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禾谷镰刀菌醛脱氢酶(ALDH)基因敲除突变体的转录组分析
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作者 唐磊 翟焕趁 +5 位作者 葛锦雯 张帅兵 吕扬勇 魏闪 马平安 胡元森 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期733-744,共12页
【目的】对野生型PH-1菌株和醛脱氢酶(ALDH)基因FGSG_04194敲除突变体(ΔFg04194)进行转录组测序,分析禾谷镰刀菌ALDH调控菌丝生长和脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)生成情况,为深入探究禾谷镰刀菌ALDH的生物学功能、DON生成机制及致病机理提... 【目的】对野生型PH-1菌株和醛脱氢酶(ALDH)基因FGSG_04194敲除突变体(ΔFg04194)进行转录组测序,分析禾谷镰刀菌ALDH调控菌丝生长和脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)生成情况,为深入探究禾谷镰刀菌ALDH的生物学功能、DON生成机制及致病机理提供了理论依据。【方法】接种禾谷镰刀菌野生型PH-1、ΔFg04194突变体和基因回补突变体(ΔFg04194-C)菌株至CM培养基和小麦基质中,分析FGSG_04194基因对菌丝生长和DON生成的影响。利用高通量转录组测序技术对野生型PH-1菌株和ΔFg04194突变菌株在CM培养基中培养72 h的菌丝进行转录组测序,对筛选出的差异表达基因(DEGs)进行GO功能注释和KEGG信号通路富集分析,利用实时荧光定量PCR对转录组测序结果进行验证。【结果】ΔFg04194突变体的菌落直径和生成的DON含量较野生型PH-1和ΔFg04194-C突变体菌株显著减少(P<0.05,下同)。野生型PH-1和ΔFg04194突变体转录组原始数据经过滤后获得34.9 Gb Clean data,共鉴定出329个DEGs,其中263个基因表达显著上调,66个基因表达显著下调。GO功能注释结果显示,DEGs显著富集在质膜成分、碳水化合物代谢和物质转运过程等条目上。KEGG信号通路富集分析显示,DEGs显著富集在碳水化合物代谢通路、氨基酸代谢通路、脂质代谢、能量代谢、生物降解代谢通路、细胞生长和死亡相关途径、信号转导途径等。将FGSG_04194基因调控下有代表性的DEGs分成五大类:几丁质合成相关的基因、跨膜转运蛋白相关的基因、转录因子相关基因、脂质代谢相关基因和能量代谢相关的基因。ΔFg04194突变体的ATP含量显著高于野生型PH-1和ΔFg04194-C突变体。运用实时荧光定量PCR检测7个DEGs的表达情况,其结果与转录组测序结果基本一致。【结论】FGSG_04194影响禾谷镰刀菌的菌丝生长和DON生成,并在ATP生成中起负调控作用,其机制可能与调控转录因子的表达、调控脂类代谢、氨基酸代谢和能量代谢等通路有关。 展开更多
关键词 禾谷镰刀菌 转录组测序 差异表达基因
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醛脱氢酶2与人类疾病的关系及其小分子激动剂研究
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作者 孙湘沛 高兴 +5 位作者 赵凤平 王文涛 张天亦 田巍 郑灿辉 陈新 《药学实践与服务》 CAS 2024年第1期6-11,共6页
醛脱氢酶2(ALDH2)是人体内重要的抗氧化应激损伤因子之一,而较高比例的东亚人携带ALDH2失活突变基因。与ALDH2密切相关的疾病有很多,如心血管疾病、神经退行性疾病和肝脏疾病等。近期研究还发现ALDH2与铁死亡也有联系。正因如此,ALDH2... 醛脱氢酶2(ALDH2)是人体内重要的抗氧化应激损伤因子之一,而较高比例的东亚人携带ALDH2失活突变基因。与ALDH2密切相关的疾病有很多,如心血管疾病、神经退行性疾病和肝脏疾病等。近期研究还发现ALDH2与铁死亡也有联系。正因如此,ALDH2逐渐成为上述相关疾病治疗的潜在靶点,研究者报道了其多个类型的小分子激动剂,展现出一定的应用前景。本文重点介绍ALDH2的结构、功能、与人类疾病的关系以及其激动剂的研究进展。 展开更多
关键词 2 氧化应激损伤 突变体 铁死亡 小分子激动剂
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抗氧化酵母醛脱氢酶提取物对鱼肉模拟消化过程中脂肪氧化的影响 被引量:1
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作者 肖毓 徐莉娜 +4 位作者 刘慧 周湘人 郭薇丹 何英杰 付湘晋 《食品工业科技》 CAS 北大核心 2023年第11期404-410,共7页
鱼肉脂质在消化过程中可能发生明显氧化,产生有害醛类。本文以脂肪过氧化值(peroxidation value,POV)、硫代巴比妥酸反应物值(thiobarbituric acid reactant value,TBARS)、醛类化合物和多不饱和脂肪酸含量作为评价指标研究了一株抗氧... 鱼肉脂质在消化过程中可能发生明显氧化,产生有害醛类。本文以脂肪过氧化值(peroxidation value,POV)、硫代巴比妥酸反应物值(thiobarbituric acid reactant value,TBARS)、醛类化合物和多不饱和脂肪酸含量作为评价指标研究了一株抗氧化酵母醛脱氢酶(aldehyde dehydrogenase,ALDH)提取物对鱼肉模拟消化过程中脂肪氧化的影响。结果表明,在模拟胃肠道消化过程中,空白鱼肉(CK)在模拟消化5 h后POV从(0.12±0.06)meq/kg增加到(1.14±0.12)meq/kg,加入ALDH提取物的鱼肉(FE)模拟消化5 h后POV为(0.69±0.08)meq/kg,而加入包埋ALDH的鱼肉(EB)POV为(0.13±0.06)meq/kg;CK组TBARS值从(0.77±0.11)mg/kg增加到(2.31±0.13)mg/kg,而FE、EB组的TBARS值分别为(0.79±0.09)mg/kg和(0.19±0.09)mg/kg;模拟消化物中含量较多的醛包括壬醛、己醛、2-庚醛、壬二烯醛、2-己烯醛等;CK组的醛含量在消化过程中迅速增加,FE、EB组醛含量逐渐减少,消化结束时己醛、壬醛、2-庚醛含量已低于检测限。CK组鱼肉中EPA、DHA在消化过程中氧化损失分别为59%和58%,FE组的损失值分别为35%和32%,EB组的损失值分别为20%和26%。本研究证明了抗氧化酵母ALDH提取物可以很好地抑制鱼肉在模拟消化过程中的脂肪氧化并有效消减因脂肪氧化产生的有害物质。酵母酶提取物可能是控制脂质氧化致餐后氧化应激的新型有效活性制剂。 展开更多
关键词 鱼肉脂质氧化 酵母提取物 活泼羰基化合物(RCCs) 气相色谱-质谱法(GC-MS) 鱼肉模拟消化
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斯氏艾美耳球虫3-磷酸甘油醛脱氢酶重组蛋白对兔的免疫保护效果评价
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作者 郑若愚 任永军 +4 位作者 肖洁 白鑫 蒲家艳 陈浩 杨光友 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期2581-2595,共15页
旨在评价斯氏艾美耳球虫重组蛋白Es-GAPDH对兔的免疫保护效果,为兔斯氏艾美耳球虫重组亚单位疫苗的研制奠定基础。利用相对荧光定量PCR分析Es-GAPDH在斯氏艾美耳球虫不同发育时期的转录水平,并对Es-GAPDH进行原核表达与蛋白纯化;然后将4... 旨在评价斯氏艾美耳球虫重组蛋白Es-GAPDH对兔的免疫保护效果,为兔斯氏艾美耳球虫重组亚单位疫苗的研制奠定基础。利用相对荧光定量PCR分析Es-GAPDH在斯氏艾美耳球虫不同发育时期的转录水平,并对Es-GAPDH进行原核表达与蛋白纯化;然后将42只45日龄无球虫幼兔随机分为5组(空白对照组、不免疫攻虫组、Trx-His-S tag攻虫对照组、Quil-A saponin攻虫对照组和rEs-GAPDH免疫组),分别经颈部皮下注射1 mL PBS、1 mL PBS、1 mL PBS含100μg pET-32a空载蛋白含1 mg Quil-A、1 mL PBS含1 mg Quil-A、1 mL 100μg rEs-GAPDH含1 mg Quil-A,首免14 d后同等剂量加强免疫。二免14 d后除空白对照组外,其余各组实验兔经口感染1×10^(4)个斯氏艾美耳球虫孢子化卵囊,攻虫后观察各组临床表现,每周定时采血、称重,感染21 d后剖检观察肝组织病理变化,并测定和统计每组的相对增重、料肉比、肝指数、卵囊排出量、生化指标、特异性IgG抗体以及细胞因子等。结果发现,Es-GAPDH在斯氏艾美耳球虫各个发育阶段均有转录,且转录水平存在差异,在孢子化卵囊阶段转录水平最高。免疫保护试验表明:感染后不免疫攻虫组出现兔肝球虫病典型症状,而rEs-GAPDH免疫组症状不明显。rEs-GAPDH免疫组的卵囊减少率达87.09%,相对增重率显著大于三个攻虫对照组(P<0.05),特异性IgG抗体水平、细胞因子(IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-10、TGF-β)水平均与不免疫攻虫组存在显著差异(P<0.05),组织病理切片也显示,免疫组相较不免疫攻虫组肝组织被破坏程度低,虫体数量较少。综上,斯氏艾美耳球虫重组蛋白rEs-GAPDH可减少增重损失和卵囊排出,能引发宿主体内的细胞免疫和体液免疫应答,具有一定免疫保护作用,可作为斯氏艾美耳球虫重组亚单位疫苗的候选抗原。 展开更多
关键词 斯氏艾美耳球虫 三磷酸甘油 重组蛋白 免疫保护
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乙醛脱氢酶2基因多态性与急性脑梗死的相关性研究 被引量:1
5
作者 司英丽 张冬青 《检验医学与临床》 CAS 2023年第22期3332-3335,共4页
目的探讨乙醛脱氢酶2(ALDH2)基因多态性与急性脑梗死(ACI)的相关性,同时观察不同病灶大小ACI患者4-羟基壬烯醛(4-HNE)水平。方法选取该院2019年8月至2021年8月收治的130例ACI患者作为ACI组,根据头颅CT或MRI检查结果所示病灶大小将ACI组... 目的探讨乙醛脱氢酶2(ALDH2)基因多态性与急性脑梗死(ACI)的相关性,同时观察不同病灶大小ACI患者4-羟基壬烯醛(4-HNE)水平。方法选取该院2019年8月至2021年8月收治的130例ACI患者作为ACI组,根据头颅CT或MRI检查结果所示病灶大小将ACI组进一步分为腔隙性脑梗死组(33例)、小梗死组(41例)和大梗死组(56例)。另选取同期130例体检健康者为对照组,采用聚合酶链反应-荧光探针法对ACI组与对照组人群ALDH2基因位点的多态性进行定性检测。比较ACI组与对照组,以及不同病灶大小ACI患者血清4-HNE水平。结果ACI组ALDH2突变基因型AA比例高于对照组,差异有统计学意义(χ^(2)=4.599,P<0.05)。ACI组A等位基因频率(29.6%,77/260)高于对照组的21.5%(56/260),差异有统计学意义(χ^(2)=4.455,P=0.035)。大梗死组ALDH2突变基因型AA比例高于腔隙性脑梗死组,差异有统计学意义(P<0.05)。大梗死组A等位基因频率(35.7%,40/112)高于腔隙性脑梗死组的21.2%(14/66),差异有统计学意义(χ^(2)=4.133,P<0.05)。ACI组4-HNE水平为(17.79±7.62)ng/mL,高于对照组的(11.83±7.52)ng/mL,差异有统计学意义(t=6.348,P<0.05);腔隙性脑梗死组4-HNE水平为(16.29±8.71)ng/mL,低于小梗死组的(18.30±5.27)ng/mL和大梗死组的(18.31±8.36)ng/mL,差异均有统计学意义(t=-1.225、-1.187,P<0.05)。ACI组中ALDH2基因纯合突变基因型AA患者血清4-HNE水平为(32.65±6.44)ng/mL,高于纯合野生型GG患者的(13.24±3.25)ng/mL和杂合基因型GA患者的(19.89±2.39)ng/mL,差异有统计学意义(t=11.228、6.670,P<0.05)。结论ALDH2基因多态性与ACI的发生密切相关,血清4-HNE水平升高会加大ACI的发病风险。 展开更多
关键词 急性脑梗死 2 基因多态性 4-羟基壬烯
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丙二醛对大鼠肝线粒体呼吸功能及相关脱氢酶活性影响 被引量:39
6
作者 龙建纲 王学敏 +4 位作者 高宏翔 刘昌盛 刘志 缪明永 刘健康 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第10期1131-1135,共5页
目的:探索脂质氧化终产物丙二醛(MDA)在体外对线粒体呼吸链复合物及线粒体内关键酶活性的影响。方法:采用不同浓度MDA体外干预大鼠肝线粒体,氧电极法检测线粒体呼吸控制率(RCR)、磷氧比(P/O),测定呼吸链复合物及α酮戊二酸脱氢酶、丙酮... 目的:探索脂质氧化终产物丙二醛(MDA)在体外对线粒体呼吸链复合物及线粒体内关键酶活性的影响。方法:采用不同浓度MDA体外干预大鼠肝线粒体,氧电极法检测线粒体呼吸控制率(RCR)、磷氧比(P/O),测定呼吸链复合物及α酮戊二酸脱氢酶、丙酮酸脱氢酶、苹果酸脱氢酶活性。结果:线粒体经MDA作用后,以苹果酸/谷氨酸或琥珀酸作底物,线粒体两条呼吸途径对MDA呈现不同的耐受力,前者在MDA100μmol/L时RCR显著降低(P<0.05),400μmol/L时P/O降低(P<0.05);后者MDA浓度达到400和800μmol/L时,线粒体P/O及RCR值显著降低(P<0.05)。丙酮酸脱氢酶及α酮戊二酸脱氢酶分别在50μmol/L和100μmol/L时活性下降(P<0.05),而MDA浓度达到1mmol/L时,苹果酸脱氢酶活性降低(P<0.05)。呼吸链复合物Ⅰ、Ⅱ分别在MDA400和800μmol/L时最大反应速度(Vm)降低(P<0.05),但MDA(0~3.2mmol/L)对呼吸链复合物Ⅲ、Ⅳ的Vm及米氏常数(Km)没有影响。结论:MDA对线粒体呼吸链及α酮戊二酸脱氢酶、丙酮酸脱氢酶、苹果酸脱氢酶存在不同程度的损伤作用,不同酶对MDA损伤的敏感程度有所差异,本研究中相关酶受MDA损伤的次序可能是:丙酮酸脱氢酶、α酮戊二酸脱氢酶、呼吸链复合物Ⅰ、呼吸链复合物Ⅱ、苹果酸脱氢酶、呼吸链复合物Ⅲ、Ⅳ。 展开更多
关键词 丙二 线粒体
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逆境下转BADH基因小麦甜菜碱醛脱氢酶活性表达与甜菜碱积累 被引量:11
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作者 张艳敏 丁占生 +6 位作者 温之雨 蒋春志 李辉 霍云谦 朱至清 陈受宜 郭北海 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2003年第F09期36-39,共4页
对盐、旱逆境下转BADH基因小麦品系99T6的生长发育、甜菜碱醛脱氢酶活性及甜菜碱积累等进行了研究分析,结果表明,转BADH基因株系在盐逆境下具有明显的生长优势,耐盐能力达到100mmol/L;电导率和质膜相对透性表明转基因株系抗膜损伤能力增... 对盐、旱逆境下转BADH基因小麦品系99T6的生长发育、甜菜碱醛脱氢酶活性及甜菜碱积累等进行了研究分析,结果表明,转BADH基因株系在盐逆境下具有明显的生长优势,耐盐能力达到100mmol/L;电导率和质膜相对透性表明转基因株系抗膜损伤能力增强;甜菜碱醛脱氢酶活性的增强和甜菜碱积累的增加,说明转基因株系的盐旱逆境抗性是通过甜菜碱积累这一长期、持久的方式解除渗透胁迫,而不是通过脯氨酸积累这种临时的应急反应;以甜菜碱作为靶标性状采用基因工程方法提高植物盐旱耐性是可行的。 展开更多
关键词 转BADH基因 小麦 甜菜碱 抗盐旱耐性 活性表达 胁迫条件
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干旱和NaCl胁迫下梭梭幼苗中甜菜碱含量和甜菜碱醛脱氢酶活性的变化(简报) 被引量:38
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作者 陈鹏 潘晓玲 《植物生理学通讯》 CAS CSCD 北大核心 2001年第6期520-522,共3页
梭梭幼苗的甜菜碱含量和甜菜碱醛脱氢酶(BADH)活性随外界NaCl浓度的增加和干旱胁迫时间的延长而增加。干旱和NaCl促进旱生植物梭梭体内甜菜碱积累与BADH活性有关。
关键词 梭梭幼苗 干旱胁迫 盐胁迫 甜菜碱 甜菜碱 活性
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盐胁迫下朝鲜碱茅的甜菜碱醛脱氢酶活性变化及其基因保守区的克隆 被引量:8
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作者 杨铮 钟鸣 +2 位作者 郭志富 李丽 陈罡 《植物生理学通讯》 CSCD 北大核心 2007年第3期430-434,共5页
文章探讨了朝鲜碱茅甜菜碱醛脱氢酶活性在盐胁迫下的变化,用简并引物扩增了甜菜碱醛脱氢酶基因保守区序列的结果表明,该保守区段长438 bp,推测编码145个氨基酸,包括醛脱氢酶高度保守序列V[T/S]LELGGKSP和其后29位与酶功能有关的Cys。此... 文章探讨了朝鲜碱茅甜菜碱醛脱氢酶活性在盐胁迫下的变化,用简并引物扩增了甜菜碱醛脱氢酶基因保守区序列的结果表明,该保守区段长438 bp,推测编码145个氨基酸,包括醛脱氢酶高度保守序列V[T/S]LELGGKSP和其后29位与酶功能有关的Cys。此序列Genbank登录号为EF095710。 展开更多
关键词 朝鲜碱茅 盐胁迫 甜菜碱(BADH) 简并引物 保守区 同源性
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拐枣水浸提液对嗜酒大白鼠体重增加和血液中乙醇、丙二醛含量及乙醇脱氢酶活性的影响 被引量:5
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作者 邹礼根 李锋 +1 位作者 赵芸 柳爱春 《食品研究与开发》 CAS 北大核心 2010年第9期181-184,共4页
设计正常饲养、低剂量、高剂量和模型对照4个试验组,研究拐枣水浸提液对嗜酒30d的大白鼠体重增加,血液中乙醇含量、丙二醛(MDA)含量及乙醇脱氢酶(ADH)活性的影响。结果表明:在体重增加方面,高剂量和低剂量试验组比模型对照组非常显著性... 设计正常饲养、低剂量、高剂量和模型对照4个试验组,研究拐枣水浸提液对嗜酒30d的大白鼠体重增加,血液中乙醇含量、丙二醛(MDA)含量及乙醇脱氢酶(ADH)活性的影响。结果表明:在体重增加方面,高剂量和低剂量试验组比模型对照组非常显著性升高(P<0.01);在血液中丙二醛(MDA)含量和乙醇脱氢酶(ADH)活性方面,与模型对照组相比,高剂量试验组大白鼠血液中的丙二醛(MDA)含量非常显著差性降低(P<0.01),而乙醇脱氢酶(ADH)活性非常显著性升高(P<0.01);在血液中乙醇浓度方面,两个拐枣提取液试验组中大白鼠血液的乙醇含量均低于模型对照组。试验结论:拐枣水浸提液对大白鼠的长期嗜酒产生的功能损伤具有一定保护作用。 展开更多
关键词 拐枣 乙醇 丙二 乙醇活性
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华支睾吸虫3-磷酸甘油醛脱氢酶重组蛋白的纯化、酶学活性及免疫学研究 被引量:8
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作者 张咏莉 吴德 余新炳 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期231-235,共5页
目的体外制备华支睾吸虫3-磷酸甘油醛脱氢酶重组蛋白(CsGAPDH),分析其酶学活性及免疫学特性。方法常规表达重组质粒pGEX-4T-1-GAPDH,用谷胱甘肽-S-转移酶(GST)亲和纯化试剂盒纯化重组蛋白,经十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAG... 目的体外制备华支睾吸虫3-磷酸甘油醛脱氢酶重组蛋白(CsGAPDH),分析其酶学活性及免疫学特性。方法常规表达重组质粒pGEX-4T-1-GAPDH,用谷胱甘肽-S-转移酶(GST)亲和纯化试剂盒纯化重组蛋白,经十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE),用凝血酶和纯化柱酶切、纯化的CsGAPDH免疫BALB/c小鼠,制备抗血清。ELISA检测抗IgG抗体滴度,浓缩型S-P免疫组化3步法检测CsGAPDH抗原在免疫小鼠体内的分布和表达。蛋白质印迹法(Western blotting)鉴定其抗血清的特异性。建立酶反应体系测定重组蛋白CsGAPDH的酶催化活性。结果纯化蛋白样品呈单一条带。免疫动物获取CsGAPDH抗血清,在免疫过程中抗体滴度呈连续上升趋势。CsGAPDH抗原分布和表达于小鼠肌细胞膜部位。免疫小鼠血清具有抗CsGAPDH特异性抗体。重组蛋白CsGAPDH具有酶生理活性,其酶活力单位为2 872 U min-1.ml-1。结论制备的重组蛋白CsGAPD H具有较好的酶活性和免疫原性。 展开更多
关键词 华支睾吸山 3-磷酸甘油 蛋白质印迹法 免疫原性
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不同盐碱化草地羊草甜菜碱含量和甜菜碱醛脱氢酶活性的变化 被引量:7
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作者 崔喜艳 郭继勋 《吉林农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期606-609,共4页
在不同程度盐碱胁迫样地和生育期双重影响下,对松嫩草地羊草甜菜碱含量和甜菜碱醛脱氢酶(BADH)活性的变化进行了研究。结果表明:甜菜碱含量和甜菜碱醛脱氢酶(BADH)活性随着土壤盐碱化程度的加重而增加。在盐碱化程度最严重的6号样地,羊... 在不同程度盐碱胁迫样地和生育期双重影响下,对松嫩草地羊草甜菜碱含量和甜菜碱醛脱氢酶(BADH)活性的变化进行了研究。结果表明:甜菜碱含量和甜菜碱醛脱氢酶(BADH)活性随着土壤盐碱化程度的加重而增加。在盐碱化程度最严重的6号样地,羊草中的甜菜碱含量和甜菜碱醛脱氢酶(BADH)活性最高;同一样地,随着生育期的不同,甜菜碱含量和甜菜碱醛脱氢酶(BADH)活性都表现为单峰曲线。在盐碱化程度最重的6号样地羊草叶片中积累了较高含量的甜菜碱可能是羊草耐受盐碱胁迫的主要原因之一。 展开更多
关键词 羊草 盐碱化草地 甜菜碱 甜菜碱
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不同抗旱性小麦幼芽中甜菜碱醛脱氢酶活性和蛋白含量的变化 被引量:2
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作者 衣艳君 赵博生 《东北林业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第4期69-70,共2页
以不同抗旱性小麦品种幼芽为实验材料 ,分析了甜菜碱醛脱氢酶 (BADH)蛋白含量和酶活性。结果表明 ,不同品种小麦幼芽中的BADH蛋白含量和酶活性与其抗旱性密切相关 ,抗旱性强的品种BADH的含量和活性比抗性弱的高。
关键词 甜菜碱 蛋白含量 活性 抗旱性 小麦 甜菜碱
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3-磷酸甘油醛脱氢酶活性检测方法的改良及应用 被引量:2
14
作者 刘小青 林志健 张冰 《国际检验医学杂志》 CAS 2012年第2期160-161,165,共3页
目的改良3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)活性检测方法,并探讨该方法的应用。方法在经典血清GAPDH检测方法基础上,根据该酶的组织分布特点,将血清样本改为全血样本,并对样本及检测条件作了进一步的改良。在方法学研究的基础上,运用改良后的... 目的改良3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)活性检测方法,并探讨该方法的应用。方法在经典血清GAPDH检测方法基础上,根据该酶的组织分布特点,将血清样本改为全血样本,并对样本及检测条件作了进一步的改良。在方法学研究的基础上,运用改良后的方法分别检测正常鹌鹑、高嘌呤饮食诱导的模型鹌鹑、正常大鼠及高果糖饮食诱导的模型大鼠全血GAPDH的活性。结果全血与血清GAPDH酶促反应时间曲线类似,变异系数均小于10%。方法学应用结果显示,与正常鹌鹑比,高嘌呤饮食诱导的模型鹌鹑在高尿酸血症及其合并脂、糖代谢紊乱状态下(60~140d)全血GAPDH活性显著降低;与正常大鼠比,高果糖饮食诱导的模型大鼠在高三酰甘油血症及其并发尿酸、糖代谢紊乱下(7~28d),全血GAPDH活性显著降低。结论改良方法血样容易采集,样品用量少,操作简便、重复性较好,经济实用,易于推广应用。 展开更多
关键词 磷酸甘油 检测方法 全血 代谢性疾病
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鼻咽癌患者乙醛脱氢酶2基因G1510A突变及酶活性研究 被引量:1
15
作者 张成禄 于新发 +4 位作者 谢健敏 王前 郑磊 曾方银 张鹏 《检验医学与临床》 CAS 2011年第2期178-179,181,共3页
目的研究乙醛脱氢酶2(ALDH2)基因第12外显子G1510A遗传多态性及ALDH活性与鼻咽癌(NPC)的关系。方法研究对象包括70例NPC患者和86例健康对照者。采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术结合琼脂糖凝胶电泳,研究受试者ALDH... 目的研究乙醛脱氢酶2(ALDH2)基因第12外显子G1510A遗传多态性及ALDH活性与鼻咽癌(NPC)的关系。方法研究对象包括70例NPC患者和86例健康对照者。采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术结合琼脂糖凝胶电泳,研究受试者ALDH2基因G1510A多态性位点的基因型与等位基因分布;采用比色法测定研究对象血清ALDH总活性水平。结果病例组AA、GA和GG基因型频率分别为24.29%、30.00%和45.71%,A和G等位基因频率分别为39.29%和60.71%;对照组AA、GA和GG基因型频率分别为12.79%、25.58%和61.63%,A和G等位基因频率分别为25.58%和74.42%。病例组A等位基因频率高于对照组[相对危险度(OR)=1.88,95%可信区间(95%CI)=1.16~3.05,P<0.05],与GG基因型比较,AA和GA基因型NPC患病风险增加。在病例组与对照组之间,ALDH总活性无明显差异。结论 ALDH2基因G1510A变异可能与NPC患病风险存在相关性,有待加大样本量作进一步研究。 展开更多
关键词 鼻咽肿瘤 多态现象 遗传 基因 突变
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基于舌鳞癌Tca8113细胞醛脱氢酶活性不同构建差异表达基因cDNA文库 被引量:1
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作者 孙守娟 季平 +3 位作者 邓诚 李颖 邹波 漆小娟 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期226-230,共5页
目的构建舌鳞癌Tca8113细胞系中高、低醛脱氢酶活性(high/low aldehyde dehydrogenase activity,ALDHhigh/ALDHlow)细胞差异表达基因cDNA文库。方法用流式细胞仪检测ALDEFLUOR染色的Tca8113细胞中干细胞标志物ALDH的表达,并收集ALDHh... 目的构建舌鳞癌Tca8113细胞系中高、低醛脱氢酶活性(high/low aldehyde dehydrogenase activity,ALDHhigh/ALDHlow)细胞差异表达基因cDNA文库。方法用流式细胞仪检测ALDEFLUOR染色的Tca8113细胞中干细胞标志物ALDH的表达,并收集ALDHhigh和ALDHlow细胞;用Trizol分别提取两亚群细胞的总RNA;用抑制性消减杂交(SSH)对2组RNA进行差异基因筛选和扩增,扩增产物与pMD18-T载体连接并转化大肠杆菌DH5α。文库扩增后,每库随机挑取24克隆进行酶切、测序及同源性分析。结果分选得到ALDHhigh和ALDHlow两亚群细胞,其中ALDHhigh细胞的比例为2.5%;分光光度计测得ALDHhigh和ALDHlow的RNA D(260)/D(280)的比值分别为1.93和1.92;构建了ALDHhigh和ALDHlow细胞差异基因cDNA双向文库,每个库约500个克隆菌落,每库随机挑选24个菌落进行PCR分析,克隆片段均匀分布在200~700 bp,无假阳性克隆。测序结果经同源性比对分析和PubMed检索,其中与肿瘤有关的基因有SLC25A13、KLHL2、NPC1、WAPL、BARD1、Notch2、EEF2K。结论成功构建ALDHhigh和ALDHlow细胞差异基因cDNA文库。 展开更多
关键词 人舌鳞癌Tca8113 抑制性消减杂交技术 CDNA文库 肿瘤干细胞
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不同治法对糖尿病大鼠肾组织醛糖还原酶和山梨醇脱氢酶活性的影响 被引量:1
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作者 梁煜 胡斌丽 胡勇 《中国中医基础医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期447-448,共2页
关键词 中药 糖尿病 糖还原 山梨醇
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拐枣水浸提液对嗜酒大白鼠体重增加和血液中乙醇、丙二醛含量及乙醇脱氢酶活性的影响 被引量:1
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作者 邹礼根 李锋 +1 位作者 赵芸 柳爱春 《杭州农业与科技》 2010年第5期34-37,共4页
设计正常饲养、低剂量、高剂量和模型对照四个实验组,研究拐枣水浸提液对嗜酒30d的大白鼠体重增加,血液中乙醇含量、丙二醛(MDA)含量及乙醇脱氢酶(ADH)活性的影响。实验结果表明:在体重增加方面,高剂量和低剂量实验组比模型对... 设计正常饲养、低剂量、高剂量和模型对照四个实验组,研究拐枣水浸提液对嗜酒30d的大白鼠体重增加,血液中乙醇含量、丙二醛(MDA)含量及乙醇脱氢酶(ADH)活性的影响。实验结果表明:在体重增加方面,高剂量和低剂量实验组比模型对照组非常显著性升高(P〈0.01);在血液中丙二醛(MDA)含量和乙醇脱氢酶(ADH)活性方面,与模型对照组相比,高剂量实验组大白鼠血液中的丙二醛(MDA)含量非常显著性降低(P〈0.01),而乙醇脱氢酶(ADH)活性非常显著性升高(P〈0.01);在血液中乙醇浓度方面,两个拐枣提取液实验组中大白鼠血液的乙醇含量均低于模型对照组。实验结论:拐枣水浸提液对大白鼠的长期嗜酒产生的功能损伤具有一定保护作用。 展开更多
关键词 拐枣 乙醇 丙二 乙醇活性
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舌鳞癌中高醛脱氢酶活性细胞相关基因的生物信息学分析
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作者 孙守娟 季平 +1 位作者 邹波 邓诚 《实用口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期375-379,共5页
目的:构建舌鳞癌Tca8113细胞中高醛脱氢酶活性(high aldehyde dehydrogenase activity,ALDHhigh)细胞特异性表达基因cDNA文库并进行相应的生物信息学分析。方法:应用抑制性消减杂交(SSH)技术,以ALDHhigh细胞RNA为测试方、低醛脱氢酶活性... 目的:构建舌鳞癌Tca8113细胞中高醛脱氢酶活性(high aldehyde dehydrogenase activity,ALDHhigh)细胞特异性表达基因cDNA文库并进行相应的生物信息学分析。方法:应用抑制性消减杂交(SSH)技术,以ALDHhigh细胞RNA为测试方、低醛脱氢酶活性(ALDHlow)细胞RNA为驱动方,构建文库;应用BLAST、Gene Set Analysis Toolkit V2等软件进行生物信息学分析。结果:随机挑选20个集落进行PCR分析,克隆片段均匀分布在200 bp~700 bp,无假阳性克隆,成功构建文库;对120个克隆测序并进行BLAST分析,得到27个差异表达基因;功能聚类发现部分与细胞增殖、生长繁殖、再生等生物行为相关。结论:成功构建的ALDHhigh细胞特异性表达基因cDNA文库,为下一步找出ALDHhigh干细胞特性相关基因提供帮助。 展开更多
关键词 人舌鳞癌Tca8113 抑制性消减杂交技术 肿瘤干细胞 生物信息学
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糖尿病大鼠眼组织中醛脱氢酶活性及表达量的变化及其意义 被引量:4
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作者 王明玲 胡淑芳 +2 位作者 曹建雄 王安安 肖天林 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期70-74,共5页
背景糖尿病并发症的发生与脂质过氧化有关,而醛脱氢酶(ALDH)是已知的抗脂质过氧化物之一,研究ALDH在糖尿病眼组织中的活性与表达量的变化能为糖尿病性眼部并发症的诊断和治疗提供依据。目的研究ALDH在不同时期糖尿病大鼠眼组织中的... 背景糖尿病并发症的发生与脂质过氧化有关,而醛脱氢酶(ALDH)是已知的抗脂质过氧化物之一,研究ALDH在糖尿病眼组织中的活性与表达量的变化能为糖尿病性眼部并发症的诊断和治疗提供依据。目的研究ALDH在不同时期糖尿病大鼠眼组织中的活性与质量分数的变化趋势,探讨其在糖尿病所致眼部疾病发病过程中的作用机制。方法将健康7~8周龄清洁级雄性SD大鼠28只按随机数字表法分为糖尿病模型组和正常对照组。糖尿病模型组大鼠腹腔注射65mg/kg溶于柠檬酸钠缓冲液的链脲佐菌素(STZ),血糖达16.7~22.2mmol/L为造模成功。正常对照组大鼠腹腔以同样的方式注射等量柠檬酸钠缓冲液。于造模成功后的2个月、4个月分别处死7只大鼠,制备大鼠角膜、晶状体及视网膜匀浆液,测定蛋白质质量浓度。采用M5多功能酶标仪测量角膜、晶状体及视网膜各组织中ALDH活性,采用酶联免疫吸附(EL|SA)法检测ALDH在角膜、晶状体和视网膜匀浆中的表达量。结果模型建立后2个月、4个月糖尿病模型组大鼠血糖水平明显高于正常对照组,而体质量明显低于正常对照组,差异均有统计学意义(均P=0.000)。造模后2个月、4个月时糖尿病模型组大鼠角膜、晶状体及视网膜中ALDH活性均明显高于相应时间点的正常对照组大鼠,差异均有统计学意义(F=396.601,P=0.000);上述各组织中ALDH活性(A。值)均随着造模时间的延长而升高,差异有统计学意义(F=53.139,P=0.000),其中4个月时糖尿病模型组大鼠角膜、晶状体、视网膜中ALDH活性较2个月时高,差异均有统计学意义(P〈0.01),而正常对照组大鼠角膜、晶状体及视网膜中的ALDH活性在2个时间点间相比差异均无统计学意义(P〉0.05);2个时间点正常对照组与糖尿病模型组大鼠眼组织中ALDH活性均为角膜最高,视网膜次之,晶状体最低,差异有统计学意义(F=6973.000,P=0.000)。造模后2个月、4个月时糖尿病模型组大鼠角膜、晶状体及视网膜匀浆中ALDH表达量均明显高于正常对照组大鼠,差异有统计学意义(F=312.985,P=0.000);2个组大鼠ALDH表达均随着造模时间的延长而增加,差异有统计学意义(F=19.203,P:0.000),2个时间点各组大鼠眼组织中ALDH表达量均表现为角膜最高,视网膜次之,晶状体最低,差异有统计学意义(F=3243.000,P=0.000)。结论ALDH可减轻糖尿病大鼠眼组织的脂质氧化损伤,可能在预防糖尿病相关性眼部并发症发生方面发挥一定的作用。 展开更多
关键词 糖尿病眼部并发症 角膜 晶状体 视网膜 脂质过氧化
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