极端耐热木聚糖酶基因在枯草芽孢杆菌中的整合表达

目的:为了在枯草芽孢杆菌中整合表达极端耐热木聚糖酶。方法:将嗜热网球菌(Dictyoglomus thermophilum)Rt46B.1的极端耐热木聚糖酶基因xynB通过穿梭载体pDL整合到B.subtilis168染色体上,使其实现表达。结果:极端耐热木聚糖基因在枯草芽孢杆菌中成功整合并表达。结论:基因工程菌B.subtilis168-xynB能外泌表达极端耐热木聚糖酶,且表达水平为0.732IU/mL,比在大肠杆菌中的高。酶学性质表明,此酶分子量约为24kD,其最适反应温度为85℃,最适反应pH值为6.5,且在弱碱性条件下稳定。

重组大肠杆菌生产极端耐热木聚糖酶

将含有来自于嗜热网球菌(Dictyoglomusthermophilum)Rt46B.1编码极端耐热木聚糖酶基因xynB的表达载体pET?DBc转化大肠杆菌(Escherichiacoli)BL21(DE3),获得重组菌E.coliDB1,目的基因可表达出有活性且耐90oC的木聚糖酶.初步优化的E.coliDB1发酵培养基的组成为(g/L):葡萄糖50,NH4Cl3,MgSO40.5,CaCl20.6,Na2HPO4?7H2O12.8,KH2PO43.0,NaCl0.5.重组菌E.coliDB1木聚糖酶的耐热特性有利于木聚糖酶的下游回收和提取.

重组枯草芽孢杆菌产极端耐热木聚糖酶条件的优化

对基因工程菌Bacillus subtilis-xyB在摇瓶发酵水平产极端耐热木聚糖酶条件进行了优化。结果表明:该基因工程菌发酵产极端耐热木聚糖酶的优化后的培养基配方是:4%麸皮、1%(NH4)2HPO4、0.1%K2HPO4、0.2%吐温80、1mmol/LFe2+,初始pH为自然值(7.0)。优化后的摇瓶发酵条件是:36℃、转速180r/min、500mL三角瓶中加入50mL培养基、接种量2%。采用优化后的培养基发酵培养18h酶活力达到最大值10.71XU/mL。与优化前相比,产酶最高峰提前6h,而木聚糖酶活力是优化前的2.5倍,本实验得到的优化发酵条件大大提高了重组菌产酶能力。