松江鲈(Trachidermus fasciatus)泛素结合酶E2-D2基因的分子克隆及组织表达分析

泛素结合酶(UbcE2)是蛋白泛素化过程中所必需的酶,在泛素转移和底物的特异性识别方面发挥着重要的作用。本实验利用RACE技术克隆获得了全长为993bp的松江鲈泛素结合酶E2-D2基因cDNA序列(命名为TfUbcE2-D2),其开放阅读框为444bp,编码147个氨基酸。通过SMART预测得知,TfUbcE2-D2含有一个UBCc结构域。同源比对结果表明该基因与其他物种的同源性为92.31%。实时荧光定量PCR显示,TfUbcE2-D2广泛表达于松江鲈各组织,在肾脏中的相对表达量最高,其次为鳃。鳗弧菌(Vibrio anguillarum)刺激后,TfUbcE2-D2在血液、脾脏、肝脏和鳃中表达均上调,其中,脾脏和鳃中的表达量上调约40倍。由以上实验结果推测,TfUbcE2-D2可能参与松江鲈的先天免疫防御。

松江鲈(Trachidermus fasciatus)凝血因子Ⅺ的基因克隆与表达分析

克隆松江鲈凝血因子XI基因cDNA序列,分析表达模式。利用RACE技术从松江鲈中克隆获得了凝血因子XI的cDNA全长序列(命名为TfXI),并对其进行生物信息学和表达模式分析。获得TfXI cDNA全长1 287 bp,包括13 bp的5'端非编码区,1 143 bp的开放阅读框以及131 bp的3'端非编码区。开放阅读框编码280个氨基酸的多肽链,预测的蛋白大小为42.9 kD。N端含有由第22-105位氨基酸,112-196位氨基酸、205-279位氨基酸和289-369位氨基酸形成的4个串联排列的典型APPLE结构域。NCBI Blast结果显示TfXI与其他物种凝血因子XI的相似性为30%-63%,进化树分析显示,TfXI符合传统进化规律。Realtime PCR分析表明,经LPS刺激96 h后,松江鲈脾脏TfXI表达量明显提高(P<0.01)。

鸭绿江野生松江鲈(Trachidermus fasciatus)形态性状与体重之间的关系

选取77尾野生鸭绿江松江鲈,测量其全长X1、体长X2、体高X3、头长X4、眼间距X5、口裂X4、体宽X7、尾柄长X8、尾柄高X9和体重Y10个性状,计算性状间的相关系数,采用通径分析计算以形态性状为自变量对以体重为依变量的通径系数、决定系数及相关指数,定量分析了形态性状对体重的影响程度.结果表明:鸭绿江松江鲈9个形态性状与体重的相关系数均达到极显著水平(P<0.01);通径分析保留了对体重的直接影响达到极显著水平的体长、体高、眼间距和体宽4个形态性状,其中体长对体重的直接作用最大(0.454**),其次为体高(0.311**),眼间距对体重直接作用最小(0.119**);决定系数分析结果与通径分析结果有一致的变化趋势,所保留形态性状对体重决定指数为R2=0892,表明所保留性状是影响体重的主要性状.利用逐步回归法建立了以体长、体高、眼间距和体宽为自变量估计体重的多元回归方程为:Y=-16.786+0.161X2+0.465X3+0.221X5+0.323X7,为松江鲈选种提供了理论依据和理想的测量指标.

丁香酚和MS-222对松江鲈的麻醉效果

采用静水试验方法,研究了不同质量浓度的两种常用渔用麻醉剂丁香酚(5、10、20、40、80、120 mg·L^(-1))和MS-222(40、50、60、75、100、200 mg·L^(-1)对体质量为(13.78±3.15)g的松江鲈(Trachidermus fasciatus)的麻醉效果。结果表明:(1)随着两种麻醉剂浓度的升高,松江鲈进入麻醉状态的时间逐渐缩短,复苏时间不断延长;(2)丁香酚与MS-222的最适麻醉质量浓度分别为40~80 mg·L^(-1)和60 mg·L^(-1);(3)在低浓度麻醉剂处理下,10 mg·L^(-1)丁香酚组中松江鲈的耗氧率显著低于对照组(P<0.05),表明10 mg·L^(-1)丁香酚可能是松江鲈的适宜运输浓度;(4)对比成活率、进入麻醉状态的时间和复苏时间等指标,丁香酚更适合作为松江鲈的麻醉剂,在实际操作中,建议使用40~80 mg·L^(-1)丁香酚进行松江鲈的麻醉。

松江鲈胚胎及胚后发育研究

采用人工繁育的松江鲈子一代为亲本,人工授精,在水温6℃、盐度32的条件下人工脱黏孵化,观察了胚胎发育。结果显示:松江鲈受精卵经过7 h进入卵裂期,经过2 d发育至囊胚期,5 d进入原肠期,经过9 d发育至眼囊期,17 d出现围心腔,22 d时肌节形成,29 d时体色素开始沉积,30~35 d孵出。在水温11.37℃~16.88℃、盐度32的条件下进行仔稚鱼培育。初孵仔鱼平均全长6.98 mm,出膜后4 d卵黄囊完全吸收,出膜后28 d背鳍、腹鳍、胸鳍和尾鳍发育完全,体表黑色素沉积增加,进入稚鱼期,出膜后55 d身体不透明,进入幼鱼期。结果显示,由于水温等环境因素的原因,胚胎发育与胚后发育各个阶段所需的时间与前人的研究结果存在一定差异。

循环水养殖系统中养殖密度对松江鲈生长的影响

为研究配合饲料条件下循环水养殖系统(RAS)中养殖密度对松江鲈生长的影响,选取体长为(2.97±0.12)cm、体质量为(0.26±0.03)g的松江鲈,分别按40尾/m^(2)(A组)、80尾/m^(2)(B组)和120尾/m^(2)(C组)共3个养殖密度,在RAS中进行了为期240 d的养殖试验。试验结果显示:A组鱼的终末体质量、终末体长、体质量日增长量、存活率等均显著高于其他两组,A组鱼的体长日增长量显著高于C组(P<0.05);不同密度组间鱼体肥满度无显著性差异(P>0.05)。试验组单位面积产量由高到低依次为:C组(2.83 kg/m^(2))、B组(2.51 kg/m^(2))、A组(1.72 kg/m^(2))。试验组鱼体质量与体长均呈幂函数相关(m=aL^(b),a=0.007 6~0.008 9,b=3.123 6~3.209 4),体长、体质量生长均以三次函数拟合较好。各组间的鱼体长、体质量变异系数均差异显著(P<0.05),其中B组最小。试验表明:在配合饲料条件下,随着养殖密度的提高,RAS养殖的松江鲈生长性能逐渐降低,其合理的养殖密度为40~80尾/m^(2)。在本试验条件下,建议在养殖早期采用高密度养殖模式,同时加强养殖期间对水温的控制和管理。

松江鲈群体遗传多样性的ISSR分析

利用ISSR分子标记技术对辽宁丹东和河北秦皇岛2个地区松江鲈(Trachidermus fasciatus)群体的遗传多样性进行了分析。结果显示:77个ISSR引物中有4个引物能扩增出清晰条带,4个引物对两个群体各24个样品扩增出27个位点。松江鲈丹东和秦皇岛两群体的多态位点比率均为44.44%,Shannon′s指数分别为0.2728、0.2836。Shannon′s指数和AMOVA分析均显示松江鲈的遗传变异主要来自于群体内个体间。松江鲈UPGMA系统树没有依据群体分别聚类,无明显遗传趋异。两个松江鲈野生群体的平均杂合度和多态位点与处于濒危状态的江豚类似,多态性位点比例低于濒危状态的平胸龟和长江刀鲚。结果表明:两个地区松江鲈群体的遗传多样性处于较低水平,遗传变异相对贫乏;松江鲈丹东和秦皇岛两个群体间无明显的遗传分化,亲缘关系较近。

松江鲈肌肉生长抑制素基因克隆和序列特征分析

肌肉生长抑制素(myostatin)属于转化生长因子β(TGF-β)超家族中的一个成员,是控制骨骼肌生长发育的重要细胞因子。该研究以松江鲈肌肉总RNA为模板,采用RT-PCR、5'-RACE和3'-RACE的方法,获得了松江鲈MSTN基因的3个片段,测序后拼接得到2568bp全长cDNA序列,其包含了1131个核苷酸的开放性阅读框,翻译编码376个氨基酸。松江鲈MSTN具有MSTN的共同特征,有蛋白酶水解位点RARR和10个保守的半胱氨酸残基;核苷酸和氨基酸同源性分析发现,松江鲈MSTN基因序列与石首鱼、条纹狼鲈、美洲白鲈、金眼石鮨等同源性较高;与哺乳动物和鸟类同源性较低。系统发育分析表明,松江鲈MSTN与石首鱼亲缘关系最近。RT-PCR分析表明,该基因在肌肉表达量最高;在肠中也有较高表达;在脑和肝脏中也能检测到表达。此结果表明,松江鲈MSTN基因除对肌肉生长发育有调控作用以外,可能还有其他功能。

松江鲈群体遗传多样性的AFLP分析

利用AFLP分子标记技术对辽宁鸭绿江水域丹东段和河北秦皇岛渤海海域两个松江鲈Trachidermus fasciatus群体的遗传多样性进行分析研究。结果表明:用6对选择性引物,从两个群体的63个个体共扩增出360个位点,多态位点214个;松江鲈丹东和秦皇岛两群体的多态位点比率为50.28%、50.00%,平均杂合度和Shannon s指数分别为0.1690、0.1733和0.2534、0.2592,说明两个群体遗传多样性在同一水平上;Shannon s指数和AMOVA分析均显示松江鲈的遗传变异主要来自于群体内个体间,而群体间无明显的遗传分化;松江鲈UPGMA系统树没有依据群体分别聚类,未出现明显分支,无明显遗传差异;群体的显性基因型频率分布显示两个群体的遗传结构相似。

松江鲈鱼ISSR-PCR反应体系的建立及优化研究(英文)

[Objective] The aim of this study is to establish and optimize the ISSR-PCR system in roughskin sculpin(Trachidermus fasciatus Heckel).[Method] By using the primer of ISSR-63,the concentrations of Taq DNA polymerase,Mg2+,dNTPs and primer were optimized by orthogonal design for establishing the suitable ISSR-PCR system in roughskin sculpin;moreover,the suitable anneal temperature was yielded from gradient PCR on temperature.[Result]The optimized ISSR-PCR system(20 μl reaction volume)in roughskin sculpin was proved to be:2.5 mmol/L Mg2+,250 μmol/L dNTPs,0.25 μmol/L primer,1 U Taq DNA polymerase,30 ng DNA template and 1×PCR buffer;and suitable anneal temperature was determined to be 50.8 ℃.The established system was further confirmed by using 24 wild roughskin sculpin samples.[Conclusion]The results lay a foundation for the analysis of genetic diversity and germplasm resources of roughskin sculpin.

松江鲈人工繁殖和育苗的初步研究

对秦皇岛沿海捕获的松江鲈(Trachidermus fasciatus)亲鱼进行人工繁殖和育苗,并对其胚胎发育过程进行观察。结果表明:①经过14 d饲养,9尾松江鲈亲鱼(5♂/4♀)中,4尾雄鱼腹部可挤出精液,4尾雌鱼全部产卵,2尾在白天,2尾在夜间,且其中1尾分两次产卵。2尾雌鱼产卵于牡蛎壳中,另2尾则产卵于水族箱底壁上;②从雌鱼性腺解剖结果来看,其性腺成熟度均达到Ⅲ期以上,成熟系数在24.5%～34.0%之间;绝对繁殖力为1 274～5 439粒/尾,且与体重正相关;相对繁殖力为98～122粒/g;③松江鲈产粘性块状卵,橘黄色或淡黄色,卵径为1.45～1.60 mm。在人工充氧并保持水体流动的条件下,受精卵经过24～27 d相继出膜,孵化率达到74%;④松江鲈幼鱼的最佳淡化速度为0.005 g/(mL.d)。

基于线粒体Cytb基因全序列的松江鲈群体遗传结构分析

对松江鲈(Trachidermus fasciatus Heckel)中国沿海7个群体和日本有明海群体的线粒体Cytb基因全序列进行了测定、分析。结果显示:47个个体共检测到31个单倍型,8个群体均呈现出较高的单倍型多样性(0.60—1.00)和较低的核苷酸多样性(0.0005—0.0041)的特点。AMOVA分析结果及单倍型邻接关系树和单倍型网络关系图均显示松江鲈分为中国和日本两个世系,而中国世系的7个群体未呈现出明显的地理遗传结构。基于核苷酸Kimura双参数替代模型计算得出的中国和日本两个世系的净遗传距离,再参照其他硬骨鱼类线粒体Cytb基因2%/Ma(百万年)的分歧速率,推测松江鲈中日两个世系间分化时间约为41万年前。对中国世系进行群体历史动态分析,中性检验结果均为负值且显著,核苷酸不配对分布呈单峰型,表明松江鲈中国世系曾发生过群体扩张,其扩张时间大约为12万年前。

松江鲈β-肌动蛋白基因全长cDNA的克隆和序列分析(英文)

[目的]获得松江鲈β-肌动蛋白基因cDNA全长序列,并检测松江鲈β-肌动蛋白在组织中的表达。[方法]以松江鲈肌肉总RNA为模板,采用RT-PCR、5′-RACE和3′-RACE的方法扩增β-肌动蛋白基因cDNA片段,用RT-PCR方法检测组织表达。[结果]获得了松江鲈β-肌动蛋白基因cDNA的3个片段,测序后拼接得到1905bp全长cDNA序列,其包含了1128个核苷酸的开放性阅读框,翻译编码375个氨基酸。核苷酸和氨基酸同源性分析发现,松江鲈β-肌动蛋白基因序列与点带石斑鱼、军曹鱼、红鲷鱼等同源性相对较高,与哺乳动物和鸟类同源性相对较低;系统发育分析表明,松江鲈β-肌动蛋白与点带石斑鱼关系最近。RT-PCR分析表明,该基因在检测的肌肉、肝脏、肠和脑4种组织均有表达。[结论]首次得到了β-肌动蛋白基因cDNA全长序列,并证明了松江鲈的β-肌动蛋白基因非常保守。

松江鲈β-肌动蛋白基因全长cDNA的克隆和序列分析

[目的]获得松江鲈β-肌动蛋白基因cDNA全长序列,并检测松江鲈β-肌动蛋白在组织中的表达。[方法]以松江鲈肌肉总RNA为模板,采用RT-PCR、5′-RACE和3′-RACE的方法扩增β-肌动蛋白基因cDNA片段,用RT-PCR方法检测组织表达。[结果]获得了松江鲈β-肌动蛋白基因cDNA的3个片段,测序后拼接得到1 905 bp全长cDNA序列,其包含了1 128个核苷酸的开放性阅读框,翻译编码375个氨基酸。核苷酸和氨基酸同源性分析发现,松江鲈β-肌动蛋白基因序列与点带石斑鱼、军曹鱼、红鲷鱼等同源性相对较高,与哺乳动物和鸟类同源性相对较低;系统发育分析表明,松江鲈β-肌动蛋白与点带石斑鱼关系最近。RT-PCR分析表明,该基因在检测的肌肉、肝脏、肠和脑4种组织均有表达。[结论]首次得到了β-肌动蛋白基因cDNA全长序列,并证明了松江鲈的β-肌动蛋白基因非常保守。

松江鲈的生态学和繁殖生物学的研究进展

松江鲈(Trachidermus Fasciatus Heckel),别名四鳃鲈、老虎鱼、新娘鱼、媳妇鱼等,隶属于鲉形目(Scorpaeniformes),杜父鱼科(Cottidae),松江鲈鱼属(Trachidermus)。 松江鲈鱼个体虽小,但肉质细嫩,味道鲜美,尤以冬至前后的佳肴鲈鱼脍自古以来誉为上乘珍肴,有“江南第一鱼”之美称;与黄河鲤、松花江鲑和兴凯湖鲌齐名,为中国四大名鱼,并且被列为首位,享誉中外。 但是,随着社会、经济的飞速发展,环境污染的加剧,松江鲈鱼赖以生存和繁衍的生态环境遭到严重的破坏,使本来就稀少的资源近年来几乎到了枯竭的地步,被列入中国名贵珍稀水生动物,此后被正式列入国家二类保护动物。目前,松江鲈在我国许多水域已绝迹,亟待拯救。所以,其生态学和繁殖生物学方面的研究倍受关注。本文综述了其研究进展,以便为其保护生物学的研究提供参考。

松江鲈线粒体DNA控制区结构和遗传多样性分析

为探讨松江鲈(Trachidermus fasciatus Heckel)线粒体控制区特征及其群体遗传结构,研究测定分析了中国和日本沿海共8个群体的线粒体控制区序列,分析了其结构特征,识别出终止序列区(ETAS)、中央保守区(CD)和保守序列区(CSB)的特征序列。遗传多样性分析结果显示:69个松江鲈个体共检测到47个单倍型,呈现出核苷酸多样性(0.0079)较低和单倍型多样性(0.978)较高的特点。单倍型邻接关系树和单倍型网络关系图均显示松江鲈分为中国和日本两大世系。遗传分化系数(F_(st))和分子方差分析(AMOVA)结果表明,松江鲈中国群体和日本群体之间存在的遗传差异较显著,中国沿海各群体之间亦存在着一定程度的遗传差异,该分化主要由历史环境变动、当代环境因素和自身生态习性等原因造成。

松江鲈鳍细胞体外培养的实验研究

利用胰蛋白酶消化法成功启动了松江鲈鳍细胞的原代培养,并通过利用不同培养基、培养温度、pH值对松江鲈鳍细胞进行体外培养实验。实验结果显示:含20%FBS的DMEM/F12(pH=7.2)是松江鲈鳍细胞体外培养的最适培养基,鳍细胞的最适培养温度为24℃。

松江鲈MyoG基因cDNA的克隆与序列分析

动物的肌肉生长是一个复杂的过程,受到包括MRFs家族在内的多种细胞内转录因子及其他体内外因素的调控。MyoG是MRFs家族成员中的一员,也属于碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)蛋白超家族,在控制肌细胞生成过程中起重要的调节作用。运用RT-PCR、5'-RACE、3'-RACE等方法扩增得到松江鲈MyoG基因cDNA全长序列,测序后发现松江鲈MyoG基因cDNA全长1 669 bp,包含了750个核苷酸的开放性阅读框,翻译编码249个氨基酸。MyoG具有保守的碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)结构域,位于1～153位氨基酸上。用生物信息学方法分析与其他物种的系统进化关系,表明松江鲈MyoG与梭鲈亲缘关系最近。不同组织中MyoG基因的半定量PCR分析表明,MyoG基因在成年松江鲈中仅在肌肉中表达,表明它在成年松江鲈肌肉中发挥着重要作用。

松江鲈Myostatin基因内含子和线粒体D-loop DNA序列分析

通过PCR的方法,扩增了松江鲈Myostatin基因的内含子1和内含子2片段,测序后发现长度分别为325bp和835bp,具有典型的GT-AG序列特征,在内含子2中存在一个(AC)14的微卫星序列.通过线粒体控制区部分片段测序,对来自长江、丹东和葫芦岛三个地理群体的松江鲈线粒体D-loop序列分析,未发现它们之间存在特征性的序列差异,可能是三个地理群体松江鲈的分隔时间短.

人工养殖松江鲈生长特征研究

本文对人工养殖松江鲈从苗种淡化后进入纯淡水开始至成鱼进入海水育肥准备繁育截止的幼鱼阶段主要生长特征进行了观察研究。养殖期间共测定松江鲈360尾,体长为18.0～145.0mm,体重0.25～45.6g;体长与体重的关系式为W=0.074L2.815(R2=0.973),各个日龄之间幂指数b不尽相同,在60d前b小于3。体长生长速度大于体重生长速度,在165d后b大于3。体重生长速度大于体长生长速度,60～165d时b接近于3,生长接近匀速。适口饵料在60～165d期间出现断档,用人工控制生长的虾苗投喂可保证松江鲈幼鱼正常生长。