极速热循环荧光定量PCR系统检测流感病毒的效果评价

目的探讨极速热循环荧光定量PCR系统在甲型流感病毒(influenza A virus,IAV)和乙型流感病毒(influenza B virus,IBV)检测中的性能。方法构建IAV和IBV的质粒标准品,浓度梯度稀释,每个浓度重复检测20次后,制作浓度标准曲线,评价系统的最低检出限、线性范围和线性相关系数。收集来自南部战区疾病预防控制中心生物安全科2016年至2018年的临床样本278例(IAV阳性样本88例,IBV阳性样本87例,阴性样本103例),其中男性164人(59%),女性114人(41%),平均年龄24岁,通过重复检测相同IAV、IBV临床样本评价其分析重现性;将系统检测278例鼻/咽拭子临床样本与传统实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,RT-qPCR)结果比较评价其效果。结果极速热循环荧光定量PCR系统检测IAV和IBV质粒标准品的最低检出限为1×10^(0)copies/μL;线性检测范围是1×10^(0)~1×10^(5)copies/μL;此系统检测流感临床样本的敏感度为92.57%,特异度均为100%,阴、阳性预测值分别为88.79%和100%,与RT-qPCR结果的符合率为95.32%;IAV与IBV之间以及IAV和IBV与其他多种病原体之间无交叉反应;30 g/dL的血红蛋白、3.2 g/dL的甘油三酯和100μg/mL头孢曲松对检测结果无干扰。结论极速热循环荧光定量PCR系统体积小、重量轻、无需核酸提取步骤、耗时短、检测性能良好,适用于即时检测(point-of-care testing,POCT)。

极速热循环荧光定量PCR系统的设计及性能评估

目的:设计一种用于病原体核酸现场检测的极速热循环荧光定量PCR系统,并进行性能评估。方法:该系统由扁平反应杯、极速热循环模块、固化光路荧光检测模块以及智能手机平台数据处理模块组成。极速热循环模块由升温单元和降温单元组成,其中升温单元以陶瓷片和Ag/Pb合金制成,降温单元由高速磁悬浮冷却风扇和双曲线形喉道组成;固化光路荧光检测模块采用注塑工艺制作,由光源激发单元和光探测器单元组成;智能手机平台数据处理模块包括蓝牙串口转接单元和手机应用程序2个部分,其中蓝牙串口转接单元采用TI公司的C2540F256芯片,手机应用程序由Android Studio开发。采用该系统检测甲型/乙型流感病毒和新型冠状病毒,验证该系统的检测性能。结果:该系统可实现对甲型/乙型流感病毒核酸和新型冠状病毒核酸的快速检测,且检测结果与常规实时定量PCR检测结果的一致性较好。结论:该系统体积小、质量轻,可实现病原体核酸快速现场检测。