水稻条叶枯病毒(RStV)基因组组分4的克隆与序列分析

利用ＲＴＰＣＲ技术合成并扩增了水稻条叶枯病毒（ＲＳｔＶ）中国云南分离物基因组组分４的全长ｃＤＮＡ，将ＰＣＲ产物克隆在载体ｐＣＲＩ上，并进行全序列测定，所得核苷酸序列及推测的氨基酸序列与日本分离物Ｔ进行比较。结果表明，在核苷酸水平，两分离物的ｖＯＲＦ、ｖｃＯＲＦ及基因间非编码区序列的同源性分别为９４９％、９４１％、８６１％，５’端非编码区序列相同，而３’非编码区同源性为９６１％，仅有两个核苷酸不同；在氨基酸水平，ｖＯＲＦ及ｖｃＯＲＦ编码蛋白的同源性分别为９９４％和９８３％。可见，编码区的大小及其氨基酸序列和两末端序列都是很保守的。因此，中国云南分离物Ｙ与日本分离物Ｔ可能有很近的亲缘关系。

温度和水分对无芒隐子草和条叶车前种子萌发的影响

研究了无芒隐子草 (Cleistogenessongorica)和条叶车前 (Plantago lessingii)种子萌发对不同温度和水分渗透势的响应。温度在 10℃恒温至 5 0 /2 0℃变温范围内设 11个处理 ,水分渗透势在 0～ - 1.8MPa区间以 0 .2 MPa为间隔设 10个处理。结果显示 :无芒隐子草鞘内小穗的种子具有很高的生活力 ,其萌发温度幅较宽 ,在 10～ 5 0 /2 0℃温度区间 ,较高温度促进萌发 ;条叶车前种子萌发温度幅较窄 ,在 10～ 30℃温度区间 ,较低温度促进其萌发。无芒隐子草和条叶车前种子的最佳萌发温度分别为35 /2 0℃变温和 2 0℃恒温 ,在此条件下的发芽率分别达 94 %和 6 1% ,后者发芽率低的原因是种子存在生理休眠。两种植物种子萌发的最低水分阈值为 - 1.6 MPa,发芽率皆随渗透势降低而呈直线下降趋势 ,但条叶车前较无芒隐子草下降缓慢。发芽率 (y)与渗透势 (x)的回归方程 ,无芒隐子草为 y1 =- 10 .976 x1 +98.4 (r2 =0 .95 4 ) ,条叶车前为 y2 =- 5 .90 9x2 +6 0 .2 (r2 =0 .96 4 )。随着水分胁迫的加剧 ,供试种胚芽长呈逐渐下降趋势 ,但胚根长呈先增加 (无芒隐子草在 - 0 .6 MPa,而条叶车前在 - 0 .4 MPa)而后下降的趋势。

条叶百合种子萌发的研究

研究了不同光、温对条叶百合 (Liliumcallosum)种子萌发的影响。研究结果表明 :( 1 )避光条件下温度对栽培 4年生条叶百合种子萌发影响最大 ,其种子萌发最适宜温度为 2 5℃ ,4～ 5天开始萌动 ,1～ 2周萌发完全。随着温度的升高或降低其种子萌发率下降。但在 5℃时萌发率又有大幅升高 ,35℃种子萌发完全受到抑制。 ( 2 )同一果序不同位置果实的种子萌发以最下部果实为好 ,中间果实次之 ,上部最差。 ( 3)同一果实内中部种子萌发最好 ,下部种子次之 ,上部种子最差 ,上、中、下三部分种子萌发率与其千粒重呈正相关。 ( 4 )在相同实验条件下 ,野生条叶百合与栽培 4年生条叶百合种子萌发率一致 ,但萌发完全时间比栽培条叶百合多 1 4天。 ( 5 )贮藏一年后条叶百合种子萌发率没有下降。

条叶百合×王百合种间杂种的育成

为培育新的百合品种，利用抗性强的野生条叶百合（Ｌｉｌｉｕｍｃａｌｏｓｕｍ）为母本及花筒状、白色的王百合（Ｌｒｅｇａｌｅ）为父本，进行种间杂交。常规授粉的结果，座果率２６％，得到有胚种子占８％；杂种种子在重量、大小及发芽率上均小于亲本，发芽势介于亲本之间；杂种种子为子叶出土萌发类型，与亲本一致。利用种子根尖为材料，所观察到的染色体形态表明，杂种染色体基本具有双亲染色体的特征，说明杂种真实可靠。条叶百合与王百合虽然形态差异大，分类学上分属不同的两个组，但它们之间有一定生殖亲和力，杂种幼苗根系发达，生命力较强。

光照、盐分和埋深对无芒隐子草和条叶车前种子萌发的影响

光照、盐分和埋深对无芒隐子草(Cleistogenes songorica)和条叶车前(Plantago lessingii)种子萌发的影响研究结果显示,无芒隐子草和条叶车前种子为萌发需光性种子。随着盐(NaCl)浓度的增加,2种植物种子的发芽率呈直线下降趋势(P<0.01),但以条叶车前下降较为缓慢。当盐分浓度为0.4 mol.L-1时,2种植物种子皆不能萌发。低浓度的盐分促进胚根的生长,高浓度则表现为抑制作用;盐分对胚芽的生长则一直起抑制作用。2种植物种子发芽率随埋深的增加而减小,当埋深>2 cm时不能萌发。

HPLC-Q-TOF MS鉴定条叶榕根茎乙酸乙酯提取物中的主要化学成分

采用高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱(HPLC-Q-TOF MS)技术对条叶榕根茎乙酸乙酯提取物中的多种活性化学组分进行了分析鉴定。采用正离子与负离子两种扫描方式,依据高分辨质谱提供的准分子离子峰和碎片离子的精确分子质量信息,确证了有关物质及其特征碎片离子的分子组成。再结合标准品对照与相关文献数据支持,最终鉴定出条叶榕根茎乙酸乙酯提取物中的34种化学成分,其中包括12种多酚、8种香豆素、9种黄酮、4种脂肪酸、1种蒽醌。结果表明,采用HPLC-Q-TOF MS技术可提高中药化学成分的分析效率,有利于新化合物的发现与鉴别。

无芒隐子草和条叶车前种子破除休眠研究

对无芒隐子草和条叶车前种子休眠特性和破除休眠的方法进行了研究。结果表明,35/20℃变温可有效破除无芒隐子草种子的休眠,20℃恒温条件下,0.02%,0.05%和0.10%GA3都可有效破除条叶车前种子的休眠,二者休眠均属于胚休眠类型;而25/10,25/15,30/20,40/20和50/20℃变温都不能破除无芒隐子草种子休眠;20/10,25/10,25/15和30/20℃变温,0.2%KNO3和60%,70%,80%,90%H2SO4浸泡处理均不能破除条叶车前种子休眠。0.02%GA3处理不同时段的条叶车前种子а 淀粉酶活性均高于对照,其中以培养24h相差最大,为对照的11.3倍。GA3诱导条叶车前种子大量萌发前48h出现а 淀粉酶活性高峰,而对照出现在大量萌发前108h。无芒隐子草和条叶车前标准发芽初次统计时间分别在第3和第3天,末次统计时间应分别在第10和第8天。

条叶唇柱苣苔组织培养研究

以条叶唇柱苣苔(Chirita ophiopogoides D Fang et W T Wang)的幼嫩叶片、种子为外植体,以MS为基本培养基,建立了条叶唇柱苣苔的组织培养和再生体系。试验结果表明:条叶唇柱苣苔叶片诱导不定芽的最佳培养基为MS+2,4-D0.5 mg/L+IAA 0.5 mg/L+NAA 0.2 mg/L,丛生芽分化的最佳培养基为MS+KT 1.0 mg/L+IAA 3.0 mg/L+NAA 0.5mg/L;MS+NAA 0.5 mg/L+6-BA 1.5 mg/L的培养基最适合继代,MS+IBA 2.0 mg/L+AC 0.5 mg/L培养基的生根效果最好,平均根长为4.67 cm,生根率达100%。

条叶龙胆药材资源变化及未来发展建议

从本草记载开始阐述了龙胆药材4种基源植物中质量最优的条叶龙胆资源的变化。条叶龙胆野生资源的开发是按由南到北的顺序进行的。我国东北地区条叶龙胆的开发较晚,但由于龙胆的生物学特性及草原破坏等多种原因,在几十年的时间内野生资源便遭到了严重破坏。目前野生资源接近枯竭,栽培严重滞后,致使这一优质龙胆药材市场占有率不断降低。条叶龙胆的可持续发展必须以栽培为主,而育种、栽培技术等与高产密切相关的措施的优化与推广等问题急需解决。

水稻条叶枯病毒基因产物在水稻和昆虫体内的Western印迹分析

将AStV基因组组分3编码的NS3和NC蛋白基因以及组分4编码的NCP和NSvc4蛋白基因分别克隆于大肠杆菌表达载体pGEX3X在IPTG诱导下，表达出4种融合蛋白。这些表达产物用于免疫动物产生多克隆抗血清。以制备的多克隆抗血清为探针，Western印迹分析了宿主植物和介体昆虫体内NS3、NC、NCP和NSvc4种基因表达的产物。NC蛋白的抗体可在病株和病毒粒子制备物中以及NCP抗血清仅在病株中检测到相应大小的产物，其余的均与预期值相停。

水稻条叶枯病毒NS2基因遗传多样性分析

应用单链构象多态性 (SSCP)和序列分析方法研究了来自我国 9个省份的水稻条叶枯病毒(RSV) 80个田间分离物的NS2基因遗传结构特征 .SSCP分析结果表明 ,我国RSVNS2基因遗传结构符合准种 (quasispecies)结构特征 .部分分离物的序列分析结果表明 ,RSV上述分离物和已报道的日本 2个分离物可以归入 2个组 :云南的部分分离物划分为 1个组 ;其它分离物及日本T、O的 2个分离物为另 1组 .组与组之间 ,NS2蛋白基因核苷酸同源性为 94 %～ 95 % ,氨基酸同源性为 95 %～ 97% .遗传多样性分析结果表明 ,RSV种群存在地理隔离但在种群间可能发生了基因漂移 (geneflow) .

无芒隐子草和条叶车前种子萌发特性的研究

研究了无芒隐子草和条叶车前种子千粒质量大小和环境温度对其发芽率和幼苗生长的影响。结果表明,无芒隐子草和条叶车前种子的千粒质量分别为0.238g和1.770g。无芒隐子草种子萌发对环境温度适应性较强,能在10～50/20℃温度区间萌发,较高温度促进萌发;条叶车前种子萌发对环境温度适应性较弱,在10～30℃温度区间,较低温度促进其萌发。无芒隐子草和条叶车前种子的最佳萌发温度分别为35/20℃变温和20℃恒温,在此条件下的发芽率分别达94%和61%。

条叶百合的开花生物学特性研究

以栽培和野生的条叶百合为对象,对其开花年龄、花期、开花动态、花部变异、授粉试验和传粉媒介检验等进行了生物学特性的初步研究。结果表明：2年生条叶百合抽茎率为50.60%,开花率33.38%; 3年生植株全部开花。群体花期22 d,开花高峰持续7-8 d 花的起始开放时间在15：30以后,单花开放过程约2-3 h,单花花期为4 d。栽培第2年植株花瓣缺失或畸形的比例明显比自然环境的增多,雄蕊退化和雄蕊长于雌蕊的比率随着栽培时间的增加而增加,雌蕊退化比率随着栽培时间的增加而减少。条叶百合以虫媒、异花授粉为主,虽自交可育,但坐果率较低。从开花前2天授粉到开花第3天时,授粉的每个蒴果所结饱满种子与坐果率都呈明显的递增趋势,开花次日和开花第3天时,其雌蕊的可授性最佳。

条叶百合和垂花百合高效快繁体系的建立

以条叶百合和垂花百合的鳞片为外植体,应用均匀设计法对各步骤各主要因子和水平的作用进行了试验探讨.结果表明:条叶百合鳞茎诱导最适宜的培养基为N6+0.05 mg.L-1IAA+0.01 mg.L-1NAA+0.50 mg.L-1KT,诱导率为95.5%,鳞茎萌发为完整植株的最佳培养基为N6+0.01 mg.L-1IAA,萌发率为94%;垂花百合鳞茎诱导最适宜的培养基为N6+0.05 mg.L-1IAA+0.50 mg.L-1KT,诱导率为95%,鳞茎萌发为完整植株的最佳培养基为N6+0.01 mg.L-1IAA+0.001 mg.L-1NAA,萌发率为92.5%.以鳞茎的切片为材料进行快繁的结果表明,在35-40 d的一个培养周期内,增殖系数达10以上.对不同阶段培养材料的形态及超微结构的观察证明了2种百合的鳞茎发生发育过程.

条叶唇柱苣苔离体快繁技术研究

以叶片为外植体,对条叶唇柱苣苔(Chirita ophiopogoides)进行离体培养与快速繁殖研究。结果表明:培养基MS+6-BA0.1 mg/L+NAA 0.1 mg/L适用于初代培养中的芽诱导和植株再生;培养基MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.1 mg/L+香蕉10%+马铃薯5%和MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.5 mg/L+香蕉2%分别适用于继代增殖和壮苗培养,繁殖系数分别为7.9倍/60 d和5.6倍/60 d;培养基MS适用于生根培养,培养30 d,生根率100%;以腐质土为移栽基质,对条叶唇柱苣苔生根试管苗进行大棚移栽,成活率92.5%。根据上述快繁技术,理论上每株试管苗每年可繁殖条叶唇柱苣苔种苗20 176株。

条叶榕营养成分分析及黄酮含量的测定

以野生条叶榕为研究对象,对其叶、茎、根的化学营养成分、氨基酸组成、矿质元素组成进行了分析。同时,对条叶榕总黄酮的测定条件进行了分析,并测定其总黄酮含量。结果表明,条叶榕的叶、茎和根均富含蛋白质、粗脂肪、粗纤维、总糖、维生素C,其叶中的含量最高;条叶榕中氨基酸种类齐全,必需氨基酸与总氨基酸比例合理;条叶榕富含Cr、Mn、Fe、Cu、Zn、As、Se、Ag、Cd、Hg和Pb,其中Mn、Fe、Zn的含量较高;采用盐酸-镁粉显色法测定条叶榕中总黄酮含量,该方法简便、快速、准确,测得其总黄酮含量为12.74g/kg。测定结果说明,条叶榕具有一定的营养保健功能。

栽培条叶龙胆根中龙胆苦苷含量差异的研究

采用高效液相色谱法 ,测定栽培条叶龙胆根中龙胆苦苷的含量 ,结果表明 :花末期 ( 9月 3日 )龙胆苦苷含量高于果期 ( 9月 1 8日 )和枯萎期 ( 1 0月 1 0日 ) ;同一根系中二龄根的含量显著高于一龄根 ;有性后代个体之间龙胆苦苷含量差异显著 。

条叶兼用生态桑树新品种冀桑4号的选育

为促进北方地区桑树生态产业的发展,开展条叶兼用生态桑树优良品种的选育。从河北省保存的桑树种质资源中筛选出抗旱耐寒和丰产性能好的育种材料,以桑叶、桑条的产量和品质为目标性状,进行株系选择及抗旱性试验和产量、品质性状鉴定试验,并进一步通过区域试验选育出桑树新品种冀桑4号。该品种具有抗旱、耐寒、耐瘠薄和生长旺盛的特点,在条叶兼用生态桑树的特定收获方式下,产叶量和产条量分别为6.85、13.44 t/hm2,比养蚕专用桑树品种冀桑2号提高4.74%、70.78%;桑叶和桑条的品质优良,100 kg桑叶产茧量和100 kg桑叶茧层量分别比冀桑2号提高5.85%、7.49%,桑条作为造纸原料的综合品质优于红皮花桑和条墩桑1号。该品种已通过河北省林木品种审定,适宜在北纬42°以南、海拔500 m以下的北方干旱山地和沙地用于生态造林或作为粮、油作物的间作树木。

条叶龙胆愈伤组织培养及龙胆苦甙形成

应用单因子和正交设计试验,研究了条叶龙胆(Gentiana manshurica Kitag.)愈伤组织生长和龙胆苦甙形成的适宜培养基。结果表明:对于愈伤组织生长,植物激素以 NAA 1mg/L+KT 0.5mg/L为最好,但龙胆苦甙形成的适宜植物激素为NAA1mg/L。B5培养基有利于愈伤组织生长,而龙胆苦甙在MS培养基上形成较多。正交设计试验表明:NH_4^+/NO_3^-,K^+,Ca^(2+)和蔗糖对愈伤组织鲜重、干重,龙胆苦甙含量有显著影响。但愈伤组织生长和龙胆苦甙形成,所要求的因子水平不同。在18组培养基中,7号培养基适合愈伤组织生长,而10号培养基有利于龙胆苦甙的形成。

条叶龙胆根培养物中龙胆苦苷的产生和含量

条对龙胆愈伤组织中龙胆苦苷含量较低,根的分化可以提高龙胆苦苷的含量。培养的离休根中龙胆苦苷的含量则更高。随着继代次数的增加,愈伤组织中龙胆苦苷含量下降快,而分化根的愈伤组织和离体培养根中龙胆苦苷含量下降较慢。在愈伤组织的液体培养中,1/2MS培养基附加低浓度的植物激素,龙胆苦苷含量有所提高。植物激素配比促进愈伤组织中分化根的形成,也促进龙胆苦苷的产生;但促进愈伤组织的生长时,不利于龙胆苦苷产生。在离体根培养中,添加 1mg/L的金雀花碱,促进龙胆苦苷的产生,含量可达1.48％,明显高于愈伤组织(0.52％)和分化根的愈伤组织(0.65％),也高于试管苗根的龙胆苦苷含量(1.01％)。