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Caulobacter crescentus蔗糖水解酶突变体S271A的重组表达及其转化蔗糖制备松二糖的研究 被引量:3
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作者 邢晨晨 王蕾 +3 位作者 郭志勇 张康 陶秀梅 吴敬 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2022年第2期20-25,共6页
松二糖具有低热量和不致龋齿的特性,在食品工业具有广泛的应用前景。与淀粉蔗糖酶相比,Caulobacter crescentus蔗糖水解酶突变体S271A (CcSH S271A)转化蔗糖过程中产生的麦芽寡糖副产物少,可代替淀粉蔗糖酶用于松二糖制备。该研究将CcSH... 松二糖具有低热量和不致龋齿的特性,在食品工业具有广泛的应用前景。与淀粉蔗糖酶相比,Caulobacter crescentus蔗糖水解酶突变体S271A (CcSH S271A)转化蔗糖过程中产生的麦芽寡糖副产物少,可代替淀粉蔗糖酶用于松二糖制备。该研究将CcSH S271A在枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)中重组表达,对该重组酶进行酶学表征并对其制备松二糖的工艺进行了优化。结果表明,重组酶的酶促反应最适温度为45℃,最适pH为8.0,在30℃时热稳定性好,半衰期为312 h。当底物蔗糖浓度为2.0 mol/L,温度30℃、pH 8.0、加酶量为60 U/g蔗糖,反应时间48 h时,松二糖最高产率达到66.3%。是以蔗糖为单一底物制备松二糖的最高水平,为松二糖的制备奠定了基础。 展开更多
关键词 松二糖 蔗糖 蔗糖水解酶 蔗糖水解酶突变体 枯草芽孢杆菌 重组表达 酶转化
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离子色谱法测定蜂蜜中松二糖含量 被引量:3
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作者 蔡小钦 侯美玲 +5 位作者 赵博 汪敏 王馨婵 黄丹丹 李红丽 肖美君 《食品安全质量检测学报》 CAS 北大核心 2022年第9期2901-2906,共6页
目的 建立离子色谱法测定蜂蜜中松二糖的检测方法,初步分析市售蜂蜜松二糖含量情况。方法 用水作为样品提取剂,以136mmol/L氢氧化钠溶液和20mmol/L无水乙酸钠溶液作为淋洗液等度洗脱,进样量20μL,流速0.7 mL/min,采用Metrosep Carb 2分... 目的 建立离子色谱法测定蜂蜜中松二糖的检测方法,初步分析市售蜂蜜松二糖含量情况。方法 用水作为样品提取剂,以136mmol/L氢氧化钠溶液和20mmol/L无水乙酸钠溶液作为淋洗液等度洗脱,进样量20μL,流速0.7 mL/min,采用Metrosep Carb 2分离柱(250 mm×4.0 mm, 5.0μm),以安培检测器进行测定。结果 离子色谱法测定蜂蜜中松二糖相关系数为0.99955,检出限达0.02 g/100 g,定量限为0.05 g/100 g,定量和定性的相对标准偏差分别为1.62%和0.089%,加标回收率为98.3%。结论 本研究建立的检测蜂蜜中松二糖含量的方法,前处理简单、分离效果好、灵敏度高、检测结果稳定可靠,可用于蜂蜜中松二糖含量的检测。通过对84个市购蜂蜜样品中松二糖含量测定分析,可对蜂蜜中松二糖的含量测定、蜂蜜真伪鉴别及制定蜂蜜相关标准提供技术支持。 展开更多
关键词 蜂蜜 松二糖 离子色谱法 鉴别
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Caulobacter crescentus蔗糖水解酶受体亚位点分子改造及其在松二糖制备中的应用
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作者 王蕾 邢晨晨 +2 位作者 郭志勇 宿玲恰 吴敬 《合成生物学》 CSCD 2022年第3期602-615,共14页
松二糖是由葡萄糖与果糖以α-1,3糖苷键连接而成的还原性二糖,具有代替蔗糖成为新型功能性甜味剂的潜力,在食品工业中应用前景广阔。淀粉蔗糖酶能够以蔗糖为底物催化异构(分子内转苷)反应制备松二糖,产率高但易产生副产物麦芽寡糖和海... 松二糖是由葡萄糖与果糖以α-1,3糖苷键连接而成的还原性二糖,具有代替蔗糖成为新型功能性甜味剂的潜力,在食品工业中应用前景广阔。淀粉蔗糖酶能够以蔗糖为底物催化异构(分子内转苷)反应制备松二糖,产率高但易产生副产物麦芽寡糖和海藻酮糖。为解决这一问题,选用前期获得的松二糖产率高并且不产副产物麦芽寡糖的Caulobacter crescentus蔗糖水解酶突变体S271A为研究对象,进一步通过受体亚位点分子改造,获得了反应特异性和松二糖产率提升的突变体S271A/I382Q。在此基础上进行了酶转化条件优化,当以2 mol/L蔗糖溶液为底物,加酶量为40 U/mL,在pH 5.0、30℃的条件下,松二糖的产率达到最高为70.3%,松二糖的浓度为480 g/L,并且反应产物中不含副产物海藻酮糖。分子动力学模拟表明,突变体S271A/I382Q可通过氢键相互作用稳定受体果糖参与形成α-1,3糖苷键时的构象,从而更有利于生成松二糖。本研究创新性地将蔗糖水解酶改造为键型特异性强的转苷酶,获得的松二糖产率为目前报道的最高水平,为松二糖的规模化制备与应用奠定了理论和技术基础。 展开更多
关键词 松二糖 蔗糖 海藻酮糖 蔗糖水解酶 突变体 酶转化
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蜂蜜中松二糖的核磁检测 被引量:7
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作者 鲁惠玲 林宏 +4 位作者 陈磊 刘芸 季秀艳 石星宇 徐锦忠 《分析试验室》 CAS CSCD 北大核心 2021年第8期893-897,共5页
建立了一种测定蜂蜜中松二糖含量的核磁共振氢谱(1H NMR)法。在酸性条件下,蜂蜜样品用磷酸盐缓冲液溶解后与重水混合,经400 MHz液体核磁共振仪采集1H NMR,以邻苯二甲酸氢钾为内标定量。该方法不同加标水平的平均回收率在90.6%~94.4%之间... 建立了一种测定蜂蜜中松二糖含量的核磁共振氢谱(1H NMR)法。在酸性条件下,蜂蜜样品用磷酸盐缓冲液溶解后与重水混合,经400 MHz液体核磁共振仪采集1H NMR,以邻苯二甲酸氢钾为内标定量。该方法不同加标水平的平均回收率在90.6%~94.4%之间,平均相对标准偏差为0.74%~1.9%。分析比较了我国3种新鲜原料蜜(洋槐蜜、荆条蜜和油菜蜜)中水分和松二糖的含量分布,结果表明洋槐蜜品质较高,其松二糖含量最高而水分最低;油菜蜜中松二糖含量最低而水分含量最高;荆条蜜的情况介于洋槐蜜与油菜蜜之间。该研究可为蜂蜜中松二糖的测定及蜂蜜质量的控制提供技术支持。 展开更多
关键词 核磁共振氢谱(1H NMR) 蜂蜜 松二糖 定量
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东北天南星块茎化学成分的研究 被引量:10
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作者 王广树 刘银燕 +2 位作者 陈滴 苏振丽 杨晓虹 《特产研究》 2009年第2期21-22,28,共3页
目的研究东北天南星块茎的化学成分。方法采用大孔树脂、硅胶、ODS柱色谱分离纯化,经理化常数、光谱学方法鉴定结构。结果分离得到了6种化合物,鉴定了其中的4种,结构分别为夏佛托苷(1),异夏佛托苷(2),蔗糖(3)和松二糖(4)。结论4种化合... 目的研究东北天南星块茎的化学成分。方法采用大孔树脂、硅胶、ODS柱色谱分离纯化,经理化常数、光谱学方法鉴定结构。结果分离得到了6种化合物,鉴定了其中的4种,结构分别为夏佛托苷(1),异夏佛托苷(2),蔗糖(3)和松二糖(4)。结论4种化合物均为首次从东北天南星块茎中得到。 展开更多
关键词 药物化学 分离鉴定 色谱法 东北天南星 松二糖
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RP-HPLC Determination of Pinoresinol Diglucopyranoside in Qing′e Pill Extract 被引量:4
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作者 熊志立 罗璇 +1 位作者 李小芩 李发美 《Journal of Chinese Pharmaceutical Sciences》 CAS 2004年第2期138-141,共4页
Aim To develop and determine pinoresinol diglucopyranoside in Qing'e Pill, atraditional Chinese compound preparation containing Eucommia ulmoides Oliv. as the principal drug,by a reverse-phase high-performance liq... Aim To develop and determine pinoresinol diglucopyranoside in Qing'e Pill, atraditional Chinese compound preparation containing Eucommia ulmoides Oliv. as the principal drug,by a reverse-phase high-performance liquid chromatographic method (RP-HPLC) . Methods The extract ofQing'e Pill was refluxed with 75% ethanol, purified on an AB-8 macroporous adsorption resin columnand then injected into HPLC system. The HPLC assay was performed on an ODS analytical column with amixture of methanol-acetonitrile-water (24:3:78, V/V/V) as the mobile phase at a flow-rate of 1.0mL·min^(-1), and a UV detector set at 227 nm. Results Good linearity between peak area andconcentration was found in the range of 5.5 - 170 μg·mL^(-1) for pinoresinol diglucopyranoside ( r> 0.9998) . The average recovery was 99.3%. The intra-day assay RSD and the inter-day assay RSDwere 1.3% and 2.8%, respectively (n = 5). The content of pinoresinol diglucopyranoside in Qing'ePill was determined to be 0.446 +- 0.012 mg·g^(-1) (n = 10). Conclusion The RP-HPLC method wasproved to be sensitive, specific, accurate and precise for the determination of pinoresinoldiglucopyranoside in Qing' e Pill. 展开更多
关键词 RP-HPLC pinoresinol diglucopyranoside qing'e pill
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