西瓜果实特异性基因wml1的5’端上游调控序列的分离

西瓜(Citrullus vulgris Schrad.)ADP-葡萄糖焦磷酸化酶大亚基基因wml1的表达具有果实特异性。本文利用Uneven PCR技术成功地从西瓜基因组DNA中分离出一段长1864bp、位于wml1基因5’端上游的新序列。该序列含有TATA盒和CAAT盒,具典型的启动子特征。克隆序列中180bp-1752bp和958bp-1752bp两个片段分别与GUS基因融合进行瞬间表达试验,结果初步表明180bp-1752bp片段具有果实特异性启动子活性,转录调控元件位于序列的180bp-958bp。

香蕉果实特异性ACC合酶基因启动子区的克隆及其功能初探

根据本实验室所获得的香蕉果实特异性ACC合酶cDNA序列 ,以改进的接头连接PCR方法通过两次步行从香蕉基因组中分别扩增并克隆了其基因 5′旁侧区近端 1 2kb和远端 1 6kb的片段。通过拼接 ,构建出含有2 5 0 5bp启动子区和转录起始位点下游 86bp的共 2 5 91bp的基因 5′旁侧区片段 ;其启发性动子区中 34至 2 8为推测的TATA盒序列 , 15 8至 146为推测的CCAAT盒 ,与其它植物基因启动子结构相类似。将 2 5kb启动子片段与 β 葡糖苷酸酶 (GUS)基因编码序列融合 ,用基因枪法将构建的嵌合基因转入香蕉叶、根和果实的细胞后 ,只在果实细胞中观察到报告基因的瞬时表达 ,从功能上证明了此 2 5kb的启动子片段具有指导报告基因在香蕉果实中特异性表达的作用。同时构建 5个含不同 5′端缺失启动子与GUS融合基因的表达载体。瞬时表达结果表明可能负责果实特异性表达的调控区存在于转录起始位点至 - 1111的启动子区中 ,而在 - 1111至 - 6 0