林蛙油蛋白中性蛋白酶水解物促进脾细胞和巨噬细胞功能

用盐析法结合超声波破碎细胞处理技术,从林蛙油中提取蛋白,并用中性蛋白酶制备林蛙油蛋白酶水解物。通过小鼠脾淋巴细胞增殖实验、脾淋巴细胞分泌白细胞介素-2水平、巨噬细胞吞噬中性红实验及巨噬细胞体外释放NO实验,研究林蛙油、林蛙油蛋白及其中性蛋白酶水解物对脾细胞和巨噬细胞功能的影响。研究结果发现,林蛙油、林蛙油蛋白及其中性蛋白酶水解物均对脾淋巴细胞及巨噬细胞的免疫功能具有不同程度的促进作用,其中林蛙油蛋白中性蛋白酶水解物显示较显著的促进作用(p<0.01)。其中性蛋白酶水解物可分别增强脾淋巴细胞增殖、脾淋巴细胞分泌白细胞介素-2、巨噬细胞吞噬功能及巨噬细胞产生NO功能达19.3%、104.8%、109.1%及34.9%。以上结果表明,林蛙油蛋白的中性蛋白酶水解物可显著提高脾淋巴细胞和巨噬细胞功能(p<0.01)。

木瓜蛋白酶作用于林蛙油蛋白质水解功能特性的研究

本研究以林蛙油为底物,加酶水解,实验确定林蛙油水解最适宜的酶制剂为木瓜蛋白酶。与林蛙油相比,水解产物具有很好的溶解性,游离雌二醇含量随水解程度的增加而增加,粘度随水解程度的增加而降低。

林蛙油蛋白酶水解物的免疫促进功能与抗氧化活性

用木瓜蛋白酶、胰蛋白酶、中性蛋白酶和碱性蛋白酶制备林蛙油蛋白酶水解物,分别称为PAH、TPH、NPH、APH。巨噬细胞吞噬中性红实验结果表明,4种酶水解物均具有促进巨噬细胞功能作用,其中NPH的免疫促进作用最强,其次为PAH、TPH及APH。巨噬细胞体外释放NO实验结果再一次表明,林蛙油蛋白酶水解物具有免疫促进作用,其中还是NPH的活性最强,其次为PAH、APH及TPH。用总抗氧化能力测定实验,检测林蛙油蛋白4种酶水解物的抗氧化作用,结果表明,4种酶水解物也均具有一定抗氧化性,其中仍是NPH的抗氧化活性最强,其次为PAH、APH和TPH。比较4种酶水解物的促进巨噬细胞功能和抗氧化活性,发现具有较强免疫促进作用的林蛙油蛋白酶水解物同时也具有较强的抗氧化活性。

林蛙油蛋白对骨质疏松大鼠成骨分化的影响研究

目的:观察林蛙油蛋白对碱性磷酸酶(ALP)、骨钙蛋白(Osteocalcin)、转录因子(Runx-2)及骨形态发生蛋白2(BMP2)的调节作用,阐述其对骨质疏松大鼠成骨分化的保护作用。方法:SD雌性大鼠50只分为正常对照组、模型组(VOX)、戊酸雌二醇组(EV,0.05 mg/kg)、林蛙油蛋白给药组(150、75 mg/kg)。采用手术摘除大鼠双侧卵巢法建立骨质疏松模型。用林蛙油蛋白治疗8周后,测定ALP、Osteocalcin、Runx-2、BMP2的蛋白表达、骨密度(BMD)和最大生物载荷量(折断)。结果:与正常对照组比较,模型组ALP、Osteocalcin、Runx-2及BMP2的表达均显著下调,最大生物载荷量明显下降,骨密度显著降低;与模型组比较,各剂量组的ALP、Osteocalcin、Runx-2及BMP2均明显表达上调,150mg/kg林蛙油蛋白组最大生物载荷量和骨密度明显增加。结论:林蛙油蛋白对骨质疏松大鼠的体重变化无影响,但其能调控ALP、Osteocalcin、Runx-2、BMP2的表达、促进大鼠成骨分化、影响骨代谢,同时能改善大鼠最大生物载荷量和骨密度,可能对防治绝经后骨质疏松症发挥一定的作用。

林蛙油蛋白胰蛋白酶水解物对小鼠脾淋巴细胞和巨噬细胞功能的影响

用胰蛋白酶水解林蛙油蛋白,并制备不同浓度林蛙油蛋白胰蛋白酶水解物,通过小鼠脾淋巴细胞增殖试验、巨噬细胞吞噬中性红试验和巨噬细胞体外释放NO试验,观测林蛙油蛋白胰蛋白酶水解物对小鼠脾淋巴细胞和巨噬细胞功能的影响。结果显示,不同浓度林蛙油蛋白胰蛋白酶水解物对脾淋巴细胞和巨噬细胞具有明显的免疫促进作用,当该水解物浓度大于100μg/m L时,对淋巴细胞增殖和巨噬细胞杀伤功能的促进效果极显著(P<0.001);当该水解物浓度大于200μg/m L时,对巨噬细胞释放NO的促进效果极显著(P<0.001)。该试验表明林蛙油蛋白的胰蛋白酶水解物可显著提高脾淋巴细胞和巨噬细胞功能(P<0.001),且随着浓度的增加,其作用效果增强。

林蛙油蛋白胰蛋白酶水解物抗氧化活性的研究

笔者用胰蛋白酶水解林蛙油蛋白,制备了不同浓度林蛙油胰蛋白酶水解物,通过小鼠脾淋巴细胞增殖试验、巨噬细胞吞噬中性红试验和巨噬细胞体外释放N0试验,观测林蛙油、林蛙油蛋白以及林蛙油蛋白胰蛋白酶水解物对小鼠抗氧化能力的影响。结果显示,林蛙油蛋白和林蛙油蛋白胰蛋白酶水解物对小鼠抗氧化能力具有促进作用。能显著提高小鼠血清总抗氧化能力、血清SOD、CAT、GSH-Px活力,可降低血清MDA含量达1.04~1.50倍,且当林蛙油蛋白胰蛋白酶提取物灌胃量达100mg/kg·d时,作用效果极显著(P<0.01)。结果表明,林蛙油蛋白胰蛋白酶提取物可显著提高小鼠抗氧化能力,并随着灌胃剂量的增加,作用效果增强,说明林蛙油抗氧化作用的活性成分存在于蛋白质中^([1])。