对虾白斑综合症病毒极早期基因启动子筛选文库的构建

对虾白斑综合症病毒(white spot syndrome virus,WSSV)是危害对虾养殖业的主要病原,而WSSV极早期基因对病毒功能基因的转录翻译和调控起着至关重要的作用.本研究将WSSV基因组以超声法随机断裂至400～900bp DNA片段,并插入启动子缺失且多克隆位点下游具有报告基因的载体来构建文库,转染昆虫细胞Hi5.倒置荧光显微镜观察发现部分转染后的细胞有增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的表达,表明这部分细胞中的DNA片段可能具有极早期启动子活性.流式细胞仪分析显示,这部分荧光细胞占总细胞的比例为0.35%.由于转染效率为50%,可认为占比0.7%的WSSV基因组随机片段能在Hi5细胞中激发下游报告基因的转录翻译,可能具有极早期基因启动子活性.这对于进一步筛选和鉴定WSSV极早期基因及开展极早期启动子研究具有重要的意义.

对虾白斑综合症病毒极早期基因的研究进展

对虾白斑综合症病毒(white spot syndrome virus,WSSV)是危害对虾养殖业的主要病原之一。WSSV在侵染宿主细胞的过程中,极早期基因(immediate-early gene)对病毒复制增殖起着非常重要的作用。在这个过程中,一方面极早期基因编码的蛋白通过与细胞调控因子相互作用,调节细胞信号通路,为病毒的增殖提供更合适的环境;另一方面,极早期蛋白直接调控病毒基因的转录和表达。综述列举了WSSV的21个极早期基因,并将重点介绍其中5个研究比较深入的基因:ie1、wsv051、wsv083、wsv249和wsv403。

基于DNA载体的RNAi抑制家蚕核型多角体病毒复制

基于DNA载体的RNA i技术可以较长时间高效地抑制基因的活性。利用家蚕核型多角体病毒ie-1基因启动子,构建了在细胞内能转录形成与ie-1基因+19^+446区域互补同源的发夹状dsRNA的RNA i DNA载体。研究结果表明,该载体DNA在体外、体内均能较好地抑制家蚕核型多角体病毒在细胞中的复制。

PMA激活内皮细胞早期应答基因谱分析

血管内皮细胞具有一系列重要生理功能 ,内皮细胞受外界刺激时可转录众多的mRNA ,体现了它们的生物学重要性 .内皮细胞的极早期应答基因 (Immediateearlyresponsegene ,ERG)是一类重要的介导基因 ,决定了外界刺激条件下细胞的最后反应模式 .以包含 40 96条各种人体基因的DNA芯片观察了血管内皮细胞受分化诱导剂PMA(phorbolmyristateacetate)激活后早期应答基因的表达谱 ,证实 17条ERG属已知基因 .数据处理聚类结果表明 ,多数ERG属蛋白质激酶及转录调控因子 ,2 3条上调新基因从功能上归类为ERG ;并且报道了其中的一条新基因的序列特征及其染色体位置和基因结构 ,为研究这个基因的功能提供了有力的实验依据 .

一个新的PMA诱导相关基因在Pichia pastoris酵母系统中的表达

利用包含 40 96条各种人类基因的DNA芯片研究了代谢增强剂PMA(phorbolmyristateacetate)激活的人单核巨噬细胞HTP 1的早期应答基因 ,根据已有的旧基因信息 ,实验结果基本反映了人单核巨噬细胞早期应答基因的表达谱 .选取其中一条候选早期应答基因为后续研究对象 ,并进行蛋白质的酵母表达 ,为下游的基因功能研究奠定一定的基础 .

一个新C_2H_2型锌指蛋白的功能的初步研究

通过筛选人 18周胎脑cDNA文库 ,得到一条编码 332AA的全长新基因 .生物信息学研究表明 ,该蛋白质序列有 2个C2 H2 型锌指结构 ,其中 1个锌指结构有RNA binding蛋白特异锌指的特征 .虽然同源比较发现与多种蛋白质精氨酸N端转甲基酶 (proteinarginineN methyltransferase)有一定的同源性 ,但新锌指蛋白不含转甲基酶的活性功能区域 ,属功能未知的基因 .利用基因芯片研究功能未知基因的表达是一种较好的手段 ,通过代谢增强剂PMA(phorbolmyristateacetate)刺激培养的血管内皮细胞 ,观察细胞受激活后新锌指蛋白基因的表达变化 ,结果表明新基因表达量提高了 11倍以上 ,证实新基因属内皮细胞的极早期应答基因 (Immediateearlyre sponsegene ,ERG) .