基于转录组学探讨林蛙油对卵泡发育障碍大鼠的影响

目的:通过转录组学角度分析林蛙油对环磷酰胺所致卵泡发育障碍的影响,为林蛙油的雌激素样作用机制研究提供充足的理论及实验依据。方法:筛选后的雌性Wistar大鼠60只,随机分为对照组(C)、模型组(M)、阳性药组(P)、林蛙油低(ORL)、高剂量组(ORH);除对照组外,其余大鼠均腹腔注射环磷酰胺建立卵泡发育障碍大鼠模型;除模型组外,其余大鼠灌胃相应药物,连续灌胃14~16 d后测定大鼠血清性激素含量;摘取卵巢和子宫称量记录,计算器官指数;一侧卵巢与子宫做HE染色计算各级卵泡数量及子宫内膜厚度,另一侧卵巢进行转录组学分析,筛选差异基因,对差异基因进行GO和KEGG富集分析。结果:大鼠卵泡发育障碍模型成功建立。与模型组大鼠相比,林蛙油低、高剂量组大鼠子宫湿重和子宫指数显著升高(P<0.05),孕酮和雌二醇含量显著升高(P<0.05);林蛙油低、高剂量组大鼠窦前卵泡与黄体数量显著升高(P<0.05),子宫内膜厚度显著增加(P<0.01),差异有统计学意义,林蛙油低剂量组大鼠窦状卵泡数量显著升高(P<0.05);转录组结果显示,林蛙油低、高剂量组与模型组之间差异基因分别有738、572个;GO富集分析分别富集到1790、1616个条目;KEGG富集分析主要集中在PI3K/Akt信号通路与B细胞受体信号通路。结论:林蛙油能有效改善环磷酰胺所致卵泡发育障碍大鼠的血清性激素水平、卵巢卵泡发育情况、子宫内膜萎缩等情况,其分子机制可能与PI3K/Akt、B细胞受体等通路及基因有关。

基于网络药理学探究林蛙油治疗慢性咳嗽的作用机制

目的利用网络药理学研究方法,探讨中药林蛙油中治疗慢性咳嗽的活性成分、作用靶点及相关通路,探究其作用机制。方法利用中国知网分别以林蛙油、哈蟆油、蛤蟆油为检索词进行检索,在已发表的相关研究文献中查找中药林蛙油的主要成分并进行筛选。利用GeneCards数据库、Online Mendelian Inheritance in Man(OMIM)疾病数据库以及Drugbank数据库查找慢性咳嗽的疾病靶点并汇总。利用String网站软件构建蛋白质相互作用网络图。利用Metascape网站对林蛙油的药物靶点进行GO分析以及KEGG通路富集分析,并构建药物-有效化合物-通路-作用靶点网络图,确定中药林蛙油治疗慢性咳嗽的关键靶点。结果林蛙油治疗慢性咳嗽的关键靶点有AKT1、IL6、EGFR等12个,关键通路PI3K-Akt、AGE-RAGE等10条信号通路。结论综合林蛙油对慢性咳嗽的治疗机制研究,利用网络药理学方法推测,林蛙油通过多成分、多靶点治疗慢性咳嗽,并且有多条通路与慢性咳嗽疾病通路相匹配,所以中药林蛙油具有一定慢性咳嗽的治疗作用。

林蛙油对雷公藤所致大鼠卵泡发育障碍的影响

目的:研究林蛙油对卵泡发育障碍模型大鼠卵巢中的卵泡和磷脂酰肌醇受体3-酪氨酸激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)/卵蛋白激酶受体B(protein kinase B,Akt)的信号通路的影响。方法:筛选后的雌性WISTAR大鼠40只,随机分为对照组、模型组、阳性药组和林蛙油高、低剂量组;除对照组外其余各组大鼠每日灌胃雷公藤多苷溶液(40 mg/kg),阳性药组大鼠灌胃戊酸雌二醇溶液(0.1 mg/kg)和醋酸甲地孕酮溶液(0.8 mg/kg),林蛙油高、低剂量组大鼠分别灌胃林蛙油溶液(400、200 mg/kg)。第8周测定大鼠血清雌二醇(estradiol,E2)、孕酮(progesterone,P)、促黄体生成素(Luteinizing hormone,LH)、促卵泡生成素(Follicle-stimulating hormone,FSH)和睾酮(testosterone,T)含量;摘取卵巢和子宫称量记录,计算器官指数;一侧卵巢做HE染色和TUNEL染色计算各级卵泡数量。另外一侧卵巢测定其中PI3K、AKT、人第10号染色体缺失的磷酸酶(phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten,PTEN)和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)的mRNA相对表达量以及PI3K、磷酸化蛋白激酶B(phosphorylated protein kinase B,p-Akt)的蛋白含量。结果:大鼠卵泡发育障碍模型成功建立。与模型组大鼠相比,林蛙油高剂量组大鼠子宫湿重和子宫指数显著升高(P<0.05);林蛙油高、低剂量组大鼠发情周期显著缩短(P<0.05),次级卵泡数量显著升高(P<0.05),卵泡闭锁率显著降低(P<0.05),血清FSH含量显著减少(P<0.05)、T和E2含量显著升高(P<0.05),PI3K蛋白含量显著增多(P<0.05),Akt蛋白磷酸化水平显著提高(P<0.05),PTEN m RNA相对表达量显著减少(P<0.05);林蛙油高剂量组大鼠卵巢中mTOR mRNA相对表达量显著低于模型组大鼠(P<0.05)。结论:林蛙油对雷公藤多苷所致大鼠卵泡发育障碍有明显的改善作用,林蛙油可以上调PI3K/Akt信号通路促进卵泡发育障碍的大鼠卵泡的生长和发育。

林蛙油中主要营养保健成分含量的研究

对林蛙油中主要营养保健成分进行了分析检测。结果表明:林蛙油中含有多种对人体有益的生物活性物质。其中,雌二醇含量25.03μg/g,促绒毛膜性腺激素(HCG)107.5μg/g,维生素E100.5mg/g,粗蛋白质含量达50％以上。

林蛙油耐缺氧与调节血脂的作用

[目的 ]研究林蛙油的耐缺氧作用和调节血脂的作用。 [方法 ] 18～ 2 0g雄性昆明小鼠作耐缺氧试验 ,190～ 2 10gWistar雄性大鼠作调节血脂试验 ,每组 10只动物。按推荐人体日摄入量( 3g/ 6 0kg体重 )的 30倍、2 0倍、10倍设计 ,分成 1 5 0g/kg、1 0 0g/kg、0 5 0g/kg 3个实验组和溶剂对照组。管饲法染毒。每日灌胃 1次 ,连续 30d ,测定各观测指标。以大豆色拉油为样品溶剂。耐缺氧试验用亚硝酸钠中毒存活试验 :记录腹腔注射亚硝酸钠中毒后动物存活时间 ;急性脑缺血性缺氧试验 :记录小鼠断头后至张口喘气停止时间 ;常压耐缺氧试验 :观察小鼠因缺氧而死亡的时间。调节血脂作用试验方法 :根据血脂水平 ,进行随机分组 ,在给予高脂饲料 ( 79%基础饲料、1%胆固醇、10 %蛋黄和 10 %猪油 )的同时给予不同剂量的受试物 ,分别于第 14d和第 2 8d从内眦静脉丛取血 ,用全自动生化分析仪测定血清总胆固醇、甘油三脂、高密度脂蛋白胆固醇含量。 [结果 ]耐缺氧试验结果 :1 5 0g/kg、1 0 0g/kg组动物存活时间、断头后至张口喘气停止时间溶剂对照组长 ,差异显著。对常压耐缺氧时的存活时间无明显影响 ,对各项试验中的小鼠体重增重无明显影响。第 2 8d各实验组的甘油三脂含量与溶剂对照组比较 ,差异显著 ,第 2 8d 1 5

SPSS正交设计提取林蛙油多糖

目的研究中性蛋白酶水解提取林蛙油多糖的最佳工艺参数。方法以料水比、中性蛋白酶浓度、水解时间和水解温度为考察因素,提取液中多糖含量为指标,通过SPSS软件设计L9(34)正交试验,并用SPSS进行数据处理。结果通过正交实验,得出中性蛋白酶提取林蛙油多糖工艺条件为料水比1∶100、加酶量为5%、水解时间1h、水解温度50℃。结论运用SPSS软件设计L9(34)正交表并进行数据处理,大大方便了实验结果处理,使实验方便科学,得出中性蛋白酶水解提取林蛙油多糖的工艺。

林蛙油及其酶解液抗氧化活性的研究

通过小鼠林蛙油喂养实验可以发现,林蛙油具有明显的提高超氧化物岐化酶、过氧化氢酶、谷光甘肽酶的活性,且1%酶解液可明显减少鼠体内的MDA、NO水平。所以,林蛙油有抗氧化作用。

林蛙油软胶囊抗疲劳保健功效的观察

按照国家卫生部抗疲劳保健食品审批标准,对林蛙油软胶囊进行了小鼠负重游泳试验,并测定了小鼠游泳后的血清尿素氮、肝糖原、血乳酸的含量。研究结果表明:每天经口服给予小鼠林蛙油软胶囊1 0,2 0,3 0g/kg,连续灌胃30d,能延长小鼠负重游泳时间,减少小鼠游泳时血清尿素氮的产生,增加肝糖原含量,减少血乳酸的产生,各试验组与对照组差异极显著(P<0 01),证明林蛙油软胶囊具有明显的抗疲劳保健功效。

林蛙油对衰老模型小鼠部分生理指标的影响

利用林蛙油对D-半乳糖致衰老模型小鼠进行抗衰老试验。结果表明:林蛙油能明显提高衰老模型鼠 血中SOD(超氧化物歧化酶)、GSH-PX(谷光甘肽过氧化物酶)的活性;降低肝脏中MDA(丙二醛)的含量,证明 林蛙油具有明显的抗氧化作用。

林蛙油软胶囊产品稳定性的研究

按照国家卫生部保健食品审批标准的要求,在相对湿度75％、温度37℃的条件下,对林蛙油软胶囊进行了3个月的稳定性实验。结果表明:该产品的微生物指标、主要理化指标、感官指标等检测项目均未发生变化。林蛙油软胶囊产品稳定性指标符合国家卫生部颁布的保健食品标准。

林蛙油对冷应激小鼠抗氧化能力的影响

研究林蛙油对冷应激小鼠抗氧化能力的影响,为林蛙油的合理开发和利用提供依据。本实验将40只雄性昆明品系小鼠随机分为4组:对照组、冷应激组、林蛙油5倍剂量组和25倍剂量组,每组10只。对照组和冷应激组灌胃生理盐水,5倍剂量组和25倍剂量组灌不同剂量的林蛙油,每组连续灌胃28d。灌胃到第15天,每天除对照组灌胃后置室温外,其他各组灌胃30min后,置-10℃冰箱30min,连续14d,杀鼠,测血清和脑组织中超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量。结果表明,林蛙油可以增加小鼠血和脑组织中SOD活性(p<0.01),降低MDA含量(p<0.01),在低温条件下林蛙油能增强小鼠抗氧化能力。

林蛙油蛋白中性蛋白酶水解物促进脾细胞和巨噬细胞功能

用盐析法结合超声波破碎细胞处理技术,从林蛙油中提取蛋白,并用中性蛋白酶制备林蛙油蛋白酶水解物。通过小鼠脾淋巴细胞增殖实验、脾淋巴细胞分泌白细胞介素-2水平、巨噬细胞吞噬中性红实验及巨噬细胞体外释放NO实验,研究林蛙油、林蛙油蛋白及其中性蛋白酶水解物对脾细胞和巨噬细胞功能的影响。研究结果发现,林蛙油、林蛙油蛋白及其中性蛋白酶水解物均对脾淋巴细胞及巨噬细胞的免疫功能具有不同程度的促进作用,其中林蛙油蛋白中性蛋白酶水解物显示较显著的促进作用(p<0.01)。其中性蛋白酶水解物可分别增强脾淋巴细胞增殖、脾淋巴细胞分泌白细胞介素-2、巨噬细胞吞噬功能及巨噬细胞产生NO功能达19.3%、104.8%、109.1%及34.9%。以上结果表明,林蛙油蛋白的中性蛋白酶水解物可显著提高脾淋巴细胞和巨噬细胞功能(p<0.01)。

林蛙油提升雌激素的机制研究

研究林蛙油对正常大鼠和去势大鼠性器官及性激素水平的影响,探讨服用林蛙油提升大鼠血清雌激素的机制。制备去卵巢大鼠,随机分为去势对照组、去势+林蛙油组,正常大鼠随机分为正常对照组、正常+林蛙油组,对正常+林蛙油组和去势+林蛙油组的大鼠每日灌胃200 mg/kg林蛙油,连续灌胃4周。所有大鼠末次灌胃1 h后麻醉,腹主动脉取血,分离血清测定性激素6项指标,取子宫和卵巢(正常大鼠),称量湿重,进行病理组织学检查。结果表明正常大鼠服用林蛙油后,血清雌二醇、睾酮含量显著上升(P<0.05),卵巢病理检查发现,有排卵后黄体增多的现象。去势大鼠服用林蛙油后,血清睾酮、泌乳素含量显著上升(P<0.05),子宫病理检查发现,子宫内膜上皮细胞厚度显著增加(P<0.05)。结论:林蛙油具有一定的外源雌激素作用,但提升服用者雌激素的主要作用机制可能类似于促性腺激素作用机制。

辽宁产中国林蛙油、卵产量及蛋白质含量动态分析

研究1～3龄中国林蛙（Ranachensinensis）哈土蟆油、卵产量以及油、卵和去内脏躯体中粗蛋白含量。结果表明：3龄蛙的含油量和绝对含卵量显著效高，而相对含卵量2龄蛙最高。粗蛋白含量在不同蛙龄、不同部位间都有差异，不同部位的变化趋势也不一样，其中印中蛋白质含量最高，油中蛋白质含量相对较稳定。去内脏躯体中也有很高的蛋白质含量，且雌雄躯体间无明显差别。越冬前后相比较，油的产量及油中蛋白含量都无明显差异，卵的产量越冬后显著较高．卵中蛋白含量差异不显著。

林蛙油对老年雌性大鼠脂质过氧化的影响

[目的 ]林蛙油 (oviductusranae)是哈士蟆的干燥输卵管 ,其有效成份为雌酮 ,17β 雌二醇 ,17β 羟甾醇脱氢酶 ,睾酮、孕酮 ,胆甾醇 ,维生素A ,胡萝卜素 ,无机盐钾、钠、镁、钙、铁、锰和硒等。本文观察了林蛙油对老年雌性大白鼠的SOD ,GSH PX,MDA的影响。 [方法 ]样品为吉林干林蛙油 ,黄白色 ,不规则块状 ,有特殊油脂味。设 0 17,0 83和 4 2 5g/kg体重 3个剂量组 ,一个老年鼠对照组和一个青年鼠对照组 ,连续灌胃 2个月。测定血清SOD和GSH PX 含量和肝匀浆MDA值。 [结果 ]可见高剂量组血清SOD和GSH PX 含量升高 ;在高、中剂量组肝匀浆MDA含量降低。 [结论

林蛙油主要营养成分的研究

本研究对林蛙油中主要营养保健成分进行了分析检测。结果表明,林蛙油中含有多种对人体有益的营养保健成分和生物活性物质,其中粗蛋白质含量达50%以上,VE达100.5mg/g,促绒毛膜性腺激素(HCG)107.5μg/g,雌二醇25.03μg/g,同时含有多种微量元素和维生素。

林蛙油复方冲剂对超重环境下微波照射大鼠抗氧化效应的研究

采用林蛙油复方冲剂,分别于超重环境下微波照射前、超重环境下微波照射后、超重环境下微波照射中对Wistar大鼠进行干预,检测各组大鼠血清总抗氧化能力、抑制羟自由基能力和微量丙二醛含量,以探讨林蛙油复方冲剂对超重环境和微波辐射大鼠抗氧化的效应。结果表明,超重环境和微波辐射协同作用,可导致大鼠血清总抗氧化能力降低、抑制羟自由基能力增强、微量丙二醛含量增高。林蛙油于微波照射后干预可提高总抗氧化能力及抑制羟自由基能力,照射中干预可降低微量丙二醛含量。说明林蛙油复方冲剂的干预方式不同,对超重环境下微波辐射大鼠的抗氧化作用也不同。

发酵林蛙油饮品的研制及工艺优化

将林蛙油经酶解处理后采用开菲尔发酵剂进行发酵,研制出发酵林蛙油饮品。在单因素试验的基础上,采用Box-Behnken试验设计结合响应面分析法,以发酵时间、接种量、蔗糖添加量为考察因素,优化出了最佳发酵工艺。结果表明:在发酵温度为30℃时,各因素对发酵林蛙油饮品感官评定的影响由大到小依次为:接种量、蔗糖添加量、发酵时间。最佳工艺条件为:接种量为4.53%,蔗糖添加量为8.00%,发酵时间为9.76h。在此工艺条件下,产品酸甜可口、风味独特,感官评定得分与预测值无显著性差异。

林蛙油的指纹图谱

目的建立一种稳定、可靠的鉴别和控制林蛙油质量的方法。方法利用高效液相色谱法,测定10批林蛙油药材建立指纹图谱。色谱条件:DimonsilC18分析柱(250mm×4.6mm,5μm),柱温:25℃,流动相:乙腈-水(50∶50),分析时间60min。结果测10份不同林蛙油商品完整药材的丙酮提取物的HPLC图谱。结论在本色谱条件下,可以检出17个相应位置稳定的共有峰,可作为确定鉴定林蛙油的指标峰。