美洛托宁对猪卵母细胞体外成熟的影响及受体介导机制探究

为了探究美洛托宁对猪卵母细胞体外成熟的影响及其受体介导机制,试验采集健康母猪卵巢中的卵母细胞,采用免疫荧光检测猪卵母细胞MT受体表达情况;在体外成熟培养液中分别加入不同浓度的美洛托宁(0,1×10^-5,1×10^-6,1×10^-7 mol/L),筛选对猪卵母细胞成熟和胚胎发育的最适浓度;根据最佳美洛托宁添加浓度,成熟液中分别添加1×10^-6 mol/L的美洛托宁、MT受体激动剂、 MT受体颉颃剂和1×10^-6 mol/L MT受体颉颃剂+1×10^-6 mol/L美洛托宁,检测美洛托宁及其受体激动剂和颉颃剂对猪卵母细胞成熟和胚胎发育的影响;收集添加1×10^-6 mol/L的美洛托宁24 h处理组、空白对照组、MT受体颉颃剂处理组、美洛托宁和MT受体颉颃剂组母猪卵母细胞复合物,利用试剂盒检测卵母细胞cAMP和cGMP含量。结果表明:当美洛托宁浓度为1×10^-6mol/L时,猪卵母细胞的分裂率和囊胚率均达到最高,分别为76.26%和31.48%,与空白对照组相比差异显著(P<0.05);在成熟液中添加1×10^-6mol/L美洛托宁和1×10^-6mol/L MT受体激动剂,两组细胞极体排出率均较高,与空白对照组相比差异显著(P<0.05),1×10^-6mol/L MT受体激动剂和1×10^-6mol/L美洛托宁的分裂率分别为75.16%和75.33%,囊胚率分别为30.04%和30.36%,与空白对照组相比差异显著(P<0.05);在成熟液中添加1×10^-6mol/L的美洛托宁可以显著降低cAMP的含量和显著升高cGMP的含量(P<0.05)。说明美洛托宁通过与细胞膜G蛋白偶联受体结合,从而抑制了cAMP合成,提高cGMP含量,进而促进猪卵母细胞成熟及早期胚胎发育。