脂多糖对中性粒细胞核转录因子-κB活性的影响

目的:探讨在脂多糖(LPS)刺激下,中性粒细胞核转录因子-κB(NF-κB)活性变化及其抑制因子(IκBα)的影响。方法:离体培养人中性粒细胞,分为来普霉素B(LMB)干预组(A组)、LPS刺激组(B组)和LPM+LPS组(C组)。各组分别在刺激后0、15、60、120min,用NF-κBp65试剂盒检测细胞核NF-κB活性,用Western-blot检测细胞核、浆中IκBα含量。结果:A组中各时相点NF-κB活性无明显变化;同一时相点细胞核、浆之间,以及不同时相点细胞核之间、细胞浆之间IκBα含量无明显变化。B组LPS刺激后,NF-κB活性较0点时明显增强;细胞核、浆中各时相点IκBα较未刺激时显著降低;细胞核、浆中呈现一致性变化。C组NF-κB活性于60min时点后,较B组同时相点明显受抑制;胞浆中IκBα于60min时较B组明显减少,而核中IκBα于60min后较B组明显增加。结论:NF-κB活性与核中IκBα含量呈负相关;IκBα在中性粒细胞存在核浆穿梭,通过抑制IκBα核浆穿梭,可显著降低NF-κB活性。

Importin-8、CRM1对miR-122在肝细胞核进出的影响探究

为探究肝脏细胞核中miRNAs的生理功能,首先获得肝脏细胞核中高表达的miRNAs,并且分别抑制miRNA进核和出核的核转运蛋白表达,进一步探究miRNA在细胞核与细胞质转运的机制。采用细胞核提纯技术,分别提取了人肝癌细胞系Hep3B和Huh-7细胞核,利用miRNA基因芯片技术(miRNA microarray)检测细胞核中miRNA的信号值表达情况;利用基于TaqMan探针的实时荧光定量PCR(quantitative real-time,qRT-PCR)技术,验证细胞核中表达量高的miRNA;最后分别抑制miRNA的进核和出核转运蛋白,探究转运蛋白对细胞核miRNA转运的影响。结果表明,核转运蛋白Importin-8与CRM1分别负责miR-122在肝脏细胞的进核与出核。

不同分子亚型乳腺癌细胞系中RUNX3蛋白表达及定位研究

目的:检测人类Runt相关转录因子3(RUNX3)在不同分子亚型乳腺癌细胞系中的表达及其亚细胞定位情况,为进一步揭示RUNX3的失活机制和发现新的治疗靶点提供理论依据。方法:在5种乳腺癌细胞(MCF-7、T47D、SKBR-3、MDA-MB-231和BT-549)及正常乳腺上皮细胞(MCF-10A)中,通过Western blot和免疫荧光实验检测RUNX3的蛋白表达和亚细胞定位情况;采用来普霉素B(Leptomycin B)抑制RUNX3的出核,利用CCK-8法检测细胞活力的改变,EdU染色检测细胞增殖情况,Western blot和免疫荧光实验检测RUNX3的蛋白表达和亚细胞定位的改变。结果:与MCF-10A细胞相比,5种乳腺癌细胞系中RUNX3的核定位减少、胞浆定位增多。经Leptomycin B处理后,CCK-8实验结果显示5种乳腺癌细胞的活力明显减弱,EdU染色显示5种乳腺癌细胞增殖能力明显降低,Western blot和免疫荧光实验显示5种乳腺癌细胞胞浆中的RUNX3蛋白表达量明显降低、胞核中的RUNX3蛋白表达量明显增多(P<0.05)。结论:不同分子亚型乳腺癌细胞中均存在RUNX3的胞浆转位失活现象,针对性地逆转RUNX3的出核过程可以明显降低肿瘤细胞的活力和增殖能力,可能成为乳腺癌潜在的治疗靶点。