人松弛素H2类似物在毕赤酵母中的高效表达及其活性

目的利用毕赤酵母表达系统高效分泌表达人松弛素H2类似物(Human relaxin-2 analogue,HR2),并检测其生物活性。方法通过密码子优化合成HR2基因,构建重组表达质粒pPICZαA-HR2,转化毕赤酵母菌GS115,甲醇诱导表达,并对表达产物进行Tricine-SDS-PAGE和Western blot分析。表达产物经超滤和柱层析纯化后,切除人工C肽,检测其生物活性。结果经双酶切鉴定和测序证实,重组表达质粒pPICZαA-HR2构建正确;Tricine-SDS-PAGE分析显示,表达的重组蛋白相对分子质量约6 500,表达量占菌体总蛋白的47.6%,为451μg/ml,且为分泌表达;Western blot分析显示,重组蛋白具有良好的反应原性;纯化的重组蛋白纯度达96%;经检测C肽切除的重组HR2对THP-1细胞具有刺激活性。结论成功在毕赤酵母GS115中高效分泌表达了重组松弛素H2类似物,并具有一定的生物活性。

慢性心力衰竭患者血浆H2松弛素的表达

目的：探讨内源性H2松弛素（H2RLX）在慢性心力衰竭患者中的表达以及与NYHA分级的关系，研究其对慢性心力衰竭患者预后的预测作用。方法：选取2012年7月至2012年12月住院患者140例，慢性心力衰竭组109例，对照组31例。2组患者均予入院第1天清晨平卧、静息状态下抽取静脉血以检测LDL-胆固醇、血红蛋白、空腹血糖、肌酐清除率、脑钠肽（BNP）等，用ELISA法检测血H2RLX、I型胶原的表达量，心脏超声评估左心室射血分数（LVEF）。结果：①慢性心力衰竭组血浆H2RLX水平[0.604（0.419～0.743）pg/mL]，与对照组[0.390（0.355～0.425）pg/mL]比较显著升高，差异有统计学意义（P＜0.05）；②NYHA分级越高，慢性心力衰竭组H2RLX和I型胶原升高趋势越显著，差异有统计学意义（P＜0.05）；③H2RLX与I型胶原呈显著正相关，差异有统计学意义（r=0.885，P＜0.001）；④H2RLX水平对慢性心力衰竭患者半年内心血管事件预后有预测作用。结论：慢性心力衰竭患者血浆中H2RLX表达升高，其可能参与心室纤维化过程；血浆H2RLX水平有助于慢性心力衰竭严重程度的评估，并对心血管事件的预后有预测作用。

电刺激联合Kegal法对盆底功能障碍产妇血清松弛素H2和阴道壁松弛素受体LGR7 mRNA水平的影响

目的分析电刺激联合Kegal法对盆底功能障碍产妇血清松弛素H2和阴道壁松弛素受体LGR7 mRNA水平的影响。方法选取2013年8月-2019年4月杭州市余杭区第二人民医院收治的80例盆底功能障碍产妇为研究对象,按随机数字表分为研究组与对照组,每组40例。对照组采用Kegal法治疗,研究组联合电刺激治疗,连续治疗6周。比较两组患者治疗前后血清松弛素H2及LGR7 mRNA水平,盆底肌纤维电压,尿失禁次数及PFIQ-7评分。结果治疗前,两组患者血清松弛素H2及LGR7 mRNA水平,Ⅰ类、Ⅱ类肌纤维电压,尿失禁次数和PFIQ-7评分比较差异均无统计学意义(均P>0.05)。治疗后,两组患者血清松弛素H2及LGR7 mRNA水平均明显降低,其中研究组均低于对照组(均P<0.05);两组患者Ⅰ类、Ⅱ类肌纤维电压均明显升高,其中研究组均高于对照组(均P<0.05);两组患者尿失禁次数和PFIQ-7评分均明显降低,其中研究组均低于对照组(均P<0.05)。结论电刺激联合Kegal法训练是治疗盆底功能障碍的有效手段,对患者松弛素H2及LGR7 mRNA水平有显著改善作用,可能是促进患者病情和生活质量改善的机制之一。

H2型松弛素促进人血管平滑肌细胞迁移的作用及机制

目的探讨H2型松弛素(Relaxin-2)对血管平滑肌细胞(VSMCs)迁移的作用及分子机制。方法采用划痕实验和Transwell实验检测Relaxin-2对VSMCs的迁移作用;采用蛋白质印迹法检测其对细胞信号蛋白丝氨酸苏氨酸蛋白激酶(Akt)、细胞外信号调节激酶(ERK)、核因子-κB(NF-κB)p65的影响。结果 Relaxin-2可剂量依赖性促进VSMCs的迁移,应用NF-κB抑制剂BAY 11-7082可阻断Relaxin-2诱导的基质金属蛋白酶-9(MMP-9)和基质金属蛋白酶-2(MMP-2)的表达,磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)抑制剂LY294002和ERK抑制剂U0126预处理可以降低Relaxin-2引起的NF-κB p65的激活。结论 Relaxin-2可能通过活化PI3K/Akt和ERK信号通路激活NF-κB p65,进而促进MMP-9和MMP-2的表达,从而诱导VSMCs迁移效应。

H2型松弛素对血管平滑肌细胞增殖的效应及机制

目的探讨H2型松弛素对血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的作用及分子机制。方法应用不同浓度H2型松弛素(10-9、10-8、10-7、10-6、10-5mol·L-1)处理人VSMC,采用细胞计数试剂盒、氚标记胸腺嘧啶核苷(3HTdR)掺入实验和5-乙炔基-2'脱氧尿嘧啶核苷(Ed U)掺入实验检测其对VSMC增殖的作用,免疫印迹法检测其对细胞表型蛋白、细胞周期蛋白和信号蛋白丝氨酸/苏氨酸激酶(Akt)、细胞外调节蛋白激酶(ERK)、核转录因子κB p65(NF-κB p65)的影响。结果 CCK-8试剂盒检测结果显示,10-9、10-8、10-7、10-6、10-5mol·L-1H2型松弛素对人VSMC的增殖效应高于0 mol·L-1(P<0.05),且浓度越高,增殖效应越明显(P<0.05)。Ed U掺入和3H-TdR掺入实验进一步证实H2型松弛素对人VSMC有增殖效应。H2型松弛素处理12 h可降低VSMC收缩表型蛋白标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和平滑肌肌动蛋白-22α(SM22α)的蛋白表达,但可增加VSMC合成表型蛋白标志物骨桥蛋白的表达。H2型松弛素处理VSMC可以激活Akt、ERK和NF-κB p65等关键信号蛋白。结论 H2型松弛素可能通过调控细胞周期蛋白及激活Akt、ERK和NF-κB等细胞增殖的关键信号通路,并能促进VSMC表型的转变,进而引起VSMC过度增殖。

H2-RLX抑制SSc皮损成纤维细胞增殖和向肌成纤维细胞转分化的研究

目的:探讨成纤维细胞(FB)向肌成纤维细胞(MFB)转分化在系统性硬化症(SSc)发病机制中的作用和H2松弛素(H2-RLX)在SSc中的抗纤维化作用机制。方法:体外培养SSc患者皮损和正常皮肤FB及鉴定;免疫细胞化学法定性、ELISA法定量检测FB中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)而了解MFB比重;施加并观察H2-RLX对SSc FB增殖和转分化为MFB的影响。结果:两组FB的细胞形态无明显不同;SSc组α-SMA阳性率均值高于对照组(P<0.01);随培养时间的延长,两组α-SMA量均渐增多(P均<0.01),但在培养的24、48、72 h,SSc组α-SMA量分别高于对照组(P均<0.05);H2-RLX 1μg/L对FB增殖和α-SMA量无明显影响,而10μg/L和100μg/L则完全地抑制FB增殖和α-SMA量(P均<0.05),以100μg/L时抑制作用最强。结论:SSc患者皮损来源的FB存在强烈地向MFB转分化的特性,H2-RLX则可通过抑制FB增殖及转分化为MFB而在SSc中发挥抗纤维化作用。

产后盆底功能障碍的发生情况及其对阴道壁松弛度和性生活质量的影响

目的:调查分析产后盆底功能障碍发生情况及其对患者阴道壁松弛度和性生活质量的影响。方法:回顾性分析1100例产后妇女盆底筛查结果,统计盆底功能障碍发生率及相关因素,另外比较盆底功能障碍(观察组)与盆底功能正常(对照组,年龄,分娩次数,分娩孕周与观察组类似)妇女血清松弛素H2水平,阴道松弛分度及性生活质量相关评分。结果:产后盆底功能障碍发生196例,占比17.82%;阴道分娩,第二产程延长产妇产后盆底功能障碍发生率分别显著高于剖宫产,第二产程正常者(P<0.05);观察组血清松弛素H2水平为(39.62±16.25)ng/m L,比对照组的(33.78±7.00)ng/m L差异有统计学意义(P<0.05);观察组阴道松弛发生率及其严重程度显著高于对照组(P<0.05);观察组性生活质量问卷(SLQQ),性功能量表(PISQ-12)各项评分及总分均显著高于对照组(P<0.05)。结论:产后盆底功能障碍发生几率较大,其发生与阴道分娩,第二产程延长密切相关;产后盆底功能障碍会造成阴道不同程度松弛,严重影响妇女性生活质量及性功能,为此加强盆底功能障碍防治至关重要。

矽尘作业工人血清细胞因子和多肽的检测

目的探讨矽尘作业工人血清不同细胞因子和多肽表达的改变。方法分别选取健康体检者和矽尘作业工人作为对照组和接尘组,采用酶联免疫吸附法检测血清松弛素H2、转化生长因子β1(TGFβ1)、白细胞介素-2(IL-2)、白细胞介素-4(IL-4)和γ-干扰素(INF-γ)水平。结果在男性中,与对照组相比,接尘组血清TGFβ1含量增加、IL-4含量减少,差异均有统计学意义(t=-2.747,P=0.009;t=4.062,P=0.000),松弛素H2、IL-2和INF-γ含量差异均无统计学意义(P>0.05)。在女性中,与对照组相比,接尘组血清松弛素H2、TGFβ1、IL-2、IL-4和INF-γ含量差异均无统计学意义(P>0.05)。结论血清TGFβ1和IL-4表达水平对于男性接尘作业工人早期免疫损伤的分析有重要的意义。