新型杨梅素衍生物S2-1-5的合成及抗肿瘤活性研究

目的:评价新设计合成的杨梅素衍生物S2-1-5对人肝癌SMMC-7721细胞的抗肿瘤活性,以期为杨梅素衍生物的结构优化和抗肝癌药的进一步研发提供依据。方法:以杨梅素为母体,通过化学反应合成S2-1-5,并用核磁共振(NMR)和高分辨质谱(HRMS)进行结构和定量分析,再验证其抗肿瘤活性:将不同浓度的S2-1-5和阳性对照药吉西他滨作用于SMMC-7721细胞,DMSO作为阴性对照组,通过MTT实验和形态学观察检测S2-1-5对SMMC-7721细胞的增殖抑制作用,划痕实验检测SMMC-7721细胞迁移能力,流式细胞术检测SMMC-7721细胞周期和细胞凋亡。结果:NMR和HRMS确定了2-氟苄基4-((3-((5,7-二甲氧基-4-氧代-2-(3,4,5-三甲氧基苯基)-4H-色烯-3-基)氧基)丙基)(甲基)氨基)哌啶-1-二硫代羧酸(S2-1-5)的分子结构,其化学式为C_(37)H_(43)FN_(2)O_(8)S_(2)。S2-1-5的抗肿瘤活性实验表明:与对照组相比,不同浓度下,S2-1-5的抑制活性更高,差异均具有统计学意义(P<0.05);S2-1-5能抑制SMMC-7721细胞迁移(P<0.05);S2-1-5使SMMC-7721细胞的细胞周期阻滞在S期(P<0.05);S2-1-5能诱导SMMC-7721细胞凋亡(P<0.01)。结论:成功合成S2-1-5,其能通过抑制SMMC-7721细胞增殖和迁移,诱导细胞周期阻滞和凋亡发挥其体外抗肿瘤作用。

酰胺类杨梅素衍生物的合成及抑菌活性

以杨梅素为先导化合物,设计合成了12个酰胺类杨梅素衍生物;利用核磁共振波谱(~1H NMR和^(13)C NMR)和高分辨质谱仪(HRMS)对其结构进行了确证.初步抑菌活性测定结果表明,该类化合物对水稻白叶枯病菌、柑橘溃疡病菌和烟草青枯病菌均具有一定的抑制活性,化合物3a,3e,3f,3h和3k对3种植物病菌表现出较好的抑制活性,其中200μg/mL化合物3e对水稻白叶枯病菌和烟草青枯病菌的抑制活性均为100%,超过对照药叶枯唑(抑菌活性分别为72.85%和75.86%).

杨梅素衍生物对A549细胞的抑制作用

目的探讨杨梅素衍生物对人非小细胞肺癌A549细胞增殖及凋亡的影响和放射增敏作用。方法将修饰后的杨梅素溶解在DMSO中,A549细胞被分成DMSO对照组和杨梅素衍生物组,MTT及Ki67实验检测A549细胞的增殖能力,Transwell检测A549细胞的侵袭能力,流式细胞术检测A549细胞的凋亡,Western blot法检测A549细胞中Bax、Bcl-2、P53、cleaved Caspase-3的表达情况。集落形成实验检测杨梅素衍生物对A549细胞的放射增敏作用。结果与对照组比较,杨梅素衍生物组A549细胞活力降低(P<0.001),A549细胞的增殖指数下降(P<0.01),同时A549细胞的侵袭能力减弱(P<0.001),细胞凋亡比例增加(P<0.05)。Western blot结果显示杨梅素衍生物处理后A549细胞中Bax/Bcl-2的比值增大,P53表达减少,cleaved Caspase-3表达增强(P<0.001)。集落形成实验显示杨梅素衍生物的放射增敏参数SER为1.31。结论杨梅素衍生物可通过诱导细胞凋亡相关蛋白的表达,降低A549细胞的增殖及侵袭能力,同时可作为放射增敏剂提高放疗疗效。

含1,2,4-三唑并[3,4-b]-1,3,4-噻二唑杨梅素衍生物的设计、合成及生物活性研究

利用活性拼接的原理,以杨梅苷为原料,将1,2,4-三唑并[3,4-b]-1,3,4-噻二唑引入到杨梅素结构中,合成了一系列含三唑并噻二唑的杨梅素衍生物,通过1H NMR、13C NMR和高分辨质谱(HRMS)进行了结构表征,并通过X单晶衍射实验确认了3-(3-((3-乙基-[1,2,4]三唑[3,4-b][1,3,4]噻二唑-6-基)硫代)丙氧基)-5,7-二甲氧基-2-(3,4,5-三甲氧基苯基)-4H-色酮-4-酮(A5)的结构.生物活性测试结果表明:浓度为100μg/mL时,3-(3-((3-(4-(叔丁基)苯基)-[1,2,4]三唑[3,4-b][1,3,4]噻二唑-6-基)硫基)丙氧基)-5,7-二甲氧基-2-(3,4,5-三甲氧基苯基)-4H-色酮-4-酮(A15)对柑桔溃疡病菌(Xac)的抑制率为63.3%,优于对照药噻菌铜(57.3%);部分化合物对烟草花叶病毒(TMV)表现出较好的抑制活性.其中,治疗活性方面,化合物A5,5,7-二甲氧基-3-(4-((3-(甲氧基甲基)-[1,2,4]三唑[3,4-b][1,3,4]噻二唑-6-基)硫代)丁氧基)-2-(3,4,5-三甲氧基苯基)-4H-色酮-4-酮(A8),5,7-二甲氧基-3-(3-((3-苯基-[1,2,4]三唑[3,4-b][1,3,4]噻二唑-6-基)硫代)丙氧基)-2-(3,4,5-三甲氧基苯基)-4H-色酮-4-酮(A9),5,7-二甲氧基-3-(4-((3-(对甲苯基)-[1,2,4]三唑[3,4-b][1,3,4]噻二唑-6-基)硫代)丁氧基)-2-(3,4,5-三甲氧基苯基)-4H-色酮-4-酮(A12)的EC50值分别为88.3,139.1,109.9,160.1μg/mL,优于对照药宁南霉素(227.2μg/mL).保护活性方面,5,7-二甲氧基-3-(4-((3-苯基-[1,2,4]三唑[3,4-b][1,3,4]噻二唑-6-基)硫代)丁氧基)-2-(3,4,5-三甲氧基苯基)-4H-色酮-4-酮(A10),5,7-二甲氧基-3-(4-((3-(4-甲氧基苯基)-[1,2,4]三唑[3,4-b][1,3,4]噻二唑-6-基)硫基)丁氧基)-2-(3,4,5-三甲氧基苯)-4H-色酮-4-酮(A14),3-(3-((3-(4-(叔丁基)苯基)-[1,2,4]三唑[3,4-b][1,3,4]噻二唑-6-基)硫基)丙氧基)-5,7-二甲氧基-2-(3,4,5-三甲氧基苯基)-4H-色酮-4-酮(A15),3-(4-((3-(4-叔丁基)苯基)-[1,2,4]三唑[3,4-b][1,3,4]噻二唑-6-基)硫基)丁氧基)-5,7-二甲氧基-2-(3,4,5-三甲氧基苯基)-4H-色酮-4-酮(A16),3-(4-((3-(4-氯苯基)-[1,2,4]三唑[3,4-b][1,3,4]噻二唑-6-基)硫基)丁氧基)-5,7-二甲氧基-2-(3,4,5-三甲氧基苯基)-4H-色酮-4-酮(A18)的EC50值分别为103.1,107.4,86.3,79.2,111.5μg/mL,优于对照药宁南霉素(179.2μg/mL).微量热涌动实验表明,化合物A12和A16与烟草花叶病毒外壳蛋白(TMV-CP)具有较强的亲和力,分子对接实验表明,化合物A16与TMV-CP具有较强的相互作用.

杨梅素衍生物的合成及抗氧化活性研究

目的设计合成杨梅素衍生物并进行体外抗氧化活性筛选。方法以天然产物杨梅素及杨梅苷为起始原料,通过Mannich反应、多步保护和脱保护方法等对其C-3、C-5、C-7位羟基以及C-8位进行选择性结构修饰,合成了一系列杨梅素衍生物,采用抗总氧DPPH模型对其进行自由基清除试验。结果与结论合成了18个未见文献报道的新化合物,目标化合物的结构经核磁共振氢谱和碳谱、高分辨质谱确证。体外抗氧化活性试验结果显示,11个杨梅素衍生物具有比先导物杨梅素及杨梅苷更强的抗氧化能力。本研究发现在杨梅素C-8和C-7位修饰可以显著提高抗氧化能力,自由基清除IC50值范围为6.71~10.98μg·mL^(-1)。本研究初步明确了杨梅素抗氧化活性关键结构和主要修饰位点,为后续深入研究构效关系提供指导。

杨梅素类衍生物H10对肺癌细胞H460影响的体外实验研究

目的研究杨梅素衍生物H10对肺癌细胞H460影响。方法通过四甲基偶氮唑盐法(MTT比色法)法研究H10对H460细胞的增殖影响,通过细胞成像法和DAPI-Actin染色观察H10处理后细胞形态学的变化及细胞凋亡情况,细胞克隆形成实验检验H10对细胞间依附成团及增殖能力影响,伤口愈合实验研究H10是否抑制H460细胞的迁移能力,流式分析H10诱导肺癌细胞H460发生凋亡。结果MTT比色法表明H10具有浓度依赖性抑制肺癌细胞H460细胞的增殖能力,其中H10的IC50=1.412μM;细胞成像法和DAPI-Actin染色观察到随着H10药物浓度增加,H460细胞数目明显减少,细胞缩小,变圆变亮,周围出现细胞碎片;细胞克隆形成实验结果表明H10具有浓度依赖性抑制肺癌细胞H460细胞间粘附能力;伤口愈合实验及流式分析凋亡结果表明H10可抑制肺癌细胞迁移、诱导凋亡。结论杨梅素衍生物H10在肺癌细胞H460中展现出显著抑制细胞增殖、迁移及诱导细胞凋亡作用。

含喹唑啉硫醚的杨梅素衍生物的设计、合成及生物活性研究

以杨梅苷为原料,通过活性拼接,设计并合成一系列含喹唑啉硫醚的杨梅素衍生物,其结构通过1H NMR、13C NMR、19F NMR和HRMS进行确证.生物活性测试结果表明,该类化合物对水稻白叶枯病菌(X.Oryzae)、柑橘溃疡病菌(X. Citri)和烟草青枯病菌(R. Solanacearum)表现出一定的抑制活性.其中, 5,7-二甲氧基-3-(3-((6-溴喹唑啉-4-基)硫基)丙氧基)-2-(3,4,5-三甲氧基苯基)-4H-色烯-4-酮(A15)对水稻白叶枯病菌的EC50值为13.9μg/mL,优于对照药叶枯唑(88.9μg/mL)和噻菌铜(68.1μg/mL);5,7-二甲氧基-3-(4-((6-氯喹唑啉-4-基)硫基)丁氧基)-2-(3,4,5-三甲氧基苯基)-4H-色烯-4-酮(A3)、5,7-二甲氧基-3-(3-((6-氯喹唑啉-4-基)硫基)丙氧基)-2-(3,4,5-三甲氧基苯基)-4H-色烯-4-酮(A14)、5,7-二甲氧基-3-(3-((6-溴喹唑啉-4-基)硫基)丙氧基)-2-(3,4,5-三甲氧基苯基)-4H-色烯-4-酮(A15)和5,7-二甲氧基-3-(3-((6-氟喹唑啉-4-基)硫基)丙氧基)-2-(3,4,5-三甲氧基苯基)-4H-色烯-4-酮(A16)对烟草青枯病菌的EC50值分别为1.1,14.0,11.9和7.5μg/mL,优于对照药叶枯唑(38.5μg/mL)和噻菌铜(184.8μg/mL).活体实验结果表明,化合物A15对水稻白叶枯病菌的具有良好治疗活性和保护活性.通过扫描电镜成像初步探讨了目标化合物A3对烟草青枯病菌和A15对水稻白叶枯病菌的抑菌作用机制.

基于UPLC-MS/MS技术和外翻肠囊模型探究M10-H和M10-Na在肠吸收的特征

目的:利用大鼠外翻肠囊模型,探究杨梅素衍生物杨梅素-3-O-β-D-乳糖苷(M10)在小肠的吸收特征。方法:建立M10在以台式营养液为基质的超高效液相色谱串联质谱法(UPLC-MS/MS)的定量检测方法,并进行方法学验证。本实验设置M10-H组和M10-Na组,利用大鼠外翻肠囊法体外检测M10的吸收情况,计算并比较不同肠段的各个不同时间的累计吸收量和吸收速率常数。结果:不同肠段对M10的吸收无统计学差异(P>0.05),杨梅素-3-O-β-D-乳糖苷钠盐(M10-Na)的小肠吸收量和杨梅素-3-O-β-D-乳糖苷(M10-H)相比有极显著性提升(P<0.01),M10-H的小肠段平均累积吸收量仅有M10-Na的(43±18)%。结论:在一定浓度范围内(小肠内受试化合物浓度为0.1 mg·mL^(-1)左右时)M10-H和M10-Na在小肠的不同肠段,均为线性吸收,符合零级吸收速率。