林肯链霉菌合成林可霉素代谢调节的研究

在摇瓶条件下研究了葡萄糖、铵盐、磷酸盐对林可霉素产生菌林肯链霉菌的生长及林可霉素生物合成的影响。发酵过程中林可霉素的合成主要发生在菌体生长期，逐渐下降。使用６％的葡萄糖未发现通常所说的“葡萄糖效应”。０２％铵盐有利于细胞生长，但０８％ＮＨ＋４对林可霉素的生物合成具有抑制作用。发酵４８ｈ后补加０６％ＮＨ＋４，对林可霉素的生成没有显著影响。００５％～０１％磷酸盐对林可霉素合成具有较强的抑制作用。并就磷酸盐对菌体由初级代谢转向次级代谢的作用作了初步考察。

林肯链霉菌谷氨酰胺合成酶的酶学性质

在分离纯化的基础上,报道了pH、温度和金属离子对林肯链霉菌(Streptomyceslincolnensis)Z-512谷氨酸胺合成酶(GS)活力的影响及GS底物专一性的研究结果.在动力学性质的研究中,发现林肯链霉菌GS在生物合成反应系统中,对底物NH_4CI的饱和曲线不遵守米氏方程.Hill作图呈两相曲线.在NH_4CI浓度低的情况下,Hill系数大于1,具有正协同效应;当NH_4CI浓度增加到一定程度时,Hill系数小于1,具有负协同效应.这说明NH_4CI不仅作为林肯链霉菌GS的底物,而且作为一种效应物调节GS的活性.林肯链霉菌GS对底物Glu及ATP的饱和曲线遵守米氏方程.在不同的激活离子存在下,GS对Glu、ATP的Km值也不同.

林肯链霉菌谷氨酰胺合成酶活力调节的研究

对不同氮源生长条件下林肯链霉菌无细胞粗提液中谷氨酰胺合成酶 (GS)的研究结果表明 ,高浓度NH+4阻遏了GS的生物合成。从不同氮源生长条件下林肯链霉菌中分离纯化了GS ,其性质没有差别。以受腺苷化调节的产气克雷伯氏菌GS作对照 ,林肯链霉菌GS没有明显的氨休克作用 ,经蛇毒磷酸二酯酶处理后 ,其活力没有变化。这些结果都说明林肯链霉菌GS不存在腺苷化共价修饰这一调节方式。反馈抑制作用是林肯链霉菌GS的一种重要的调节方式 ,这种抑制作用是以累积的方式进行的 ,这表明各种抑制剂对GS作用位点不同 ,各种抑制剂对GS的抑制作用是相互独立的。由此推测 ,林肯链霉菌GS是一种变构酶。

三种不同菌落形态的林肯链霉菌发酵特性的研究

考察三种不同形态的林肯链霉菌在种子培养、发酵过程中的一些发酵特性,在馒头状,草帽状和梅花状三种茵落形态中,梅花状茵落的发酵单位最高,其发酵单位比草帽状的高11%,比馒头状的高出8.3%。

林肯链霉菌原生质体制备条件的研究

对林肯链霉菌SL98原生质体制备条件进行了探索。其原生质形成最佳培养基中含甘氨酸浓度为0.4%,蔗糖浓度为34%;酶解条件是采用溶菌酶浓度4mg/mL,菌龄72h,酶解时间5h,酶解温度为30℃。其最高的原生质体的制备率达16.3%。

一株林肯链霉菌变种生理特性的研究

林肯链霉菌突变株ZL-1在斜面生长时间为4 d,母瓶培养时间为48 h,摇瓶发酵时间为5 d,摇瓶效价为2867μg/mL.与出发菌种SL98-2-8的3024μg/mL相比,虽然其摇瓶效价降低了5.2%,但其斜面生长缩短了2 d,母瓶培养缩短了6 h,摇瓶缩短了2 d,总发酵周期缩短了4 d,而且传代10代后性能稳定.

24孔板优化林肯链霉菌发酵培养基

目的优化林肯链霉菌发酵培养基。方法采用24孔板,对现有的两种发酵培养基中各因素进行考察,筛选出较优发酵培养基;在此发酵培养基基础上,采用L_(25)(5~6)正交设计方法,对可溶性淀粉、葡萄糖、豆饼粉、硫酸铵、玉米浆和磷酸氢二钾这6个可能影响林可霉素发酵水平的因素进行效应评价。结果得到最佳发酵培养基(g/L):可溶性淀粉30,葡萄糖105,豆饼粉22.5,玉米浆1,氯化钠2.25,碳酸钙6,硫酸铵2.65,硝酸钾1,磷酸氢二钾0.5。结论对优化后的发酵培养基进行孔板发酵验证,林可霉素的平均发酵产量达到2288μg/m L,比未优化组提高了42.03%。

林肯链霉菌原生质体的形成、再生及其影响因素

林肯链霉菌林肯变种(Streptomyces lincolnensis var.lincolnensis)在含有0.5%甘氨酸的 S培养基上生长的菌丝体对溶菌酶敏感,酶解后产生10~8/ml 的原生质体。在适当的条件下可有20%的原生质体再生成细胞。原生质体在4℃贮存20h 后再生活力下降至原来的20%以下。原生质体在紫外光照射下比孢子更易发生突变。

激光辐照的林肯链霉菌（S．lincolnensis）研究

本文首次报导铜蒸气激光辐照林肯链（Ｓ．ｌｉｎｃｏｌｎｅｎｓｉｓ）的研究结果，曾获得高产株，最高发酵单位比对照未辐照者提高１５．８％。

林肯链霉菌丙氨酸脱氢酶的纯化和性质

采用硫酸铵分级沉淀、DEAE-纤维素52柱层析、亲和蓝柱层析和琼脂糖凝胶Sepharose6B柱层析的方法，分离纯化了林肯链霉菌丙氨酸脱氢酶，用聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定为单一组分。以凝胶过滤和聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳测得该酶的分子量为170000，SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测得其亚基分子量为42500，表明林肯链霉菌丙氨酸脱氢酶由四个相同的亚基组成。该酶加氨反应最适pH为9．0，脱氨反应最适pH为9．5，加氨反应和脱氨反应的最适温度均为50℃。加氨反应丙氨酸脱氢酶的表现米氏常数km值为：丙酮酸2．08×10－4mol／L，NH4+2．00×10-2mol／L，NADH2．38×10-5mol／L；脱氨反应的Km为：L-Ala1．43×10-2mol／L；NAD+6．67×10-5mol／L。

林肯链霉菌林肯变种和小单孢菌属间融合

以阿司米星产生菌(Micromonospora sp.SIPI 4812 LMs,EMs,GMr,KMr)和林可霉素产生菌(Streptomyces lincolnensis var.lincolnensis 20-2 LMr,EMr,GMs,KMs)为出发菌株,进行属间原生质体融合,其融合频率为6.7×10-5。还测定了其它遗传重组频率。得到的融合子中有一些在菌落形态、抗菌活性等方面与出发亲株明显不同。

林肯链霉菌高产菌株选育研究

为进一步提高林可霉素生产发酵水平,本文以林肯链霉菌LK15-35为出发菌株,采用氯化锂(Li Cl)、常压室温等离子体(ARTP)和紫外线(UV)三重复合诱变,首先用Li Cl预处理4h,然后用ARTP照射60s,再用UV照射30s,最终获得高产突变株LK16-77。结果表明,摇瓶发酵单位提高30.0%,经180吨罐生产验证,平均放罐效价提高21.4%。稳定性传代验证证明该突变株高产性能遗传稳定。

林肯链霉菌原生质体形成、再生和融合的研究

林肯链霉菌生长在0.5%甘氨酸的S培养基中,能较好地被溶菌酶破壁形成原生质体。原生质体能在RB培养基上再生,但不能在R_2培养基上再生,这和已报道过的其他链霉菌不同。78-11菌株的再生频率约为25.7%,S-3菌株的再生频率约为20.5%。PEG(聚乙二醇)1000对诱导融合的效果较好,重组频率最高可达10^(-2)。重组子和亲本在培养特性、孢子形态方面无特殊差异,但经C_O^(60)诱变后重组子的正变率超过亲本。

林肯链霉菌林肯变种谷氨酰胺合成酶的研究(英文)

林肯链霉菌林肯变种是林可霉素的产生菌，研究中发现其菌丝体中谷氨酰胺合成酶（ Ｇ Ｓ）的比活力与林可霉素的生物合成存在正相关性．在此基础上，报道了 Ｇ Ｓ的分离纯化、分子特征、酶学性质和活力调节特性．采用硫酸铵分级沉淀、 Ｄ Ｅ５２ 离子交换层析、 Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ６ Ｂ凝胶过滤等方法，从林肯链霉菌林肯变种中分离纯化了 Ｇ Ｓ，用聚丙烯酰胺凝胶电泳（ Ｐ Ａ Ｇ Ｅ）鉴定为单一组分．以梯度 Ｐ Ａ Ｇ Ｅ 和凝胶过滤法测得 Ｇ Ｓ的相对分子质量为 ６６０ ０００， Ｓ Ｄ Ｓ Ｐ Ａ Ｇ Ｅ测得其亚基相对分子质量为５５ ０００，表明该酶由 １２ 个相同的亚基构成． Ｍｇ２＋ 或 Ｍｎ２＋ 作为辅助因子对 Ｇ Ｓ的催化活性是必需的．反馈抑制是 Ｇ Ｓ的一种重要调节方式，这种抑制作用是以累积的方式进行的，这表明各种代谢物对 Ｇ Ｓ的作用位点不同，它们对 Ｇ Ｓ的抑制作用是相互独立的．以受腺苷化去腺苷化调节的产气克雷伯氏菌 Ｇ Ｓ作对照，研究发现林肯链霉菌林肯变种 Ｇ Ｓ没有明显的氨休克作用，且经蛇毒磷酸二酯酶处理后，其活力没有变化．这些结果都说明林肯链霉菌林肯变种 Ｇ Ｓ不存在腺苷化共价修饰这一调节方式．另外，对不同氮源生长条件下林肯链霉菌林肯变种无细?

林肯链霉菌谷氨酸合酶的纯化和性质

采用硫酸铵分级沉淀、离子交换层析、凝胶过滤和吸附层析等方法 ,分离纯化了林肯链霉菌谷氨酸合酶 ,电泳鉴定为单一组分 .这是链霉菌中的第 1例 .谷氨酸合酶很不稳定 ,向酶缓冲液中加入α KG ,PMSF ,EDTA ,β 巯基乙醇和甘油可以大大提高其稳定性 .测得全酶分子量为 1 38ku ,亚基分子量为 81和 5 7ku ,表明该酶由2个不相同的亚基构成 .吸收光谱在 380和 440nm附近没有吸收峰 ,表明该酶是不含铁的非黄素蛋白质 .该酶反应的最适 pH为 7 2 ,最适温度为 30℃ .该酶对NADH ,α KG和L Gln的表观Km 值分别为 5 2 1× 1 0 -5 ,4 1 7× 1 0 -4 和 4 35× 1 0 -4mol/L .以NADPH代替NADH作电子供体 ,该酶仍表现出部分活力 .反应产物Glu和NAD+,部分金属离子、氨基酸及三羧酸循环中间物对该酶活力有不同程度的抑制作用 .

亚硝基胍诱变选育林肯霉素高产菌株

以林肯链霉菌９４７－８（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｌｉｎｃｏｌｎｅｎｓｉｓ９４７－８）为出发菌株（产林肯霉素９４０γ／ｍｌ）。采用孢子热处理方法处理出发菌株孢子，得到变异株９４７－８ｓ，产林肯霉素１０８０γ／ｍｌ。对９４７－８ｓ菌株进行ＮＴＧ诱变处理，得变异株９４７－８ｘ，产林肯霉素为１２１８γ／ｍｌ，且生产能力稳定。

氨基酸及金属离子对林肯霉素发酵的影响

通过改变基础发酵培养基中的金属离子和氨基酸种类及浓度,研究其对林肯链霉菌的菌体浓度及发酵液生物效价的影响.单因素实验结果表明,在基础发酵培养基中添加0.02g/L氯化锰、0.02g/L钼酸钠、0.15g/L硫酸镁和0.30g/L硫酸锌,调节初始pH为7.0,按6.7%的接种量接种,于30℃,220rpm的恒温振荡培养箱中培养48h后,再依次添加0.06%谷氨酸、0.10%酪氨酸、0.15%多巴和0.06%甲硫氨酸,再于30℃,220rpm的恒温振荡培养箱中培养5d.菌体浓度可达91%(16 000μg/mL),林肯霉素发酵液生物效价为4 200U/mL.

复合诱变选育林肯霉素高产菌株

以林肯链霉菌9502(Streptomyces lincolnensis9502)为出发菌株,进行NTG诱变处理,并用高效的琼脂块培养法对菌株进行筛选,得到产林肯霉素相对效价提高35.4%的变异株9502-7。对9502-7菌株孢子采用紫外线处理,得到变异高产菌株9502-7-12,其相对效价较出发菌株提高50%以上。

响应面法优化林可霉素发酵培养基

采用响应面法对林可霉素产生菌林肯链霉菌SL-98-2#-8的发酵培养基进行优化。首先,采用Plackett-Burman方法对影响发酵各因素的效应进行评价,筛选出有显著效应的5个因素:淀粉、葡萄糖、KH2PO4、豆饼粉和玉米浆;并通过响应面分析法优化这5个主要因素。优化后这5个因素的最佳含量为淀粉2.1%;玉米浆0.33%;葡萄糖8.5%;豆饼粉2.53%;KH2PO40.022%。采用优化后的培养基进行摇瓶发酵,林可霉素的含量为3700ug/ml,比优化前提高了12%。

紫外-激光复合诱变原生质体选育林可霉素高产菌株

以SL98-2-8为出发菌种,研究了紫外线、He-Ne激光以及紫外线与He-Ne激光复合对林肯链霉菌原生质体的诱变效应,结果表明He-Ne激光对紫外线引起的损伤有较好的修复作用。通过紫外线-He-Ne激光复合诱变,筛选到一株优良菌种SL98-2-8-116,其摇瓶效价达到3 629μg/mL,较出发菌种提高了18.3%,10次传代后生产性能稳定。