枇杷叶三萜酸联合重组人表皮生长因子对激素依赖性皮炎豚鼠皮肤屏障功能的修复及免疫失衡的影响

目的 观察枇杷叶三萜酸(TAL)联合重组人表皮生长因子(rh-EGF)对激素依赖性皮炎(HDD)豚鼠模型皮肤屏障功能修复及免疫失衡的影响。方法 选取40只无特定病原(SPF)级豚鼠,随机分为对照组、模型组、rh-EGF组、TAL组和联合组,每组各8只。除对照组外,其他各组涂抹0.05%卤米松乳膏,连续45 d,构建HDD模型。构建成功后,rh-EGF组涂抹rh-EGF凝胶,TAL组涂抹TAL溶液,联合组涂抹TAL和rh-EGF凝胶,对照组和模型组涂抹生理盐水,共15 d。记录各组临床症状并打分;检测经皮水分丢失(TEWL)、角质层含水量(WCSC)和皮脂量(SC);HE染色观察各组豚鼠皮肤组织病理变化;采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测总免疫球蛋白E(IgE)、白细胞介素-4(IL-4)、干扰素-γ(IFN-γ)水平。结果 与对照组比较,模型组症状明显、皮肤组织损坏严重,TEWL增加,WCSC和SC减少;免疫因子Ig E和IL-4水平升高、IFN-γ水平降低(P<0.05)。与模型组比较,rh-EGF组、TAL组和联合组用药后临床症状减轻、皮肤组织损伤不明显;TEWL减少,WCSC和SC增加,免疫因子IgE和IL-4水平降低、IFN-γ水平升高(P<0.05)。且联合组与rh-EGF组和TAL组比较,作用效果更加明显(P<0.05)。TAL组和联合组各指标比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 TAL联合rh-EGF可有效缓解HDD豚鼠的临床症状,改善皮肤细胞损伤,修复皮肤屏障功能,提升免疫能力。

枇杷叶三萜酸的免疫调节作用研究

目的研究枇杷叶三萜酸(TAL)的免疫调节作用。方法以环磷酰胺(Cy)诱导小鼠免疫低下模型,采用碳廓清试验、溶血空斑试验、二硝基氟苯(DNFB)诱导的迟发性超敏反应及T淋巴细胞亚群的测定,观察TAL对免疫低下小鼠非特异性免疫、体液免疫及细胞免疫的影响。结果TAL(75,225,675 mg.kg-1)ig给药能改善Cy诱导的免疫低下小鼠碳廓清指数(K值)和吞噬指数(α值)的降低;提高Cy诱导的免疫低下小鼠血清IgM和IgG的生成,增加Cy诱导的免疫低下小鼠脾细胞溶血素的产生;增强Cy引起的免疫功能低下小鼠的DTH反应。结论TAL具有良好的免疫调节作用。

枇杷叶三萜酸对TGF-β_1刺激的人胚肺成纤维细胞转分化及ERK通路的影响

目的研究枇杷叶三萜酸(Triterpene acids of loquat,TAL)对转化生长因子β1(TGF-β1)刺激人胚肺成纤维细胞转分化、胶原合成及ERK通路的影响。方法体外培养人胚肺成纤维细胞(HFL-Ⅰ),MTT比色法测定TAL对HFL-Ⅰ细胞的增殖抑制率。RT-PCR检测每组中结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)、平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、Ⅰ型胶原(CⅠ)、Ⅲ型胶原(CⅢ)mRNA的水平,Western blot检测各组细胞中p-ERK1/2和ERK1/2表达水平。结果 TAL呈剂量和时间依赖性抑制HFL-Ⅰ细胞的增殖(P<0.05),并能够降低CⅠ、CⅢ、α-SMA、CTGF的过度表达(P<0.05);Western blot结果显示TAL能降低TGF-β1刺激组p-ERK1/2的表达,而对ERK1/2的表达没有差异。结论 TAL能抑制HFL-Ⅰ的增殖,同时也能使活化后HFL-Ⅰ中的α-SMA生成减少,CTGF、胶原和p-ERK1/2表达降低。

枇杷叶三萜酸对博来霉素致大鼠肺纤维化的干预作用

目的观察博来霉素(BLM)致大鼠肺纤维化模型的超微病理过程,肺组织匀浆MDA含量、SOD活性,血清iN-OS、eNOS、NO活性的动态变化及枇杷叶三萜酸(TAL)对其的影响。方法通过气管内一次性滴注博来霉素(5 mg.kg-1)复制大鼠肺纤维化模型。治疗组于造模后d 2开始灌胃给予150 mg.kg-1 TAL。各组大鼠于给药后d 7、14、28随机取样8只。采集血清,留取肺组织制备肺组织匀浆,分别测定匀浆中丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性、血清中一氧化氮(NO)含量、诱生型及内皮型一氧化氮合酶(iNOS、eNOS)活性。制备电镜标本行电镜观察。结果电镜可见,模型7 d组大鼠Ⅰ、Ⅱ型肺泡上皮胞质水肿,线粒体肿胀,嵴空化。血管内皮细胞肿胀,肺泡隔胶原增多。肺间质及肺泡腔内炎性细胞增多。14、28 d BLM组Ⅰ型肺泡上皮胞质水肿更明显,Ⅱ型细胞较7 d BLM组减少,巨噬细胞凋亡增加,间质纤维组织增生明显。TAL能明显改善模型组大鼠肺脏组织结构,减轻肺纤维化增生程度。与正常组相比,模型组各时间段血清iNOS活性、肺匀浆MDA含量均升高,而eNOS活性下降(P<0.01 or P<0.05);模型7、14 d血清NO含量增加,肺组织匀浆SOD活性下降(P<0.01 or P<0.05),模型组28 d恢复正常。TAL给药可降低各时段增高的iNOS、NO及MDA含量,同时升高SOD及eNOS活性(P<0.01 or P<0.05)。结论博来霉素诱发大鼠肺纤维化早期以肺泡炎为主,28 d肺纤维化为主要病变。肺内一氧化氮合酶的含量变化,NO的大量生成及过氧化可能是促使肺纤维化形成的重要因素,TAL对肺纤维化的防治作用可能与其调节iNOS、eNOS比例、抗脂质过氧化有关。

枇杷叶三萜酸对慢性支气管炎大鼠的疗效及其机制

目的:初步探讨枇杷叶三萜酸对慢性支气管炎大鼠模型的疗效及作用机理。方法:SD大鼠60只,分为正常对照组、假手术组、模型组、桂龙瑞咳宁(1 000 mg/kg)阳性对照组及枇杷叶三萜酸低(150 mg/kg)、高(450 mg/kg)剂量组,每组10只,模型组和枇杷叶三萜酸低剂量组、枇杷叶三萜酸高剂量组、桂龙瑞咳宁组进行造模。各组大鼠给予相应药物处理,假手术组、模型组、正常对照组给予等体积生理盐水,2 w后对各组大鼠的相关指标进行比较。结果:与正常对照组及假手术组比较,模型组大鼠咳嗽次数、肺组织TNF-α及IL-8含量、支气管肺泡灌洗液中白细胞计数及中性粒细胞和肺泡巨噬细胞比例、肺泡巨噬细胞中NO含量及i NOS活性均显著升高(P<0.05),肺组织IL-10含量显著降低(P<0.05)。与模型组比较,各给药组上述指标均显著改善。结论:枇杷叶三萜酸对慢性支气管炎大鼠模型具有一定的治疗作用,其机制可能与降低炎症细胞因子表达进而减轻机体氧化损伤有关。

枇杷叶三萜酸固体分散体的制备及体外溶出研究

目的:制备枇杷叶三萜酸(EJA)固体分散体,以提高其体外溶出度。方法:以枇杷叶三萜酸中溶解度最低的熊果酸、齐墩果酸的体外溶出度为代表性指标,通过单因素试验考察不同载体材料及药载比对EJA固体分散体中药物溶出的影响;以差示扫描量热法(DSC)和X-射线衍射法(X-RD)对固体分散体进行表征。结果:制备EJA固体分散体载体为泊洛沙姆188(P188),药载比为1∶5;DSC和X-RD分析试验表明药物以无定形状态存在于固体分散体中,且药物溶出速率比原药及其物理混合物都显著提高。结论:将EJA制备成固体分散体能显著增加三萜酸的体外溶出,为将其进一步制备成固体剂型提供了实验依据。

枇杷叶三萜酸提高神经胶质瘤C6细胞和骨肉瘤MG63细胞放射敏感性

目的研究枇杷叶三萜酸对肿瘤细胞放射敏感性的影响及其作用机制。方法采用枇杷叶三萜酸（TAL）预处理大鼠神经胶质瘤c6细胞和人骨肉瘤MG63细胞，经1、2、3、5和7Gy的x射线照射后，通过细胞集落形成实验，计算TAL的放射增敏比（SER）。采用细胞微核测定法，检测细胞微核率，观察DNA损伤情况。通过RT—PCR和Westernblot观察细胞中Rad51和XRCC4的表达变化。结果TAL作用后c6和MG63细胞的仇值分别降低至1．31和2．85Gy，对c6和MG63细胞的SER值分别为1．73和2．04。与单纯照射组比较，当吸收剂量达到2Gy以上时，TAL可导致两种肿瘤细胞的微核形成率增加（C6：t=-8．372～-2．476，P〈0．05；MG63：t=-4．03- -2．557，P〈0．05）。TAL并未显著抑制Rad51基因的表达水平，但可降低XRCC4在转录和翻译水平上的表达。结论TAL可明显增加肿瘤细胞的放射敏感性，提高x射线对肿瘤细胞的杀伤效应，其作用机制可能与抑制照射后肿瘤细胞的非同源末端连接（NHEJ）修复有关。

枇杷叶总三萜酸提取分离工艺研究

目的优选提取和分离枇杷叶中总三萜酸的工艺。方法以枇杷叶总三萜酸含量为控制指标,采用单因素法对提取时间、提取温度、提取次数、溶剂用量、洗脱剂组成等主要因素进行考察。结果优选的最佳提取分离工艺为:提取时间2 h,提取温度75℃,提取次数2次,溶剂(80%乙醇)用量4倍,洗脱剂选择60%乙醇及90%乙醇。结论该工艺提取分离效率高、推广性强,适用于枇杷叶中总三萜酸的提取分离过程。

TAL对慢支模型大鼠肺泡巨噬细胞凋亡的影响及部分机制研究

目的探讨枇杷叶三萜酸(TAL)对慢支模型(CB)大鼠肺泡巨噬细胞(AM)活性及凋亡的影响及其可能的作用机制。方法应用BCG联用LPS的方法复制大鼠CB模型,采用体内外给药的方法,观察TAL及MAPK3条通路对CB大鼠AM凋亡及活性的影响。MTT法检测细胞活性,电镜观察AM凋亡,流式细胞技术检测AM凋亡率及AM中凋亡相关基因Bcl-2、Bax的表达。Western blot法检测AM中ERK蛋白磷酸化水平。结果①与正常对照组比较,模型大鼠支气管肺泡灌洗液中AM数增加(P<0.01),而TAL灌胃给药可抑制模型大鼠异常增多的AM数量(P<0.01)。②慢支模型组AM活性较正常组相比明显增强(P<0.01),TAL可抑制CB模型组大鼠AM的活性(P<0.05)。③与正常组比较,模型大鼠AM凋亡率明显降低(P<0.01);TAL给药组及ERK通路抑制剂PD98059组AM凋亡率较模型组比较升高(P<0.05,P<0.01)。而JNK通路抑制剂Curcumin组AM凋亡率降低(P<0.05)。④模型大鼠AMERK磷酸化水平明显升高(P<0.01);TAL(5mg.L-1)体外给药可抑制慢支大鼠AM内ERKMAPK通路的磷酸化(P<0.05)。⑤模型大鼠AMBax表达明显降低而Bcl-2表达升高(P<0.01),TAL给药组可降低慢支大鼠AMBcl-2表达,升高Bax表达。结论慢支模型大鼠AM活性增强、凋亡减少,TAL可诱导AM凋亡,抑制AM活性,使AM内Bcl-2/Bax的表达趋于平衡。ERK、JNKMAPK信号传导通路参与慢支大鼠AM凋亡的调节,JNKMAPK信号通路促进AM凋亡而ERKMAPK信号通路抑制AM凋亡。TAL的促AM凋亡作用可能与其抑制慢支大鼠AMERKMAPK信号通路的磷酸化活化、调节Bcl-2/Bax的表达有关。

TAL对慢性支气管炎大鼠防治作用的分子机制研究

目的：探讨枇杷叶三萜酸（TAL）对慢性支气管炎（CB）防治作用的分子机制。方法：应用BCG联用LPS的方法复制大鼠CB模型，采用体内外给药的方法，观察TAL对CB大鼠AMiNOS表达及活性、NO的释放、HO-lmRNA表达、p38MAPK磷酸化水平的影响及NO对AM中HO-lmRNA表达的调节作用，并进一步观察MAPK信号传导通路对AMiNOS表达的影响。结果：TAL能显著抑制CB大鼠AM培养上清中iNOS活性及NO的合成，剂量依赖性抑制CB模型大鼠AMHO-1的过表达。体外试验显示，SB203580（10uM）可显著抑制AM中iNOS的表达；I，Arg（10-6、10-5、10-4、10-3、10-2mol／L）可剂量依赖性促进AM中HO-1表达，此作用可被过量的L-NAME所阻断。结论：CB大鼠AM HO-1的表达为NO依赖性的，TAI对慢性支气管炎的治疗作用可能与其抑制iNOS活性及NO的合成进一步抑制HO-1的过量表达有关，TAL对慢支大鼠AMiNOS表达的抑制作用可能与其抑制p38 MAPK信号传导通路有关。