循环游离DNA在常见肿瘤中的临床应用进展

循环游离DNA (cell-free DNA, cfDNA)容易采集和无创的优点使其在肿瘤早期诊断、良恶性鉴别、疗效检测、预后评价等临床应用中受到广泛的关注。此外,cfDNA还可以反映肿瘤大小、肿瘤转移等。为此,本文综述了cfDNA的临床应用,以期为临床疾病的诊断、疗效分析提供帮助。

磁共振动态增强结合血循环肿瘤细胞、循环游离DNA对乳腺癌的临床诊断研究

目的探讨磁共振动态增强(DCE-MRI)结合血循环肿瘤细胞(CTCs)、循环游离DNA(cfDNA)对乳腺癌的诊断价值。方法选取沧州市人民医院2020年6月至2021年11月符合纳入标准的乳腺癌病人82例(乳腺癌组)。另选同期65例乳腺良性病变且未合并其他疾病者作为良性组。比较两组DCE-MRI定量参数、CTCs、cfDNA水平,对比MRI特征,分析DCE-MRI结合CTCs、cfDNA诊断乳腺癌的价值。结果乳腺癌组DCE-MRI定量参数速度常数(K^(trans))值、速率常数(K_(ep))值、Alu247/115水平及CTCs计数分别为(0.18±0.04)min、(1.32±0.27)min、(12.97±2.14)个/毫升、0.97±0.32,比良性组高(0.05±0.01)min、(0.51±0.11)min、(10.15±1.45)个/毫升、0.55±0.12(P<0.05)。良性组边缘多光滑,形状规则,内部强化以均匀为主,时间-信号强度曲线(TIC)以Ⅰ型多见,早期增强率<60%;乳腺癌组边缘毛刺征、形状不规则,内部不均匀强化为主,以TIC分型Ⅲ型多见,早期增强率<60%占比高。两组MRI形态表现比较差异有统计学意义(P<0.05)。淋巴结转移、Ⅲ~Ⅳ期者CTCs数量、Alu247/115水平明显高于无淋巴结转移、Ⅰ~Ⅱ期者(P<0.05)。受试者操作特征(ROC)曲线分析结果显示,三者联合(DCE-MRI+CTCs+cfDNA)诊断乳腺癌的曲线下面积(AUC)、灵敏度、特异度分别为0.86、0.93、0.84,诊断效果优于单一检测CTCs、cfDNA检测(P<0.05)。结论乳腺癌病人CTCs、cfDNA存在异常表达,可能与病人临床分期、淋巴结转移有关,相对单一实验室检测,DCE-MRI结合CTCs、cfDNA检测能获取更多可靠信息。

游离DNA甲基化在非肿瘤性疾病中的应用研究进展

游离DNA已成为新兴的、非侵入性的重要临床样本类型,游离DNA甲基化具有组织特异性,可以反映来源细胞的DNA甲基化状态,在临床疾病诊疗中可能成为重要的潜在标志物。该文旨在综述近年常用的游离DNA甲基化检测技术,以及游离DNA甲基化在神经退行性疾病、精神性疾病、心血管疾病、糖尿病和出生缺陷等非肿瘤疾病中的应用研究进展。

循环肿瘤细胞及游离DNA甲基化在胃癌中的研究进展

胃癌目前仍是我国发病率和死亡率最高的恶性肿瘤之一,5年生存率仅10%左右,因此肿瘤早期诊断是临床亟待解决的问题.近十年来,血液循环肿瘤细胞(circulating tumour cell,CTCs)和循环肿瘤DNA(circulating tumour DNA,ctDNA)因其具有无创、实时检测和早于影像学检查结果等优点,得到了肿瘤学界的广泛关注,被称为"液体活检".大量的文献报道CTCs和ctDNA甲基化在肿瘤诊断、疗效监测和预后评估方面具有价值.本综述系统介绍CTCs和ctDNA的生物学特性以及在胃癌临床中意义、临床转化前景和挑战.

外周血液中循环肿瘤细胞和循环游离DNA检测在乳腺癌患者中的应用

目的探究外周血液中循环肿瘤细胞(CTCs)和循环游离DNA(cfDNA)检测在乳腺癌患者中的应用效果。方法收集本院2018-02—2019-02收治的94例乳腺癌患者、48例乳腺良性疾病患者及56例健康体检者外周血液标本,采用基于尺寸的高通量微流控芯片捕获CTCs、基于Alu序列的实时荧光定量PCR检测游离DNA长、短片段(247 bp、115 bp),并以长、短片段扩增产物比值作为DNA完整性指标。分析CTCs和cfDNA与乳腺癌临床参数的关系,并评估其在乳腺癌诊断中的作用。结果乳腺癌患者在CTCs、血浆cfDNA的基于Alu序列的Alu 247/115的比值上显著比健康体检者、乳腺良性疾病者高(P<0.05),乳腺癌患者外周血中CTCs的数量与血浆cfDNA的基于Alu序列的Alu 247/115的比值在年龄、病理分期、淋巴结转移、分子分型、远处转移、PR有一定的相关性(P<0.05),以病理学结果作为金标准,以约登指数最大点对应的临界值,以乳腺良性疾病患者和健康体检者作对照,当CTCs cut-off值为7.68个/ml,灵敏度为80.4%,特异度为96.4%,ROC曲线下面积为0.885(95%CI 0.805~0.965);Alu 247/115的cut-off值为0.431时,特异度为71.4%,ROC曲线下面积为0.727(95%CI 0.608~0.847),灵敏度为71.7%。结论 CTCs与cfDNA可能是乳腺癌辅助诊断的潜在生物学指标,CTCs检测的是肿瘤细胞,cfDNA检测的是肿瘤的DNA片段,可作为判断乳腺癌患者的病情变化和诊断的良好辅助指标,此方法值得应用与推广。

肺癌患者血清中游离DNA含量与肿瘤标志物相关性分析

通过对52例肺癌患者、8例肺部良性疾病患者和10名健康人血清游离DNA含量与肿瘤标志物（TM）CA19-9、CA125、CYFRA21-1、CEA和NSE的联合检测，对两种检测结果作相关性分析。将表皮生长因子受体（EGFR）作为肿瘤基因标志物，运用荧光定量RT-PCR方法检测血清游离DNA含量。结果显示，10名健康人血清游离DNA含量平均为18．81ng／mL（范围：0．17～54.64ng／mL）。若以19ng／mL作为血清游离DNA含量的阳性临界值，则87．5％的健康人低于此水平。8例肺部良性疾病患者游离DNA含量均值为76．86ng／mL（范围；5．33～189．7ng／mL），其中4例（50％）高于阳性临界值。52例肺癌患者游离DNA均值为107．6ng／mL（范围：6．39～1617ng／mL），37例（71．2％）的肺癌患者血清游离DNA含量高于正常值。血清游离DNA含量诊断肺癌的价值等同于肿瘤标志物五项指标联合检测。其灵敏度、特异性、准确性分别为：71．15％，50％，68．3％，提示血清游离DNA含量作为一项新颖肿瘤标志物具有潜在的临床诊断价值。

晚期胃肠道肿瘤患者血浆游离DNA片段的检测、定量

目的探讨肿瘤患者循环血液中DNA改变，及对提高肿瘤患者治愈率和生存率的临床实际意义。方法随机采集了2004年10月-12月大连医科大学附属二院经病理确诊的初治晚期胃、大肠癌患者的血标本18份，门诊健康体检者血标本16份，通过酚／氯仿提取法定量检测两组的血浆DNA片段，进行对照比较，分析健康人与晚期胃肠道肿瘤患者血浆游离DNA片段水平的差异、晚期胃肠道肿瘤患者血浆游离DNA片段水平与预后相关指标的相关性。结果晚期胃肠道肿瘤组血浆游离DNA片段水平高于正常健康对照组，其血浆游离DNA片段的均值分别为（346．3±81．62）μg/ml与（27．6±6．91）μg／ml．差异有显著性；胃癌、大肠癌患者两组间的血浆游离DNA片段差异无显著性，均值分别为：（350．8±110．92）μg／ml与（357．1±126．26）μg/ml；在预后相关指标的各因素中，晚期胃肠道肿瘤患者的血浆游离DNA片段水平与免疫状态、是否存在远处转移有明显相关性，其中与免疫状态呈负相关，与远处转移呈正相关。结论晚期胃肠道肿瘤患者血中的游离DNA片段水平较健康人高，可能与患者自身状态、病理分型、疾病状态有关；游离DNA片段可以作为检测晚期胃肠道肿瘤的特异性指标，还可以替代免疫状态及是否存在远处转移等指标评价远期预后，并有取材方便、检测时间短、可以定量分析的优点，对临床有一定的指导意义和应用价值。

肿瘤诊断的新希望——循环游离DNA检测

游离DNA是指游离于细胞之外的一类DNA,又称为循环核酸,1947年由Mandel和Métais发现。肿瘤患者外周血DNA水平高于正常人,且血液中游离DNA具有肿瘤细胞DNA的特征。随着肿瘤分子生物学的深入研究,血液中游离DNA定量分析已开始应用于肿瘤的早期诊断、个体化治疗和预后判断等。本文从游离DNA的来源、特点、提取、检测及临床应用方面对游离DNA及其在肿瘤中的重要作用做一综述。

尿液游离DNA检测及其在肿瘤诊治中应用的研究进展

尿液中的游离DNA来源于尿道脱落细胞的崩解和通过尿道过滤屏障的血液循环cfDNA。作为液体活检的重要对象,尿中游离DNA可能成为一种新型的标记物用于肿瘤无创筛查与诊断、病情监测和疗效评估。本文将对尿液游离DNA的提取与检测方法及其在多种肿瘤的临床应用等方面的研究进展进行总结综述。

肺癌患者血浆游离性肿瘤DNA的研究

目的 研究肺癌患者血浆游离DNA微卫星不稳定和杂合性缺失在肺癌诊断中的价值。方法 通过PCR 银染法检测肺癌病人的 37例新鲜手术标本、94例全血标本DNA 3p部位三个微卫星位点的LOH、MSI。结果 大多数肺癌患者的血浆游离DNA的浓度在微克水平以上。联合三个位点进行LOH、MSI检测时 ,组织和血浆的阳性率均在 70 %以上。不同分期、不同病理类型之间差异不显著 ;有无淋巴结转移之间差异有显著性意义。结论 肺癌患者血浆游离DNA可以作为基因检测的新途径。

卵巢恶性肿瘤患者血浆游离DNA含量测定及临床意义

目的：检测卵巢恶性肿瘤患者血浆游离DNA的含量并探讨其临床应用价值。方法：采集30例卵巢恶性肿瘤、20例卵巢良性肿瘤患者及20例健康妇女的外周血，以及卵巢恶性肿瘤患者术后1周和1个月的外周血，采用微量基因组提取试剂盒提取血浆DNA，双链DNA高敏试剂盒和荧光仪测定血浆DNA含量。结果：卵巢恶性肿瘤患者血浆DNA含量[（25．33±17．69）μg·L^-1]明显高于正常者[（7．60±3．87）μg·L^-1]和良性肿瘤患者[（10．28士4．80）μg·L^-1]（P〈O．001），良性肿瘤患者的血浆DNA水平与正常者之间比较差异无显著性（P〉0．05）。恶性卵巢瘤I～Ⅱ期患者的血浆DNA含量[（15．83士5．30）μg·L^-1]明显高于正常对照组（P〈0．01），Ⅲ～Ⅳ期患者的血浆DNA含量[（30．83士20．04）μg·L^-1]高于Ⅰ～Ⅱ期（P=0．005）；有腹膜后淋巴结转移或远处转移者的血浆DNA含量[（35．43±21．08）μg·L^-1]较无转移者[（16．49士6．44）μg·L^-1]明显升高（P=0．006）；手术后1周，卵巢恶性肿瘤患者的血浆DNA含量[（20．88士12．14）μg·L^-1]与手术前比较无明显差别（P〉0．05），手术后1个月，卵巢恶性肿瘤患者的血浆DNA含量[（10．30士2．45）μg·L^-1]较手术前明显下降（P〈O．001），基本恢复到正常水平；高血浆DNA含量组的累积生存率明显低于低血浆DNA含量组（P=0．027）。以正常对照者血浆DNA水平的95％可信区间上限15．70μg·L^-1为临界值，其诊断的敏感性为63．30％，特异性为90．00％。结论：血浆DNA水平有可能成为辅助早期诊断卵巢恶性肿瘤、判断肿瘤侵袭转移情况和预测预后的指标之一。

循环肿瘤细胞及游离DNA甲基化在肝细胞癌患者中的研究进展

随着对肿瘤认识的不断深入,人们发现在原发肿瘤形成和生长的早期阶段,肿瘤细胞即可以脱离原发肿瘤组织释放到外周血形成循环肿瘤细胞,同样在肿瘤形成的早期阶段就会出现肿瘤细胞的坏死和凋亡,这些凋亡或坏死的肿瘤细胞也可以释放其DNA入外周血形成血浆或血清游离的DNA,因此对肿瘤患者循环肿瘤细胞及游离DNA的分析被认为是实时的"液相活检",肿瘤患者中的循环肿瘤细胞具有非常强的异质性,我们可以根据其物理和生物学性质采用不同的技术对其进行富集和检测;可以借助现代分子生物学手段对循环游离DNA进行提取,并对其遗传学和表观遗传学的异常改变进行分析,这可为肿瘤的早期诊断、疗效评估、复发监测及预后判断提供重要的信息.本文结合本课题组的研究重点,就循环肿瘤细胞及游离DNA及其甲基化在肝细胞癌患者的研究进行综述.

血中游离DNA与肿瘤

血中游离DNA指血中游离于细胞之外的一类DNA,简称循环核酸,于1947年由Mandel和Metais发现。肿瘤患者外周血DNA水平高于正常人且血中游离DNA具有肿瘤细胞DNA的特征,如肿瘤相关基因的突变、微卫星改变、甲基化异常和线粒体DNA突变等。随着肿瘤分子生物学的深入研究,血中游离DNA定性定量分析已开始应用于肿瘤的早期诊断、个体化治疗和预后判断等。血中游离DNA结合各类分子生物学检测技术,有望成为具有一定敏感性及高特异性的临床诊断方法。此外,血中游离DNA还有可能成为非细胞形式的肿瘤转移的新途径。

游离DNA与临床肿瘤的研究进展

游离DNA是一种存在于血浆或血清、脑脊液及滑膜液等体液中的细胞外DNA。体液中游离DNA水平和(或)基因的改变与疾病的发生发展有密切的关系。作为一种新型的检测对象,游离DNA取材简便,更适合于临床疾病的研究应用。游离DNA在临床肿瘤中的研究应用广泛,研究发现游离DNA的改变与肿瘤的发生发展密切相关。

外周血游离线粒体DNA与肿瘤相关性的研究进展

线粒体DNA因长度短、分子结构简单、数量大等独特特点迅速成为引人注目的肿瘤早期诊断分子工具。近年来关于外周血游离线粒体DNA(ccfmt DNA)在肿瘤早期诊断和预后监测上潜在价值的转化研究已取得显著进展。本文归纳了ccfmt DNA的来源及含量变化的可能机制,总结了ccfmt DNA定量检测技术的挑战,综述了其含量变化同肿瘤发生发展的关系,并讨论其作为新的肿瘤标志物的潜在临床价值。

血循环肿瘤细胞及循环游离DNA在乳腺癌临床应用的研究进展

乳腺癌是临床常见的恶性肿瘤,其发病率在全球女性癌症中居于首位。随着多种治疗方式的综合应用,乳腺癌患者的生存率明显提高,但肿瘤的复发与转移仍是导致患者治疗后预后较差的重要原因,而当前应用的病理检测及影像学检查在乳腺癌的早期诊断、复发及转移早期评估中存在局限性。循环肿瘤细胞(CTCs)是存在于实体瘤患者外周血的肿瘤细胞,与肿瘤的复发和转移关系密切;循环游离DNA(cf DNA)是一种因肿瘤细胞坏死、凋亡后游离于胞外的DNA,其浓度及完整性可反映肿瘤患者的病情严重程度、临床疗效及预后情况。近年来,CTCs和cf DNA在乳腺癌的早期诊断、疗效评估及预后监测中发挥重要作用。本文就CTCs和cf DNA在乳腺癌诊疗中的临床应用研究进行综述,以期为二者在乳腺癌中的应用提供潜在方向。

肝胆胰恶性肿瘤患者游离DNA的含量及完整性的研究

目的探讨肝胆胰恶性肿瘤患者游离DNA的含量及完整性在临床诊断上的价值。方法收集肝胆胰恶性肿瘤患者血标本共43例(其中原发性肝细胞肝癌15例,胆道系统恶性肿瘤14例,胰腺癌14例),同期正常人血标本40例。检测短片段(ALU115)及长片段(ALU247)游离DNA的含量,并计算游离DNA的完整性(长片段含量/短片段含量)。结果恶性肿瘤患者游离DNA的ALU115、ALU247含量中位数分别为2.89 ng/μL及1.19 ng/μL,显著高于正常组0.85 ng/μL及0.28 ng/m L(P<0.001)。游离DNA的含量及完整性与肿瘤大小及分期、神经、脉管受侵无明显关联。ALU247 ROC曲线下面积为0.85,比短片段的0.80及完整性的0.56都高。结论游离DNA含量在肝胆胰恶性肿瘤患者与正常人有明显区别,且ALU247敏感性及特异性更高,可考虑作为肿瘤诊断的新指标。

血清游离DNA在肿瘤诊断中的研究进展

血清游离DNA又名循环DNA,是血液循环中游离于细胞外的DNA。研究发现,游离DNA在健康人的血液中含量甚微,而当机体在一些特殊状态时（如患有肿瘤、自身免疫性疾病、感染性疾病、中风、心肌梗死及妊娠等）,其含量明显上升[1-3]。因此,通过检测血液中游离DNA来反映某些疾病的状态成为一种可能的手段。

应用高通量测序检测妇科恶性肿瘤患者血浆游离DNA的临床效果

目的:分析高通量测序在妇科恶性肿瘤患者血浆游离DNA检测中的应用。方法:收集中山市博爱医院2019年-2020年12月50例血液样本,采用高通量测序技术对其进行测序分析,比较高通量测序技术的准确性及敏感性。结果:对50例血液样本进行分析,检出其中5例确诊为妇科恶性肿瘤患者,4例为子宫内膜样腺癌,1例为卵巢癌,45例为非恶性肿瘤患者。高通量测序结果显示,仅卵巢癌患者发现多条染色体大片段拷贝数变异(copy number variation,CNV),而其余病例未发现染色体数目异常。以最终诊断结果为标准,高通量测序对恶性妇科肿瘤诊断的灵敏度为20.00%,特异度为100.00%。结论:高通量测序技术可检测出卵巢癌患者血浆中的肿瘤细胞游离DNA(cell-free circulating tumor DNA,ctDNA),但子宫内膜癌患者在本次实验中未检测出阳性结果。