过滤法分离NRCF中蛋白质,主要分离相对分子质量为220×10^3的蛋白带,应用自然聚丙烯酰胺凝胶电泳（native-polyacrylamide gel electrophoresis,Native-PAGE）法检测其相对分子质量。并对取得的相对分子质量为220×10^3（a峰）和（20～40）×10^3（c峰）的蛋白带,分别应用已知的神经活性因子抗体：抗神经生长因子（nerve growth factor,NGF）抗体、抗胶质细胞源性神经营养因子（glial cell-derived neurotrophic factor,GDNF）抗体、抗脑源神经营养因子（brain-derived neurotrophic factor,BDNF）抗体、抗神经营养素3（neurotrophin 3,NT-3）抗体、抗NT-4抗体、抗睫状神经营养因子（ciliang neurotrophic factor,CNTF）抗体,采用Western blot免疫印迹法和ELISA检测,观察抗原抗体反应。结果经凝胶过滤法分离的NRCF蛋白质,多集中在相对分子质量为（20～40）×10^3和220×10^3。相对分子质量为（20～40）×10^3蛋白带中神经营养因子与抗NGF、抗BDNF、抗NT-3、抗CNTF等抗体反应,相对分子质量为220×10^3的蛋白带所含神经营养因子仅与抗NT-4抗体反应。结论NRCF中相对分子质量为220×10^3的蛋白带仅与抗NT-4抗体反应,且生物活性远强于NT-4,该蛋白带中可能存在一类新的神经活性因子。

BALB/3T3小鼠纤维母细胞的条件液促进培养肥大细胞生长的初步研究

作者对正常和SV_(40)感染的小鼠胚纤维母细胞(BALB/3T3,SV3T3)的条件液(CM)能促进培养细胞的生长作用进行了研究。CM的生长活性用细胞增殖试验(MTT法)检测对来自小鼠骨髓培养的肥大细胞(CMC)的影响,发现来自纤维母细胞CM支持肥大细胞的增殖,且经病毒感染的CM可增进生长活性。

补体C3在周围神经再生条件液中的存在及其神经生物学活性的研究

目的鉴定分析神经再生条件液(Nerver egeneration conditioned fluid,NRCF)中相对分子质量为(232～440)×103区域的蛋白条带,并探索NRCF中补体C3可能的促神经再生作用。方法采用Shotgun蛋白质组学策略、液相色谱一串联质谱对相对分子质量为(232～440)×103区域的蛋白条带的组分进行定性分析。在原代培养的皮层神经元中分别加入不同浓度的外源性补体C3蛋白和神经生长因子,以Neurolucida神经元分析软件采集各实验组每个大脑皮层神经元最长突起长度。结果NRCF中相对分子质量在(232～440)×103的蛋白条带共鉴定到54种蛋白质,其中包括补体C3α链,补体C3α链和神经突起导向因子Netrins结构中都含有一个共同功能域NTR组件。培养液加入特定浓度补体C3(0.5～5μg/mL)后培养96h的神经元突起长度较正常对照组显著增长(P<0.05)。结论补体C3存在于NRCF中,特定浓度补体C3对神经元突起有明显促进生长作用。

关键时间点神经再生条件液特异蛋白分析

目的探讨周围神经再生关键时间点神经再生条件液(NRCF)的特异蛋白及其与不同时期周围神经再生的关系。方法建立周围神经再生室(NRC)模型,提取坐骨神经离断3、7、14和25d的NRCF标本,采用SDS-PAGE电泳、iTRAQ蛋白组学技术和质谱鉴定方法,进行蛋白定性和定量分析。结果坐骨神经离断各时间点NRCF样品蛋白质条带分布较均一,平行度良好,共鉴定出876种蛋白,其中坐骨神经离断3、7、14和25d的NRCF中独特蛋白质分别为95、137、18和58种。结论 NRCF蛋白含量丰富,种类繁多,每个关键时间点的特异蛋白与周围神经再生关系密切。

骨髓间充质干细胞条件液对水牛卵母细胞体外成熟的影响

为了系统研究骨髓间充质干细胞(BMSC)条件液对水牛卵母细胞体外成熟的影响,试验选取骨髓间充质干细胞条件液,测定和分析了骨髓间充质干细胞分泌因子对水牛卵母细胞体外成熟和早期胚胎发育的影响。结果表明:水牛卵母细胞成熟液中添加培养3d的10%骨髓间充质干细胞条件液,水牛卵母细胞体外成熟率和随后胚胎发育卵裂率及囊胚率显著提高(P<0.05)。说明骨髓间充质干细胞条件液有利于水牛卵母细胞的体外成熟及随后早期胚胎发育潜能的获得。

骨髓基质细胞条件培养液对中脑神经干细胞分化的影响

目的 :探讨骨髓基质细胞条件培养液诱导中脑神经干细胞分化为高比例神经元的机制。 方法 :采用骨髓基质细胞条件培养液培养中脑神经干细胞 7d ,通过免疫细胞化学染色方法鉴别和计数神经元的数量 ,并与自然分化组、骨髓基质细胞膜片段组、骨髓基质细胞固定组以及骨髓基质细胞共培养组相比较。 结果 :用成年大鼠骨髓基质细胞的条件培养液体外培养新生大鼠中脑神经干细胞 ,神经干细胞分化为神经元比例 [(40 .5± 14 .5 ) % ]明显高于自然分化组 [(16 .6± 10 .5 ) % ]、骨髓基质细胞膜片段组 [(2 0 .8± 12 .5 ) % ]以及骨髓基质细胞固定组 ,但与骨髓基质细胞共培养组 [(36 .1± 9.7) % ]相比无统计学差异 (P >0 .0 5 )。 结论

肺癌脑转移型A549/GFP-2细胞的筛选及其条件液对脑微血管内皮细胞的作用

目的:建立肺癌脑转移模型,筛选脑转移倾向细胞A549/GFP-2,探讨A549和A549/GFP-2条件液对脑微血管内皮细胞的作用,揭示肺癌脑转移的机制。方法:利用胸腔原位注射法筛选出A549脑转移细胞亚型A549/GFP-2,原代培养大鼠脑微血管内皮细胞,观察A549和A549/GFP-2细胞条件液对脑微血管内皮细胞增殖的影响和细胞内HIF-1α和VEGF表达的改变。结果:胸腔内原位种植较好地反应了临床肺癌脑转移的过程。不同浓度的A549和A549/GFP-2细胞条件液对脑微血管内皮细胞增殖的影响不同,低浓度(<30%)对脑微血管内皮细胞有促进的作用;高浓度(>60%)对脑微血管内皮细胞的增殖有不同程度的抑制作用,且有随浓度增加抑制作用增强的趋势。A549和A549/GFP-2细胞条件液能提高脑微血管内皮细胞内HIF-1α和VEGF的表达。结论:胸腔内原位种植是建立肺癌脑转移的稳定模型。肺癌脑转移与肺癌细胞在生长过程中分泌的HIF-1α和VEGF等细胞因子破坏了脑微血管内皮细胞的结构有关。

神经再生条件液对成纤维细胞和施旺细胞的生物学活性影响

目的探索神经再生条件液对体外培养的大鼠成纤维细胞和施旺细胞的生物学活性影响。方法用含有不同浓度的NRCF的培养基连续培养成纤维细胞和施旺细胞24h，用CCK-8法检测细胞增殖；用流式细胞仪检测细胞周期，免疫荧光法检测施旺细胞去分化。结果随着神经再生条件液浓度的提高及神经再生条件液对细胞作用时间的增加，成纤维细胞和施旺细胞的增殖呈上升趋势；神经再生条件液对成纤维细胞和施旺细胞的细胞周期改变发生在S期；神经再生条件液能够促进施旺细胞去分化。结论神经再生条件液能够促进成纤维细胞的增殖并促进施旺细胞的增殖和去分化。

大脑皮层细胞低氧条件液诱导神经干细胞分化及其可能的信号转导通路

本研究旨在分析大鼠大脑皮层细胞低氧条件液对神经干细胞(neural stem cells,NSCs)分化的影响,并探讨P13-K和JNK两条信号通路在此过程中的作用。原代培养出生后24 h内SD大鼠大脑皮层细胞5 d后,全量换液并分别在4%O_2、1%O_2和常氧浓度环境下继续培养细胞6 h以制备低氧条件液和常氧条件液。用三种条件液及结合使用P13-K、JNK信号通路抑制剂LY294002和SP600125培养NSCs,使用免疫荧光双标法鉴定NSCs后代细胞表型,并计算每种表型细胞在后代细胞中所占比例,以分析不同条件下NSCs的分化情况。结果显示,在三种条件液培养下NSCs分化出神经元的比例均高于星形胶质细胞的比例;与常氧条件液组比较,4%低氧条件液促进了NSCs向神经元方向分化(P<0.01),而1%低氧条件液则抑制了NSCs向神经元方向分化(P<0.01)。在4%低氧条件液中使用LY294002和SP600125均抑制了NSCs向神经元方向分化(P<0.01),且LY294002抑制作用较SP600125大(P<0.01)。以上结果提示,4%低氧条件液能促进大脑皮层NSCs向神经元方向分化,且P13-K信号通路在此过程中发挥主要作用。

热液条件下SiO_2和SnO_2生长形态的形成机制

本文研究了热液条件下，水晶和锡石的结晶形态和生长机制的关系，提出了水晶和锡石的生长基元为配位负离子多面体结构。在生长条件和溶液过饱和度不同时，生长基元的维度也不同，而不同维度的生长基元往晶体各族晶面上叠合的速率也有差异。由于各族晶面生长速率的变化，导致晶体结晶形态上的多变性。本文结合实验讨论了水晶和锡石的结晶习性和形成机理。

马尾松优良菌根真菌(S.l)液培条件的研究

作者经过对褐环乳牛肝菌［Ｓｕｉｌｕｓｌｕｔｅｕｓ（Ｌ．ｅｘＦｒ．）Ｇｒａｙ］的一系列研究，业已证明它是我国亚热带地区特有树种马尾松（ＰｉｎｕｓｍａｓｏｎｉａｎａＬａｍｂ．）共生的优良菌根真菌。它具有生长快速、繁殖容易、拮抗性强、适生范围广、制剂简便、...

热液条件下BGO微晶粒结晶习性形成机理

本文研究了热液条件下ＢＧＯ（Ｂｉ＿（１２）ＧｅＯ＿（２０）．Ｂｉ＿４Ｇｅ＿３Ｏ＿（１２））微粒结晶习性形成机理。根据热液条件下晶体生长基元为负离子配位多面体结构的理论模型，设计了生长ＢＧＯ晶粒时Ｂｉ－Ｏ＿６八面体和Ｇｅ－Ｏ＿４四面体的比例和生长工艺。制备出结晶完好的晶粒，提出Ｇｅ－Ｏ＿４四面体结晶方位与各个面族之间的显露规律。Ｂｉ＿（１２）ＧｅＯ＿（２０）晶体中｛１１１｝面族顽强显露，晶粒呈三次对称，表现出极性晶体的生长特征。Ｂｉ＿４Ｇｅ＿３Ｏ＿（１２）晶粒为五角二十四面体｛３２１｝，呈球形，根据生长基元为Ｇｅ－Ｏ＿４四面体和Ｂｉ－Ｏ＿６八面体与晶粒各个面族上Ｇｅ－Ｏ＿４四面体和Ｂｉ－Ｏ＿６八面体连接的稳定性，解释了晶粒的结晶习性机理。

热液条件下CO_2和H_2反应产烃研究进展

热液条件下CO2和H2形成烷烃的反应,提供了自然条件下CO2转化为有机质的一条非生物途径。研究这一过程,对于油气费托非生物成因研究和海底热液生命起源的讨论具有重要意义。已有研究表明,热力学有利的温度、压强条件和合适的催化剂,是热液条件下CO2和H2发生反应形成烷烃的必需条件。在热力学有利的条件下,铬铁矿能够催化反应形成CH4、C2H6和C3H8,但还不清楚是否存在能够促使反应产生C4H10等长链烷烃的天然矿物催化剂。含一种或多种过渡金属元素的磁铁矿,可能是值得考察的对象。另外,研究热液条件下CO2和H2反应形成烷烃的过程和机理,建立反应所形成烷烃的C、H同位素综合判识指标,是今后值得探索的研究课题。

在成岩和热液条件下由沉积有机质引起的铀沉淀动力学

在成岩或热液条件下(180～200℃)实验测定了由两种不同成熟度褐煤引起的铀酰阳离子在水溶液中生成品质铀矿的还原动力学。不论是铀酰的还原作用,还是观察到的褐煤的脱氢作用,都证实了以前的机理假设。铀酰阳离子与有机质的还原作用为一级反应。在实验中利用两种不同褐煤所研究的还原作用、脱氢作用和实测的活化能都在实验误差范围之内。铀酰还原作用的活化能值为115±15kJ·mol^(-1),褐煤脱氢作用的活化能值为59±13kJ·mol^(-1)。通过假定决定速度的阶段为铀酰还原成晶质铀矿以及根据测定的动力学参数,进行了水溶液中铀半衰期估算,其结果表明了铀沉淀速率的一个粗略时间尺度,它在事先测定的指数系数方面具有很大的不确定性。铀沉淀半衰期估算为:在一般热条件(200～100℃)下约为3h～1a,对放射性废物处置库(50℃)为340a,在地表条件下为10~4～10~5a。

液淬条件对非晶态合金制备、脆化和晶化的影响

研究了用单辊法制备非晶态合金条带时，冷却辊表面线速、熔体射流压力、喷射距离等参数对非晶态Ｆｅ３０Ｂ１１．４Ｓｉ３．５合金条带的形成、条带结构、性能及其退火脆化和晶化的影响。液淬工艺参数的合理配合下获得的足够高的液淬速率是得到非晶结构的关键，也是制备质量条带的决定因素。液淬速率愈高，条带厚度愈小，其脆化敏感性愈低。因此，高液淬速率下薄带的制备，有益于提高非晶态合金脆化抗力。非晶合金的晶化与液淬条件之间不存在直接的联系。

基于充液条件下履带车辆液力制动器性能的分析

通过分析计算,液力制动器的制动扭矩与充液率有关,相对于制动器容腔体积的充液率越大,制动力矩越大。当需要制动时,应很快使腔内充满油,以发挥最大制动效能。因此希望液力制动器工作腔体积尽量小,而供油泵的流量和工作腔入口流道面积应尽量大。