忍冬木层孔菌多糖的提取工艺优化及其体外抗氧化活性研究

忍冬木层孔菌(Phellinus lonicerinus(Bond.) Bond.et Sing)为湖北等地习用的桑黄品种,也是土家族常用药,多糖是其主要活性成分。为了研究忍冬木层孔菌子实体多糖(Phellinus lonicerinus polysaccharide, PLP)的提取工艺及其体外抗氧化活性,采用冷凝回流提取法在单因素实验结果的基础上,进行Box-Behnken响应面分析,确定PLP的最佳提取工艺,并通过测定忍冬木层孔菌多糖(PLP30、PLP60、PLP85、PLPA1和PLPA2)的还原能力、对DPPH、ABTS、羟基自由基的清除能力、对酪氨酸酶活性的抑制能力。结果显示PLP最佳提取工艺的参数为:料液比1∶20 g/mL、提取时间120 min、提取温度100℃,此条件下PLP提取率为(3.16±0.05)%;五种多糖对DPPH、ABTS和羟基自由基均具有较强的清除作用,且具有较强的还原力,其对ABTS自由基清除作用和还原力均与浓度呈量效关系。表明忍冬木层孔菌子实体多糖具有良好的体外抗氧化和一定的酪氨酸酶活性抑制能力。

药用层孔菌发酵液控油及收缩毛孔机理及功效研究

将药用层孔菌和乳酸菌进行双向发酵得到药用层孔菌发酵液,检测药用层孔菌发酵液和药用层孔菌水提液的活性成分含量,从分子、细胞、动物和人体等方面研究药用层孔菌发酵液在控油和收缩毛孔等方面的功效作用,结果表明,药用层孔菌发酵液具有更高的活性成分含量、可以减少ABTS自由基的生成、抑制炎症因子TNF-α和IL-6的表达、调控5α还原酶活性、减少皮肤油脂分泌、促进Ⅰ型胶原蛋白(COL-Ⅰ)的表达、抑制金属蛋白酶-1(MMP-1)表达、具有收缩毛孔的趋势,具备成为具有控油和收缩毛孔功效的化妆品原料的潜力。

活性氧在红缘拟层孔菌杀伤白血病细胞中的作用研究

红缘拟层孔菌抗肿瘤作用受到广泛关注,但其弱极性化合物对白血病细胞的增殖抑制及作用机制尚缺乏实验证据。采用MTT法评价红缘拟层孔菌不同极性组分抗肿瘤活性,结果显示氯仿组分(FPKc)可显著抑制U937细胞的增殖;进而结合流式细胞术分析FPKc杀伤白血病细胞的作用机制,发现其能够显著提升胞内活性氧含量,同时伴随细胞质膜电位下降、胞内钙离子浓度上升、线粒体膜电位崩解、细胞凋亡率增加,而活性氧抑制剂则能明显缓解细胞凋亡的发生,提高细胞存活率。因此,FPKc可能调控活性氧的过量生成促进U937细胞的死亡。

松木层孔菌多糖的提取及抗氧化性研究

首次从松木层孔菌子实体中分离制备3种多糖,并对其抗氧化性进行了研究。结果表明:水提多糖(PSⅠ)、碱提多糖(PSⅡ)、磺化多糖(PSⅢ)均为β构型,单糖组成以葡萄糖为主(87.43%￣90.17%),其次为甘露糖、半乳糖、木糖、核糖。3种多糖分子量分别为230kDa、29kDa、27kDa,均与少量蛋白结合,形成多糖肽,蛋白质含量分别为18.69%、6.72%、2.56%。抗氧化结果表明PSⅡ和PSⅢ的抗氧化效果最好。两种多糖在浓度为1.25mg/mL时,对超氧阴离子自由基的清除率均达到90%以上,在12mg/mL时,羟自由基清除率分别达到81.25%和85.37%,在浓度为10.6mg/mL时,丙二醛生成抑制率均达到65%左右。因此PSⅡ和PSⅢ可作为优良的抗氧化剂应用于食品和保健品领域。

松木层孔菌多糖PP60-S1分离、结构表征及抗氧化活性研究

松木层孔菌子实体水提物经乙醇分级醇沉和DEAE-Sepharose Fast Flow离子柱层析及Sephacryl S-300凝胶柱层析纯化,获得均一多糖PP60-S1,其分子量为3.56×104u,是由葡萄糖、甘露糖和半乳糖组成的杂多糖,单糖摩尔比为9.24∶1.00∶0.76,甲基化分析PP60-S1主要由1-Glc、1,3-Glc、1,6-Glc、1,3-Gal、1,6-Gal、1,3,6-Man 6种糖苷键连接方式,主链主要由1,6-Glc构成。PP60-S1的体外抗氧化活性研究表明其具有一定的DPPH自由基和ABTS+自由基清除活性以及FRAP总抗氧化能力。

桑黄裂蹄针层孔菌提取物生物活性成分及功能特性分析

以桑黄裂蹄针层孔菌(Phellinus linteus)为研究对象,采用6种溶剂对其进行提取,对提取物中多酚和麦角甾醇的含量进行测定,并对每种溶剂提取物的体外抗氧化和α-葡萄糖苷酶抑制活性进行分析。结果表明:乙醇提取物的多酚含量最高为(3.03±0.27)mg GAE/g DW。乙醇、丙酮和乙酸乙酯提取物麦角甾醇含量相当且显著高于其他溶剂提取物。乙醇提取物具有最高的DPPH自由基、ABTS+自由基清除能力[IC50分别为(23.37±0.83)、(78.42±1.28)μg/mL]、铁还原能力[(50.05±1.90)mmol/g]和α-葡萄糖苷酶抑制活性[IC50为(13.95±0.79)μg/mL]。相关性分析表明桑黄裂蹄针层孔菌的多酚含量与其ABTS+自由基清除能力、铁还原能力和α-葡萄糖苷酶抑制活性间具有显著相关性(p<0.05),且相互协同的酚酸类物质是潜在的功能成分。

松木层孔菌多糖的微波提取和体外活性研究

以多糖提取率为评价指标,Box-Behnken响应面法优化松木层孔菌子实体多糖微波提取工艺,并研究多糖的体外抗氧化和α-葡萄糖苷酶抑制活性,得到松木层孔菌多糖提取的优化工艺为:微波功率为600W,料液比1︰40,提取温度92℃,提取时间60min;二次提取后多糖累计提取率为3.88%,多糖对DPPH和ABTS·+自由基的半清除浓度(EC50)分别为2.59mg/mL和6.44mg/mL,FRAP值为0.27mmolFeSO4/mg多糖,对α-葡萄糖苷酶的半抑制浓度(IC50)为2.17mg/mL。表明松木层孔菌多糖具有一定的抗氧化和抑制α-葡萄糖苷酶活性。

松木层孔菌粗多糖提取工艺的研究

对松木层孔菌发酵菌丝体多糖的提取工艺进行了研究，通过单因素试验和正交试验L9（33），研究了提取次数、浸液比和提取时间对多糖提取率的影响，结果显示提取次数、浸液比和提取时间是影响多糖提取率的主要因素，最佳工艺为提取温度常温，提取3次，每次浸液比（质量比）1：30，时间是1h。各因素影响大小的次序是：提取次数，浸液比）．提取时间。

瓦尼木层孔菌培养基优化及抗炎作用研究

瓦尼木层孔菌又名杨黄菌,是近年来发现的一种具有药用价值的真菌,具有抗炎、抗氧化、抗肿瘤和增强免疫力等作用,特别是从杨黄菌中得到的提取物——杨黄多糖,对溃疡性结肠炎有一定的治疗作用。但杨黄菌多为野生,人工栽培所需时间长、获得杨黄的相关报道较少,也限制了对其培养条件的深入研究,特此对临清杨黄的培养基配方进行优化,通过研究培养基中碳源、氮源以及其他无机离子和生长因子对杨黄生长的影响改善杨黄菌的人工培养技术,提高其产量。

松针层孔菌碱溶性多糖对单核巨噬细胞活性氧和增殖的影响

目的研究松针层孔菌碱性多糖对单核细胞活性氧、凋亡和增殖的影响。方法自干燥松针层孔菌分离中等分子量松针层孔菌碱溶性多糖(MASPP)。体外培养单核系THP-1,采用不同浓度的MASPP(0、50、100、200 mg/L)诱导细胞24 h,流式细胞术检测活性氧和凋亡。不同浓度MASPP处理细胞72 h,WST-1还原法检测细胞增殖。结果诱导24 h,MASPP以浓度依赖方式导致细胞内活性氧减少。对照组和200 mg/L MASPP组凋亡细胞百分率分别为4.32%和12.37%。MASPP处理72 h对细胞增殖有抑制作用,200 mg/L MASPP组的细胞增殖抑制率为(34.3±3.8)%。结论 MASPP可降低单核细胞活性氧、抑制细胞增殖并诱导细胞凋亡。

松针层孔菌的质量标准研究

目的:控制松针层孔菌Phellinus pini药材质量,制订药材质量标准,为其进一步开发利用提供依据.方法:采用性状、显微、薄层鉴别药材;按照2015年版中国药典四部通则方法测定水分、总灰分、酸不溶性灰分及浸出物含量,以Hispolon作对照品,TLC法定性鉴别,HPLC法进行含量测定,紫外-可见分光光度法测定总酚含量.结果:松针层孔菌不同部位性状、显微特征及薄层色谱区别明显,能较好地和同属其他真菌相区分;Hispolon的平均含量为0.0160%,拟定Hispolon的含量不得低于0.01%;总酚的平均含量为0.238%,拟定总酚的含量不得低于0.20%;水分不得过13.0%;总灰分不得过2.0%;酸不溶性灰分不得过1.0%;水溶性浸出物不得低于2.0%;醇溶性浸出物不得低于4.0%.结论:建立的松针层孔菌药材的质量标准可全面、有效地控制药材质量,为临床合理、有效、安全用药提供参考.

松木层孔菌母种培养基的筛选

目的筛选出松木层孔菌的最佳母种培养基配方。方法将等量松木层孔菌菌丝分别接种4种不同的固体培养基上,定期观察各组培养基上菌丝的长势和老化度。结果麸皮培养基生长速度快,老化速度最慢,适于作扩种繁殖和菌种保存培养基。结论麸皮培养为松木层孔菌母种培养基的最佳选择。

松木层孔菌的液化与红外光谱分析

【目的】优化苯酚—硫酸法液化松木层孔菌的工艺参数,分析液化前后松木层孔菌化学官能团变化,揭示其液化机理,为废弃松木层孔菌的高效利用开辟一条新途径。【方法】以松木层孔菌为原料、浓硫酸为催化剂、苯酚为液化剂,考察料液比(原料/苯酚)、液化温度、液化时间和催化剂用量对松木层孔菌液化率的影响,并通过红外光谱对松木层孔菌原料和液化残渣进行分析。【结果】4个因素对松木层孔菌液化率影响排序为料液比>液化时间>催化剂用量>液化温度,优化的液化工艺参数为:料液比1∶6、液化温度170℃、液化时间75 min、催化剂用量0.30 g,在此条件下,松木层孔菌液化率为48.64%。液化前后松木层孔菌红外光谱特征峰的形状和吸收位置均发生明显变化,3366 cm-1的活泼氢吸收峰在液化后发生红移,酰胺羰基吸收峰则分别由1697和1657 cm-1移至1701 cm-1,由1554 cm-1移至1612和1512 cm-1。【结论】采用苯酚—硫酸法可有效液化松木层孔菌,松木层孔菌含氮主要成分几丁质发生脱乙酰化反应,液化产物含有大量酚类物质,可进一步用于制备高附加值化工产品,为高等真菌菌渣的综合利用开辟新途径。

药用真菌针层孔菌的研究进展

目的综述近30年药用真菌针层孔菌在菌丝培养、化学成分、药理作用等方面的研究进展。方法查阅近30年国内外有关针层孔菌的研究文献,并进行分析、总结。结果已有学者对针层孔菌的菌丝培养、化学成分和药理活性等方面进行了一系列的研究,发现该真菌含有多种化学成分,且具有抗肿瘤、保护肝脏等多种药理活性。结论针层孔菌是一种极具研究和开发价值的药用真菌,应在生物学特性、人工栽培、化学、药理等方面进一步研究。

木蹄层孔菌多糖对小鼠免疫功能的影响

目的初步探讨木蹄层孔菌多糖(FFP)的免疫调节作用。方法MTT法检测免疫细胞的代谢活力,ELISA法检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)、干扰素γ(IFN-γ)、白细胞介素2(IL-2)的含量,鸡红细胞吞噬法检测巨噬细胞的吞噬功能,绵羊红细胞免疫法检测小鼠体液免疫功能。结果发现FFP(100,50,25μg/ml)可以明显促进小鼠脾细胞代谢活力,促进脾细胞分泌细胞因子TNF-α、IFN-γ、IL-2;显著增强腹腔渗出细胞代谢活力,促进腹腔渗出细胞分泌TNF-α。FFP(100、50、25mg/kg)显著增强绵羊红细胞(SRBC)所致小鼠特异性抗体生成。FFP(100、50mg/kg)可以增强小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞(CRBC)的吞噬率和吞噬指数。结论木蹄多糖可促进小鼠免疫细胞分泌细胞因子TNF-α、IFN-γ、IL-2和增强小鼠的体液免疫功能及巨噬细胞的吞噬功能。

层孔菌产漆酶的摇瓶最适培养条件研究

筛选到一株高产漆酶的层孔菌W 1 ,对其液体产漆酶的培养条件进行了优化 ,确定了最适的碳源、氮源 ,并用正交试验确定了培养基中碳源和氮源的浓度。在最优化的培养条件下 ,培养 7d后 ,W 1产生的漆酶活力可以达到 7 1U/mL。采用补料的方法 ,可以得到大量的漆酶粗酶液。

层孔菌属真菌抗氧化活性物质测定及抗氧化能力分析

本文以层孔菌属真菌液体发酵产物作为研究材料,测定抗氧化活性物质含量,并利用多种抗氧化测定方法,分析不同菌株的体外抗氧化能力,评价活性物质含量间、抗氧化方法间及抗氧化方法与含量间的相关性。研究结果表明,供试菌株活性物质含量间的差异较大,其中菌株H2粗多糖和总酚含量较高,菌株S黄酮含量较高,且活性物质含量间相关性不大;针对供试菌株抗氧化能力测定结果表明,菌株H2具有较高的还原力、铁离子螯合能力,菌株H2和H9的羟自由基清除作用最强,菌株H2和L的DPPH自由基清除作用最强,菌株H2、H5、H8、H9具有较高的超氧自由基清除作用,且不同方法间存在较大差异,羟自由基与DPPH自由基、铁离子螯合能力及还原力,DPPH自由基与铁离子螯合能力和还原力,以及铁离子螯合能力与还原力这几种方法的相关性较高(P<0.01);总酚含量与羟自由基、DPPH自由基、铁离子螯合能力及还原力方法具有较高的相关性(P<0.01);总黄酮含量与DPPH自由基、铁离子螯合能力及还原力方法间相关系数分别为0.810(P<0.01)、0.725、0.738(P<0.05);粗多糖含量与各测定方法间的相关系数较低,以上结果说明多酚类物质和黄酮类物质是抗氧化作用的重要因子,对抗氧化能力具有重要贡献。

木蹄层孔菌化学成分及不同提取物体外抗肿瘤活性研究

采用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、水饱和的正丁醇对木蹄层孔菌95%乙醇提取物进行分离,运用MTT比色法对各提取物进行体外抗肿瘤活性的测定。结果表明氯仿提取物对Hela细胞表现出较强的抑制作用,在测定浓度范围内呈现出良好的剂量依赖性抑制作用,而乙酸乙酯和正丁醇提取物在同一测定浓度范围内抑制作用不如氨仿提取物,其中石油醚提取物抑制作用最弱。化学预试表明,木蹄层孔菌中存在酚性成分,有机酸,糖、多糖和苷类,内酯、香豆素及其苷类,植物甾醇、萜类化合物,蒽醌及其苷类。

苯酚-硫酸法测定瓦尼木层孔菌菌丝体多糖含量的条件优化

对瓦尼木层孔菌菌丝体多糖含量的测定进行了探讨,研究了在苯酚-硫酸法中吸收波长、显色温度、显色时间、浓硫酸用量、苯酚用量等因素对显色结果的影响。通过实验发现,最佳显色条件是波长492nm、显色温度100℃、显色时间20min、浓硫酸用量4.5mL、苯酚用量0.4mL,平均加样回收率100.7%,相对标准偏差(RSD)为0.67%。

松木层孔菌生物炭的制备及其对甲基橙的吸附性能

以松木层孔菌菌渣为原料制备生物炭,并将其应用于甲基橙水溶液的吸附。研究了生物炭用量、吸附温度、吸附时间和超声功率对松木层孔菌生物炭吸附性能的影响,并通过热重分析、比表面积及孔径分析和傅里叶红外光谱分析揭示了松木层孔菌生物炭吸附性能与其结构的关系。结果表明:在超声辅助作用下,生物炭用量对松木层孔菌生物炭吸附甲基橙效果的影响最大;氯化锌改性松木层孔菌生物炭吸附能力比未改性的要好,其主要原因是改性松木层孔菌生物炭因其多孔结构具有更大的比表面积,而且表面官能团种类和数量更加丰富。