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利用番茄果实特异启动子E8改造‘外源基因清除’的表达载体及转化金柑研究
1
作者
谢玉明
李益
+3 位作者
严佳文
姚润贤
Alessandra Gentile
邓子牛
《分子植物育种》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第10期2274-2279,共6页
利用"外源基因清除"技术(‘Gene-Deletor’),将外源基因从转基因金柑果实中彻底清除,可以达到用转基因作物生产出非转基因食品的目的。本研究利用引物pE8F和pE8R从樱桃番茄中克隆果实特异启动子E8,通过SalⅠ和SmaⅠ双酶切置换...
利用"外源基因清除"技术(‘Gene-Deletor’),将外源基因从转基因金柑果实中彻底清除,可以达到用转基因作物生产出非转基因食品的目的。本研究利用引物pE8F和pE8R从樱桃番茄中克隆果实特异启动子E8,通过SalⅠ和SmaⅠ双酶切置换掉"外源基因清除"载体(pCambia-LF-polseed-FLP,简称Y-A)中的花粉、种子特异启动子PAB5,重新构造"外源基因清除"载体Y-A-E8,利用农杆菌EHA105介导转化实生态金柑,获得转化植株,并通过nptⅡ基因特异引物nptⅡ-F和nptⅡ-R PCR检测阳性转化植株。载体Y-A-E8 SalⅠ和SmaⅠ双酶切结果表明,E8启动子成功替换启动子PAB5,Y-A-E8经EHA105介导转化成功获得11株转化植株且PCR检测到6株为Y-A-E8转基因植株。研究结果可为"外源基因清除"技术在转基因金柑方面的应用提供参考。
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关键词
“外源基因清除”技术
果实特异启动子e8
载体改造
金柑
遗传转化
原文传递
牙龈卟啉单胞菌菌毛融合抗原基因果实特异表达载体的构建及意义
2
作者
戴海燕
王华
+1 位作者
文少敏
解娜
《山东医药》
CAS
北大核心
2011年第31期22-24,共3页
目的构建含牙龈卟啉单胞菌菌毛融合抗原基因的番茄果实特异表达载体,并提高抗原基因的表达量和免疫原性,为其在番茄果实内表达和研制有效的转基因植物牙周炎疫苗奠定基础。方法通过PCR获得番茄果实特异表达启动子E8的核心序列片段(约1.1...
目的构建含牙龈卟啉单胞菌菌毛融合抗原基因的番茄果实特异表达载体,并提高抗原基因的表达量和免疫原性,为其在番茄果实内表达和研制有效的转基因植物牙周炎疫苗奠定基础。方法通过PCR获得番茄果实特异表达启动子E8的核心序列片段(约1.11 kb),同时合成通过柔性接头连接的霍乱毒素B亚基(Cholera Tox-in B Subunit,CTB)和牙龈卟啉单胞菌菌毛FimA(266-337)(约600 bp)序列的基因片段,利用重叠区扩增基因拼接法将两基因片段连接,得到重组片段E8-CTB-FimA(266-337),双酶切E8-CTB-FimA(266-337)片段和植物表达载体pBI121,酶切产物连接后,获得重组载体pBI E8-CTB-FimA(266-337),利用酶切方法和测序方法对pBIE8-CTB-FimA(266-337)进行鉴定。结果基因测序及酶切结果表明特异表达载体已成功构建。结论本研究成功构建了含牙龈卟啉单胞菌菌毛融合抗原基因的番茄果实特异表达载体;该载体可用于转基因植物牙周炎疫苗的研制。
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关键词
牙龈卟啉单胞菌
番茄
果实特异启动子e8
菌毛蛋白
霍乱毒素B亚基
下载PDF
职称材料
牙龈卟啉菌菌毛FimA基因高效植物表达载体的构建
被引量:
2
3
作者
戴海燕
王华
+2 位作者
文少敏
解娜
邱瑾
《牙体牙髓牙周病学杂志》
CAS
北大核心
2010年第11期630-633,共4页
目的:构建果实特异启动子驱动的含牙龈卟啉单胞菌菌毛FimA基因的高效植物表达载体,并进一步提高抗原基因的表达量和免疫原性,为研制有效的转基因植物牙周炎疫苗打下基础。方法:以提取的番茄基因组DNA为模板扩增番茄果实特异表达启动子E...
目的:构建果实特异启动子驱动的含牙龈卟啉单胞菌菌毛FimA基因的高效植物表达载体,并进一步提高抗原基因的表达量和免疫原性,为研制有效的转基因植物牙周炎疫苗打下基础。方法:以提取的番茄基因组DNA为模板扩增番茄果实特异表达启动子E8的核心序列(约1.11kb),同时合成通过接头连接的霍乱毒素B亚基和FimA(266~337)(约600bp),并通过SOE PCR,即重叠区扩增基因拼接法(genesplicing by overlap extension)将两者拼接,拼接后的序列为EF。用EcoR I和Pst I分别双酶切EF序列及表达载体pCAMBIA1302,连接转化,得到的重组质粒pCAMBIA1302-EF用电击法转化根癌农杆菌GV3103。结果:重组质粒经PCR和酶切鉴定证明已成功转化。结论:本研究成功构建了番茄果实特异性启动子驱动FimA基因,以CTB为黏膜免疫佐剂的高效植物表达载体。
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关键词
牙龈卟啉菌
蕃茄
果实特异启动子e8
FimA
霍乱毒素B亚基
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职称材料
题名
利用番茄果实特异启动子E8改造‘外源基因清除’的表达载体及转化金柑研究
1
作者
谢玉明
李益
严佳文
姚润贤
Alessandra Gentile
邓子牛
机构
湖南农业大学园艺园林学院
国家柑橘改良中心长沙分中心
出处
《分子植物育种》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第10期2274-2279,共6页
基金
国家自然青年基金项目(31201596)
湖南省科技计划项目(2014NK3014)共同资助
文摘
利用"外源基因清除"技术(‘Gene-Deletor’),将外源基因从转基因金柑果实中彻底清除,可以达到用转基因作物生产出非转基因食品的目的。本研究利用引物pE8F和pE8R从樱桃番茄中克隆果实特异启动子E8,通过SalⅠ和SmaⅠ双酶切置换掉"外源基因清除"载体(pCambia-LF-polseed-FLP,简称Y-A)中的花粉、种子特异启动子PAB5,重新构造"外源基因清除"载体Y-A-E8,利用农杆菌EHA105介导转化实生态金柑,获得转化植株,并通过nptⅡ基因特异引物nptⅡ-F和nptⅡ-R PCR检测阳性转化植株。载体Y-A-E8 SalⅠ和SmaⅠ双酶切结果表明,E8启动子成功替换启动子PAB5,Y-A-E8经EHA105介导转化成功获得11株转化植株且PCR检测到6株为Y-A-E8转基因植株。研究结果可为"外源基因清除"技术在转基因金柑方面的应用提供参考。
关键词
“外源基因清除”技术
果实特异启动子e8
载体改造
金柑
遗传转化
Keywords
‘G
e
n
e
-D
e
l
e
tor'v
e
ctor
e
8
promot
e
r
V
e
ctor modification
Kumquat
G
e
n
e
tic transformation
分类号
S641.2 [农业科学—蔬菜学]
原文传递
题名
牙龈卟啉单胞菌菌毛融合抗原基因果实特异表达载体的构建及意义
2
作者
戴海燕
王华
文少敏
解娜
机构
海南医学院口腔医学院
海南医学院海南省热带病重点实验室
出处
《山东医药》
CAS
北大核心
2011年第31期22-24,共3页
基金
海南省自然科学基金资助项目(807096)
文摘
目的构建含牙龈卟啉单胞菌菌毛融合抗原基因的番茄果实特异表达载体,并提高抗原基因的表达量和免疫原性,为其在番茄果实内表达和研制有效的转基因植物牙周炎疫苗奠定基础。方法通过PCR获得番茄果实特异表达启动子E8的核心序列片段(约1.11 kb),同时合成通过柔性接头连接的霍乱毒素B亚基(Cholera Tox-in B Subunit,CTB)和牙龈卟啉单胞菌菌毛FimA(266-337)(约600 bp)序列的基因片段,利用重叠区扩增基因拼接法将两基因片段连接,得到重组片段E8-CTB-FimA(266-337),双酶切E8-CTB-FimA(266-337)片段和植物表达载体pBI121,酶切产物连接后,获得重组载体pBI E8-CTB-FimA(266-337),利用酶切方法和测序方法对pBIE8-CTB-FimA(266-337)进行鉴定。结果基因测序及酶切结果表明特异表达载体已成功构建。结论本研究成功构建了含牙龈卟啉单胞菌菌毛融合抗原基因的番茄果实特异表达载体;该载体可用于转基因植物牙周炎疫苗的研制。
关键词
牙龈卟啉单胞菌
番茄
果实特异启动子e8
菌毛蛋白
霍乱毒素B亚基
Keywords
porphyromonas ginglvalis
tomato fruit-sp
e
cific promot
e
r
e
8
firabria
e
chol
e
ra toxin B subunit
分类号
R781.4 [医药卫生—口腔医学]
下载PDF
职称材料
题名
牙龈卟啉菌菌毛FimA基因高效植物表达载体的构建
被引量:
2
3
作者
戴海燕
王华
文少敏
解娜
邱瑾
机构
海南医学院口腔医学院
海南医学院省热带病重点实验室
出处
《牙体牙髓牙周病学杂志》
CAS
北大核心
2010年第11期630-633,共4页
基金
海南省自然科学基金资助项目(807096)
文摘
目的:构建果实特异启动子驱动的含牙龈卟啉单胞菌菌毛FimA基因的高效植物表达载体,并进一步提高抗原基因的表达量和免疫原性,为研制有效的转基因植物牙周炎疫苗打下基础。方法:以提取的番茄基因组DNA为模板扩增番茄果实特异表达启动子E8的核心序列(约1.11kb),同时合成通过接头连接的霍乱毒素B亚基和FimA(266~337)(约600bp),并通过SOE PCR,即重叠区扩增基因拼接法(genesplicing by overlap extension)将两者拼接,拼接后的序列为EF。用EcoR I和Pst I分别双酶切EF序列及表达载体pCAMBIA1302,连接转化,得到的重组质粒pCAMBIA1302-EF用电击法转化根癌农杆菌GV3103。结果:重组质粒经PCR和酶切鉴定证明已成功转化。结论:本研究成功构建了番茄果实特异性启动子驱动FimA基因,以CTB为黏膜免疫佐剂的高效植物表达载体。
关键词
牙龈卟啉菌
蕃茄
果实特异启动子e8
FimA
霍乱毒素B亚基
Keywords
porphyromonas gingivalis; tomato fruit-sp
e
cific
e
8
promot
e
r; FimA; chol
e
ra toxim subumit;
分类号
R780 [医药卫生—口腔医学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
利用番茄果实特异启动子E8改造‘外源基因清除’的表达载体及转化金柑研究
谢玉明
李益
严佳文
姚润贤
Alessandra Gentile
邓子牛
《分子植物育种》
CAS
CSCD
北大核心
2015
0
原文传递
2
牙龈卟啉单胞菌菌毛融合抗原基因果实特异表达载体的构建及意义
戴海燕
王华
文少敏
解娜
《山东医药》
CAS
北大核心
2011
0
下载PDF
职称材料
3
牙龈卟啉菌菌毛FimA基因高效植物表达载体的构建
戴海燕
王华
文少敏
解娜
邱瑾
《牙体牙髓牙周病学杂志》
CAS
北大核心
2010
2
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职称材料
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