林蛙输卵管总RNA提取方法的优化及RT-PCR验证

分别使用改良的十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)法、TRIzol法和RNAiso Plus法对林蛙的输卵管组织进行总RNA提取,考察不同方法对总RNA提取量的影响.结果表明:利用改良的RNAiso Plus法并经进一步纯化,获得总RNA的A260/A280平均值为1.96,平均得率为56.1μg/g;通过反式多聚酶链式反应(RT-PCR)获得了林蛙GAPDH基因和EF-1-α基因的部分序列.

东北林蛙输卵管上皮细胞的培养质量控制管理

目的探讨分析东北林蛙输卵管上皮细胞的培养,并对其质量控制进行分析研究。方法该文对东北林蛙输卵管上皮细胞进行分离和纯化,对细胞培养所需要的条件及试剂进行比较优化,对东北林蛙输卵管上皮细胞进行培养传代。结果通过上述分离方法分离获得林蛙输卵管上皮细胞,通过台盼蓝染色看出活细胞达95%以上,分离方法可行。通过显微镜观察发现,分离所得的输卵管细胞为圆饼状,胞浆饱满,细胞核清晰可见,呈悬浮状态,培养24 h后,细胞大部分都处于贴壁状态,多数伸展呈卵圆形,类似眼睛状,成簇生长,排列紧密,7 d后长满培养瓶瓶底,开始传代培养。结论该研究建立的东北林蛙原代输卵管上皮细胞分离培养方法可获纯度较高的输卵管上皮细胞,值得实验室细胞培养质量控制管理。

林蛙输卵管糖蛋白的纯化方法研究

林蛙输卵管糖蛋白是由输卵管上皮细胞分泌的一类高分子量的特异性蛋白质,对配子的成熟和运输、受精以及早期胚胎发育具有重要影响。长白山林蛙输卵管糖蛋白具有特殊药用价值和广泛的应用前景,目前对其提取和纯化工艺的研究也比较深入。简述输卵管糖蛋白的性质及生物学功能,着重论述分离纯化方法。