参照链介导的构象分析策略在人类白细胞抗原-A基因位点分型中的临床应用

目的 建立并稳定人类白细胞抗原 (HLA)分型新策略—参照链介导的构象分析 (RSCA)系统 ;以HLA A位点为靶标 ,鉴定RSCA分型策略的优劣。方法 采用国际RSCA协作组提供的 2 0例标准分型DNA首先确定RSCA系统的稳定性、准确性及可复性。然后分别提取 84例拟进行造血干细胞移植病人及家系成员的外周血DNA ,采用RSCA和序列特异性引物体外基因扩增 (PCR SSP)法平行对照对HLA A基因位点进行分型。结果 对 2 0例标准分型DNA的分型结果显示 ,所获分型结果与国际RSCA协作组的完全一致 ,准确性及重复率均为 10 0 %。在全部 84例移植病人及家系成员标本中 ,有 82 /84例 ( 97.6 %)标本可明确判定结果 ,其中有 33/84例 ( 39%)可直接指定等位基因型别 ;此外 ,还有 2 /84例 ( 2 .4%)标本因PCR扩增结果太弱 ,致使RSCA法未能获得分型结果。随机选择 2 0例移植标本进行RSCA重复性实验表明 ,前后结果完全一致 ,然而在PCR SSP分型中 ,约有 10 %的标本需要重复 1～ 3次方能判定结果。结论 RSCA与PCR SSP分型结果相比 ,具有灵敏、特异、分辨率高、重复性好、可发现变异基因及新的等位基因、高通量和低成本的优点 ,非常适合于对拟进行非血缘异基因造血干细胞移植供 受体进行HLA分型。

参照链介导的构象分析策略在HLA-B位点分型中的临床应用研究

目的建立并稳定HLAB位点的参照链介导的构象分析(RSCA)系统,并鉴定RSCA分型策略的优势。方法提取27例造血干细胞移植患者及63名供者的外周血DNA,采用RSCA进行HLAB位点分型,并与序列特异性引物聚合酶链反应技术(PCRSSP)分型结果进行比较,对于疑难标本采用测序鉴定。结果在90份标本中,87份(96.7%)可明确判定结果,其中有1份标本与PCRSSP结果不一致,经测序鉴定RSCA结果正确;67份(74.4%)可直接指定等位基因型别。此外,1份标本(1.1%)因PCR扩增结果太弱而未能获得RSCA分型结果,2份标本只能确定1条等位基因,经测序发现另1条等位基因为已知等位基因,但RSCA数据库中没有其数据。随机选择20份标本进行RSCA重复性实验,重复率为100%。在PCRSSP方法分型中,约有10%的标本需要重复1～3次方能判定结果。结论RSCA具有灵敏、特异、分辨率高、重复性好、可发现变异基因及新的等位基因、大规模和低成本等优点,适用于大规模的无关移植供、受者的选择。