本科生基因工程实验课程基因克隆构建方案

将常用于Gateway克隆系统中的对大肠杆菌具有毒性ccdB基因引入载体,提高基因克隆成功率。构建基因克隆过程中,含有ccdB基因的原始载体在大肠杆菌中不能正常生长,无法形成细胞克隆,避免空载的假阳性克隆产生。通过分组比较实验、启发引导的教学设计,可以让学生充分领会酶切、重组、连接等生物工程相关操作,加深学生对理论课程的理解。该基因克隆方法的改进能够满足实验教学的需要,也适用于科研工作中的基因克隆效率的提高。

FR 02全长基因的克隆表达载体的构建及转化苹果

从铁胁迫诱导的拟南芥植株根中克隆了全长的FR 02(Fe3+-螯合物还原酶)基因,并将FR 02基因构建到了植物高效表达载体pCB 302中。通过农杆菌介导的转化和PCR及Southern b lot检测证明FR 02基因正向的插入了苹果基因组中。以破坏生长点的茎尖为外植体的苹果基因转化方法转化率高达10.8%。FR 02全长基因的成功克隆、构建和转化为高铁、抗黄化苹果和其他高铁作物新品种的培育开辟了一条新路。

高温超氧化物歧化酶基因的克隆及真核重组转移载体pVL-sod的构建

从高温塘泥中分离得到一株耐高温菌株,推定其属于Geobacillus属,根据该属已知的超氧化物歧化酶基因(sod)序列,用PCR的方法扩增得到该菌的sod基因。序列分析表明,该基因全长1236bp,编码411个氨基酸。本试验构建了用于家蚕杆状病毒表达的重组转移载体pVL-sod,为下一步在家蚕杆状病毒中高效表达超氧化物歧化酶奠定了基础。