阿龙山病毒及松岭病毒多重实时荧光定量RT-PCR快速检测方法的建立

目的 建立一种多重实时荧光定量反转录聚合酶链式反应(多重实时qRT-PCR)法,用于阿龙山病毒(Alongshan virus,ALSV)及松岭病毒(Songling virus,SGLV)核酸的快速检测。方法 针对ALSV NS 3基因和SGLV S基因保守区设计特异性引物及TaqMan探针,建立针对2种病毒的多重实时qRT-PCR检测方法,评价方法的特异性、灵敏度和重复性,并应用蜱标本对该方法进行应用评价。结果 该检测方法与森林脑炎病毒等其他6种虫媒病毒无交叉反应,灵敏度达1×101拷贝/μl,重复性检测的循环阈值(Ct)变异系数均<2.00%;运用该方法,从2019年黑龙江省采集的30组蜱标本中检出2组ALSV阳性,1组SGLV阳性。经验证,该方法与普通PCR方法检测结果的一致性为100%。结论 建立了敏感性高、特异性好的ALSV和SGLV多重实时qRT-PCR快速检测方法。

黑龙江省桦南县蜱中松岭病毒的检测

目的对2023年采集自黑龙江省佳木斯市桦南县的蜱标本进行松岭病毒筛查。方法采用形态学方法对蜱标本进行分类鉴定,反转录实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)方法对采集的蜱标本进行松岭病毒(Songling virus,SGLV)筛查,并通过Sanger测序法获得阳性病毒基因序列信息。结果共采集421只蜱标本,包括森林革蜱184只(43.71%),全沟硬蜱115只(27.32%),日本血蜱32只(7.60%),嗜群血蜱43只(10.21%),长角血蜱7只(1.66%)及未鉴定若蜱40只(9.50%),其中1只雌性嗜群血蜱(编号:2023JMS365)经RT-qPCR检测为SGLV核酸阳性。系统进化分析显示,2023JMS365基因组L、M和S节段与SGLV参考株HLJ1202株的核苷酸一致性分别为96.78%、92.11%和97.59%,氨基酸一致性分别为99.22%、97.50%和93.28%。结论首次在黑龙江省佳木斯市桦南县的嗜群血蜱中检测到松岭病毒。