网络药理学整合巨噬细胞差异基因揭示双氢杨梅树皮素改善急性肺损伤的作用机制及实验验证

目的基于网络药理学和巨噬细胞差异表达基因探讨双氢杨梅树皮素改善急性肺损伤的作用机制及实验验证。方法应用Cytoscape软件,通过PharmMapper服务器、GeneCards和OMIM数据库构建“化合物-靶点-通路”网络;利用STRING数据库构建靶点蛋白互作网络,推测核心靶点;使用Metascape数据库对核心靶点进行GO、KEGG富集分析。下载巨噬细胞芯片数据,利用GEO2R分析芯片数据的差异表达基因,DAVID平台进行差异基因KEGG通路富集。采用流式细胞术检测M1型和M2型巨噬细胞标志物F4/80、CD11b、CD86和CD206的表达;采用Western blot法检测肺组织中PI3K和Akt蛋白表达量。结果筛选出102个双氢杨梅树皮素抗急性肺损伤的潜在靶点,主要富集在PI3K/Akt信号通路、JAK/STAT信号通路、雌激素信号通路等;分子对接结果显示双氢杨梅树皮素与MMP9和IGF1具有较好的结合活性。差异表达基因富集到PI3K-Akt、细胞因子-细胞因子-受体相互作用、趋化因子等炎症相关信号通路。流式细胞术实验证明,双氢杨梅树皮素能明显增加M2型巨噬细胞极化和降低M1/M2的比例,且明显降低肺组织中PI3K和Akt蛋白表达量。结论通过网络药理学和动物实验证实双氢杨梅树皮素通过PI3K/Akt信号通路调节巨噬细胞极化改善急性肺损伤,为进一步阐明双氢杨梅树皮素改善ALI/ARDS的机制提供理论依据。

双氢杨梅树皮素调节巨噬细胞极化改善小鼠急性肺损伤

目的探讨双氢杨梅树皮素(APS)对脂多糖(LPS)诱导的急性肺损伤(ALI)的保护作用,并探讨肺巨噬细胞M1/M2表型极化及其介导的炎症反应。方法将120只KM小鼠分为6组:正常对照组、模型组、双氢杨梅树皮素(100、200、400 mg/kg)组、地塞米松(DEX)处理组。除正常对照组外,其余组采用气管内滴注LPS(8 mg/kg)建立ALI模型。造模72 h后,收集肺泡灌洗液(BALF)及肺组织。肺功能测定仪测定呼吸功能[吸气阻力、每分钟最大通气量(MVV)、肺动态顺应性];HE染色观察小鼠肺组织病变情况,测定小鼠肺湿/干质量比(W/D);ELISA检测BALF中IL-6、IFN-γ的水平;流式细胞术检测F4/80+CD11b+巨噬细胞中M1型巨噬细胞标志物CD86与M2型巨噬细胞标志物CD206表达,确定巨噬细胞极化情况。结果肺功能检测结果显示,APS可降低吸气阻力(P<0.05),增大每分钟MVV(P<0.05);HE染色结果显示,APS可明显减轻ALI小鼠肺组织损伤(P<0.05);肺湿/干重比例结果显示,APS可减轻小鼠肺水肿(P<0.05);流式细胞术的检测结果显示,APS能明显减少ALI小鼠肺部F4/80+CD11b+巨噬细胞的浸润(P<0.05),并且降低了M1型巨噬细胞的比例(P<0.05)和升高M2型巨噬细胞的比例(P<0.05),抑制肺内巨噬细胞由MΦ往M1型极化,并促进M2极化;ELISA法测定BALF中细胞因子的结果显示,APS可减少肺部促炎因子IL-6和IFN-γ的表达水平(P<0.05)。结论双氢杨梅树皮素降低小鼠肺巨噬细胞比例及抑制其向M1表型的极化,促进向M2表型的极化,降低M1/M2比例,从而改善LPS诱导的ALI小鼠肺部炎症反应。

基于AMPK/mTORC1自噬通路研究二氢杨梅树皮素对损伤A549细胞的保护作用

为研究二氢杨梅树皮素(APS)对脂多糖(LPS)诱导A549细胞损伤模型的保护作用及其对AMPK/mTORC1自噬通路的影响,随机分为正常组、模型组、APS高中低浓度组(80、40、20μg/mL)。除正常组外,其余各组用30μg/mL LPS诱导8 h构建A549细胞损伤模型,APS干预24 h后,MTT法检测A549细胞存活率、荧光法检测上清液LDH漏出量、Elisa法检测上清液TNF-α含量、MDC法细胞检测自噬体形成情况、自噬双标mRFP-GFP-LC3检测细胞自噬流情况,Western blot法检测p-AMPK/AMPK、p-mTOR/mTOR以及自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、P62蛋白表达水平。AMPK抑制剂(CC)干预验证试验,随机分为正常组、模型组、LPS+APS组、LPS+CC组、LPS+APS+CC组,APS与CC共培养时间24 h后,采用Western blot法检测p-AMPK/AMPK、p-mTOR/mTOR以及自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、P62蛋白表达水平。结果表明,APS使LPS损伤的A549细胞存活率明显升高,LDH漏出量、TNF-α含量明显减少,细胞内自噬体明显增加,自噬溶酶体明显增加,P62蛋白、p-mTOR/mTOR表达明显下调,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ表达明显上调;用CC抑制AMPK/mTORC1自噬通路后,APS能够明显上调P62蛋白、p-AMPK/AMPK、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ蛋白表达,显著下调p-mTOR/mTOR蛋白表达。APS通过激活AMPK/mTORC1自噬通路促进自噬,增强自噬流,发挥对LPS诱导A549细胞损伤的保护作用。

双氢杨梅树皮素对脂多糖诱导小鼠急性肺损伤及TLR4/MyD88/NF-κB信号通路的影响

为研究双氢杨梅树皮素(Ampelopsin,APS)对脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)诱导急性肺损伤(Acute lung injury,ALI)小鼠模型的保护作用及其对TLR4/MyD88/NF-κB信号通路的影响,将72只KM小鼠按体重随机分为正常组、模型组、地塞米松阳性组(7.5 mg/kg)及APS高、中、低剂量组(200、100、50 mg/kg),每组12只。除正常组外,其余各组通过无创式气管内滴注LPS复制ALI小鼠模型。在LPS滴注8 h后,应用小动物呼吸功能测定仪监测各组小鼠呼吸功能(包括气道阻力、肺动态顺应性、每分钟最大通气量等)相关指标;ELISA法检测支气管肺泡灌洗液(Bronchoalveolar lavage fluid,BALF)中炎症因子TNF-α以及IL-1β的含量;比色法检测肺组织匀浆液中过氧化物酶(MPO)活力;HE染色法观察肺组织病理学变化并进行评分;Western blotting法测定肺组织匀浆液中TLR4、MyD88、IκBα、p-IκBα、p65及p-p65蛋白表达。结果表明,APS给药后,小鼠的吸气阻力降低,肺动态顺应性以及每分钟最大通气量增加,肺组织病理损伤症状减轻。BALF中TNF-α及IL-1β含量降低。肺组织匀浆液中MPO活力降低,TLR4、MyD88、p-IκBα、p65及p-p65蛋白表达量均下调,IκBα蛋白表达量上调。双氢杨梅树皮素对LPS诱导的ALI小鼠具有保护作用,其机制可能与TLR4/MyD88/NF-κB信号通路有关。

双氢杨梅树皮素降血糖的实验研究

目的 :探讨双氢杨梅树皮素 ( dihydromyricetin,DHM)的降血糖作用。方法 :采用四氧嘧啶糖尿病小鼠模型及由葡萄糖、肾上腺素引起的高血糖小鼠模型 ,观察双氢杨梅树皮素对实验动物模型的降血糖效果。结果 :双氢杨梅树皮素对四氧嘧啶所致糖尿病小鼠有明显的治疗作用 ,对葡萄糖、肾上腺素引起的高血糖模型小鼠也有明显的降血糖效果 ,但对正常小鼠血糖无明显影响。结论 :实验研究表明 ,双氢杨梅树皮素对高血糖模型小鼠有明显降血糖作用 。

广西藤茶中杨梅树皮素降血糖的实验研究

目的 观察杨梅树皮素 (MYR)对多种动物模型的降血糖作用。方法 采用四氧嘧啶所致糖尿病模型、肾上腺素和葡萄糖引起的高血糖小鼠模型 ,以及正常小鼠 ,在口服给药后 ,测定各模型小鼠的血糖水平。结果 MYR对四氧嘧啶所致糖尿病小鼠有较好的治疗作用 ,对肾上腺素、葡萄糖引起的高血糖小鼠也有明显的降血糖作用 ,但对正常小鼠血糖无明显影响。

二氢杨梅树皮素的抗氧化活性研究

以植物油为研究材料 ,研究了二氢杨梅树皮素 (DMY)的抗油脂氧化的能力 ;pH、溶剂、铁离子对其抗氧化性的影响。结果表明 :DMY具有良好的抗油脂氧化的能力 ,抗氧化效果优于儿茶素、大豆异黄酮、葛根异黄酮 ,与TBHQ的抗氧化效果相近 ;在 0～ 0 .1%的浓度范围内 ,其抗氧化效果随浓度增加而增强。DMY抗氧化作用的最适pH范围为 4～ 5 ;乙醇溶的DMY抗氧化作用优于水溶的DMY的抗氧化作用。铁离子对DMY抗氧化性有一定的抑制作用 ,但可以通过提高DMY浓度得到改善 ;因此 ,DMY作为天然抗氧化剂有很好的开发前景。

广西瑶族藤茶中双氢杨梅树皮素的含量测定方法研究

目的:建立广西瑶族藤茶中有效成分双氢杨梅树皮素(dihydromyricetin)的RP-HPLC定量分析方法。方法:采用Shimpack CLC(150mm×4.6mm,5μm),流动相为甲醇-0.05％磷酸(55:45),流速1.0mL·min-1,检测波长292nm。结果:双氢杨梅树皮素在0.816-4.08μg范围内线性良好,r=0.999 9,平均回收率为98.8％,RSD<2.3％(n=9)。结论:本法快速,简便,重复性好,可作为藤茶的质量控制方法。

杨梅树皮提取物及杨梅素抗肿瘤活性

目的对杨梅树皮提取物、提取物的大孔吸附树脂各洗脱部位及杨梅素单体化合物进行体外抗肿瘤研究。方法采用MTT法测定细胞死亡率;采用倒置显微镜观察细胞形态学变化;用琼脂糖电泳观察DNA片段化。用Western印迹法分析药物对蛋白质水平的影响。结果杨梅树皮提取物及其大孔吸附树脂洗脱物、杨梅素单体化合物体外对人宫颈癌HeLa细胞、人黑色素瘤A375-S2细胞、人乳腺癌MCF-7细胞和人肝癌HepG2细胞均具有明显的细胞毒作用。杨梅素明显抑制HeLa细胞的增殖,诱导HeLa细胞调亡。Caspase-3、Caspase-9抑制剂可明显抑制50 mg.L-1杨梅素诱导的凋亡。Western印迹结果显示50 mg.L-1杨梅素作用36 h后Caspase-3前体及其底物ICAD和PARP发生降解。结论杨梅树皮提取物及其大孔吸附树脂洗脱物具有明显的细胞毒作用,杨梅素(50 mg.L-1)通过激活Caspase途径诱导HeLa细胞凋亡。

广西藤茶中杨梅树皮素的保肝作用研究

目的 :研究广西藤茶中杨梅树皮素的保肝作用。方法 :采用四氯化碳、D 半乳糖胺和异硫氰酸萘酯致小鼠急性肝损伤模型 ,观察杨梅树皮素对肝损伤的保护作用 ;采用小鼠单核巨噬细胞吞噬和免疫低下小鼠和溶血素试验 ,观察杨梅树皮素的免疫增强作用。结果 :杨梅树皮素能明显降低四氯化碳、D 半乳糖胺和异硫氰酸萘酯致小鼠急性肝损伤模型血清中ALT、AST活性和T BIL含量 ,减轻肝组织的变性和坏死 ;并提高单核巨噬细胞吞噬功能和溶血素含量。结论 :杨梅树皮素具有保肝降酶退黄 ,提高免疫功能作用。

杨梅树皮化学成分的分离与鉴定

目的为进一步开发利用杨梅（Myrica ruba（Lour.）Sieb.et Zucc.）的化学成分提供依据。方法采用硅胶吸附,羟丙基葡聚糖凝胶LH-20柱色谱等分离手段对杨梅树皮的化学成分进行分离,利用理化性质及NMR、MS等波谱技术对分得的化合物进行结构鉴定。结果分离得到8个化合物,分别鉴定为丁香酸（syringic acid,1）、正丁基-β-D-吡喃果糖苷（n-butyl-β-D-fructopyranoside,2）、水杨酸（salicylic acid,3）、白蔹素（ampelopsin,4）、没食子酸（gallic acid,5）、杨梅素（myricetin,6）、杨梅苷（myricitrin,7）、儿茶素没食子酸酯（（-）-epigallocatechin-3-gallate,8）。结论化合物14为首次从杨梅属植物中分离得到。

双氢杨梅树皮素对链脲霉素所致糖尿病大鼠的降糖作用(英文)

用链脲霉素 (STZ)所致的大鼠糖尿病作模型 ,给予双氢杨梅树皮素 (AP)连续治疗 30 d,探讨 AP的降糖作用机理。结果表明 :AP能使 STZ糖尿病大鼠的高血糖反应减轻 ,增加血清中 SOD- cu.zn活性 ,降低 MDA含量 ,对血脂中的甘油三酯 (TG)水平有降低趋势 ;可提高血清中胰岛素水平。组织学研究可见 AP组大鼠胰腺组织中的胰岛数目较模型组增多 ,淋巴细胞浸润减少 ,炎症反应减轻。其作用机理可能是通过 AP的抗氧化作用 ,减轻 STZ对胰岛 β细胞损伤 ,或促进已损伤的 β细胞的修复 ,增强胰岛细胞的分泌功能 ,起到降低血糖的作用。

杨梅树皮的化学成分研究

目的对杨梅(Myrica ruba)树皮的化学成分进行研究。方法用色谱法分离,并用波谱法对化合物的结构进行鉴定。结果从杨梅树皮中分离鉴定了6个化合物,其结构分别为杨梅素(myricetin,1)、杨梅苷(myricitrin,2)、taraxerol(3)、myricadoil(4)、myricanol(5)和myricanone(6)。结论首次报道湖南杨梅树皮的化学成分;1为湖南杨梅树皮的主要化学成分,该植物可作为杨梅素的资源植物加以开发利用。

杨梅树皮提取物体外抗人肺腺癌A549作用的实验研究

目的：分离筛选出杨梅树皮中具有抗人肺腺癌A549的有效部位。方法：采用系统溶剂提取分离法,从杨梅树皮中分离出有效成分,通过~3H-TdR掺入法观察各提取物体外对A549细胞的抑制作用,确定抑瘤效果最好杨梅树皮提取物。结果：各杨梅树皮提取物对A549细胞均有很好的抑制作用,其中杨梅树皮醇提取物和氯仿萃取层部位对人肺腺癌A549的抑制作用最明显,抑制率分别为3.5%～97.0%、38.7%～99.4%,并且具有较好的量效关系。结论：杨梅树皮提取物体外对人肺腺癌A549具有很好的抑制作用。

二氢杨梅树皮素对肉仔鸡生产性能及消化酶活性的影响

本文旨在研究二氢杨梅树皮素对肉仔鸡生产性能及消化酶活性的影响,并初步探讨其作用机制。选用360只1日龄AA肉仔鸡,随机分为5个处理,每组72只鸡,设6个重复,每个重复12只鸡。试验采用单因素方差试验设计。在玉米-豆粕型日粮基础上添加250、500、1000、2000和0μg/kg的二氢杨梅树皮素(dihydromyrice-tin,DMY),以饲喂基础日粮为对照组,试验期21d。结果表明:(1)日粮中添加500μg/kgDMY,胰腺糜蛋白酶、淀粉酶活性分别提高了3.04%和20.85%(P<0.05),十二指肠胰蛋白酶活性提高了5.40%(P<0.05);(2)日粮中添加1000μg/kgDMY可显著提高AA肉仔鸡的生产性能(P<0.05),胰腺糜蛋白酶和淀粉酶活性分别提高了5.26%和20.85%(P<0.05),十二指肠糜蛋白酶和胰蛋白酶活性分别提高了1.82%和9.76%(P<0.05);(3)日粮中添加2000ug/kg的DMY,胰腺糜蛋白酶活性提高了7.57%(P<0.05)。综合分析得出,日粮中添加1000μg/kg的DMY效果最佳。

杨梅树皮中黄酮类成分研究

目的对湖南产杨梅树皮中黄酮类活性成分进行研究。方法用95%乙醇提取及各种柱色谱法分离,波谱法鉴定结构。结果分离并鉴定了6个化合物,其结构分别为槲皮素(Quercetin,1)、杨梅素(Myricetin,2)、异槲皮苷(Quercetin-3-O-β-D-glucoside,3)、槲皮苷(Quercetin-3-O-α-L-rhamnoside,4)、杨梅苷(Myricetrin,5)、杨梅素-3-O-β-D-葡萄糖苷(Myricetin-3-O-β-D-glucoside,6)。结论1,4,6为首次从杨梅属中分离得到;2为杨梅树皮的主要化学成分,该植物可作为杨梅素的资源植物加以开发利用。

五加皮杨梅树皮及其复方制剂药对小鼠抗疼痛效果的研究

目的探讨五加皮、杨梅树皮及其复方制剂药对小鼠机体功能状况的作用及其机制。方法采用对比法,对小鼠给以镇痛药物之后再给以冰醋酸致痛,观察其对急性疼痛的感受,扭体频数的观察;最后颈椎脱臼法处死,取小鼠肾上腺与脾脏,称重观察药物对小鼠免疫力的影响。结果复方制剂药的急性镇痛药效明显(P<0.05),五加皮镇痛药效远不如赖氨匹林(P<0.01),也不如杨梅树皮和复合制剂。杨梅树皮对脾脏的免疫功能影响大(P<0.05)。结论杨梅树皮有镇痛药效,五加皮无镇痛药效;且杨梅树皮中加入五加皮所制成的复方制剂有更全面的治疗效果。杨梅树皮有镇痛药效,五加皮和复方制剂无镇痛药效;杨梅树皮、五加皮单独使用,分别可以提高机体免疫功能;但是临床应用应该采用分开使用的方式,两药联合用药不具备提高疗效的功能。

藤茶双氢杨梅树皮素对人肝癌BEL-7404细胞增殖的抑制作用

目的:探讨藤茶双氢杨梅树皮素(APS)的抗肿瘤作用。方法:以MTT法、生长曲线法、克隆形成法观察APS对人肝癌BEL-7404细胞的体外抑制作用。结果:MTT法中,APS对BEL-7404细胞的IC50为22.99μg/mL;细胞生长曲线法提示其对BEL-7404细胞生长有明显抑制作用;克隆形成法中,药物浓度在9.88μg/mL以上时抑制率为100%,药物浓度为6.58μg/mL时抑制率为69.65%。结论:APS对BEL-7404细胞的增殖有明显的抑制作用。

广西藤茶中双氢杨梅树皮素保肝作用的实验研究

目的 :研究广西藤茶中双氢杨梅树皮素的保肝作用。方法 :采用四氯化碳、D -半乳糖胺和异硫氰酸萘酯致小鼠急性肝损伤模型 ,观察双氢杨梅树皮素对肝损伤的保护作用 ;采用小鼠单核巨噬细胞吞噬作用和免疫低下小鼠溶血素生成试验 ,观察双氢杨梅树皮素的免疫增强作用。结果 :双氢杨梅树皮素能明显降低四氯化碳、D -半乳糖胺和异硫氰酸萘酯致小鼠急性肝损伤模型血清中ALT、AST活性和T -BIL含量 ,减轻肝组织的变性和坏死 ;并提高单核巨噬细胞吞噬功能和溶血素含量。结论 :双氢杨梅树皮素具有保肝降酶退黄 ,提高免疫功能作用。

毛杨梅树皮原花色素对小鼠急性毒性及抗氧化性的影响

探讨了毛杨梅树皮原花色素提取物的安全性,分析了毛杨梅树皮原花色素对小鼠的急性毒性以及在小鼠体内的抗氧化性能。结果表明:毛杨梅树皮原花色素提取物经口的LD50为5 g/kg。毛杨梅树皮原花色素给药后,小鼠血清内的过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)活性显著性增加(p<0.05),丙二醛(MDA)含量减少。小鼠肝内的CAT活力显著增加,MDA含量也有所增加,但是并没有显著性差异(p>0.05)。因此,毛杨梅树皮原花色素属于实际无毒物质,毛杨梅树皮原花色素提取物对小鼠机体具有一定的抗氧化作用。