19种杀菌剂对甜瓜细菌性果斑病菌的杀菌活性评价

瓜类细菌性果斑病是由西瓜噬酸菌引起的一种种传病害,在生产上的危害极为严重,可造成大面积的减产甚至绝产,但目前在生产中还缺乏有效的防治药剂。为筛选出高效防治细菌性果斑病的杀菌剂,在室内筛选了19种杀菌剂的离体活性成分,并对高活性杀菌剂进行毒力评价和活体盆栽验证。室内研究结果表明,0.3%四霉素水剂等8种杀菌剂离体杀菌活性显著,毒力强度依次为0.3%四霉素水剂>1%申嗪霉素悬浮剂>5%噻霉酮悬浮剂>20%辛菌胺醋酸盐水剂>20%丙硫唑悬浮剂>4%春雷霉素水剂>0.4%蛇床子素水剂>0.5%小檗碱水剂。活体盆栽试验结果表明,0.5%小檗碱水剂、20%丙硫唑悬浮剂、4%春雷霉素水剂和5%噻霉酮悬浮剂这4种药剂对甜瓜细菌性果斑病有较好的防治效果,其中0.5%小檗碱水剂对甜瓜细菌性果斑病的保护和治疗作用最强,在供试质量浓度为100 mg·L^(-1)时的保护和治疗防效分别为79.66%和73.24%。上述研究试验表明,0.5%小檗碱水剂、20%丙硫唑悬浮剂、4%春雷霉素水剂和5%噻霉酮悬浮剂可作为田间防治甜瓜细菌性果斑病的有效候选药剂。

海南省东方市甜瓜细菌性果斑病病原鉴定

细菌性果斑病严重影响甜瓜生产,为确定其病原菌种类,从海南省东方市种植基地采集大量疑似细菌性果斑病的甜瓜样本,进行病原菌分离纯化,并按柯赫法则对获得的菌株进行致病性测定。通过菌落形态观察、生理生化测定及16S rDNA序列比对分析,对分离病原菌进行鉴定。结果表明,大田采集的所有甜瓜病果中均分离到培养性状一致的细菌,细菌分离率为100%;所有分离菌株均对甜瓜果实具有致病性,该病原菌革兰氏反应呈阴性,其菌落形态及生理生化测定结果与已报道的西瓜嗜酸菌(Acidovorax citrulli)一致;BLAST比对与A. citrulli菌株的同源性可达100%,系统发育分析也进一步证实该病菌为A. citrulli。研究结果确定了甜瓜果斑病的致病菌,为该病的有效防治提供了依据。

9种杀菌剂对甜瓜细菌性果斑病的田间防效

为筛选高效低毒且对甜瓜细菌性果斑病防效较佳的农药试剂,以砂地甜瓜为研究对象,对9种高效低毒杀菌剂进行了田间筛选试验。结果表明,供试的9种药剂对甜瓜细菌性果斑病均具有一定的防治作用。77%硫酸铜钙可湿性粉剂500倍液第1次和第2次喷药7 d后防效均在70%以上,且第2次防效比第1次上升1.55个百分点,防治效果最佳。建议在白银市甜瓜果斑病防治中优先选用77%硫酸铜钙可湿性粉剂500倍液喷雾防治。

西瓜种子进行细菌性果斑病检测的研究

细菌性果斑病(Acidovorax citrulli)是一种由燕麦嗜酸菌西瓜亚种(Acidovorax avenae subsp.Citrulli)引起的严重危害葫芦科作物的世界性病害,该病主要通过种子远距离传播,如果能够在种植瓜果之前就检测出种子是否带病,就能有效防止果斑病及其他更多的病菌对果农造成经济损失。采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)和PCR检测法对5份西瓜种子进行细菌性果斑病检测,旨在对两种不同的检测方法进行比较并探究各自的优劣。经过实验对比两种方法发现,ELISA检测方法实验结果容易受外界影响,对操作要求比较高,且精度不如PCR检测法,但在PCR检测法中引物选择十分重要,引物选择直接关系到实验的准确性,因此对PCR检测细菌性果斑病引物选择方面的探索还要继续进行。

瓜类细菌性果斑病菌拮抗细菌的筛选及其抑菌作用

从土壤中筛选出抑制哈密瓜细菌性果斑病的拮抗菌株,明确其分类地位,测定其生长条件及防病效果。采用梯度稀释法及平板对峙法进行菌株的分离及筛选,综合形态学观察、生理生化测定以及分子鉴定等多方面对菌株进行鉴定,确定生防菌种属,并测定其最适生长条件,利用平板对峙法测定其抑菌作用,并分别采用针刺接种法、叶面喷施法对生防菌的离体叶片和盆栽防病试验进行测定。本研究从土样中共分离出196株细菌,经对峙筛选发现有20株细菌具有抑菌效果,其中编号为131、791的两株细菌对哈密瓜细菌性果斑病病原菌具有较好的平板拮抗效果,抑菌圈直径分别为(19.03±0.13)mm,(17.55±0.29)mm。经鉴定菌株131为沙福芽孢杆菌(Bacillus safensis),菌株791为贝莱斯芽孢杆菌(B.velezensis)。菌株131的最适生长条件为NB培养基,培养18 h,温度37℃,pH 7,接种量为2%。菌株791的最适生长条件为KB培养基,培养18 h,温度37℃,pH 6,接种量为1%。菌株131和791对哈密瓜细菌性果斑病的离体叶片防效分别为83.33%和87.53%,室内盆栽防效分别为69.86%和77.99%,同时也对多种病原真菌具有抑制作用。菌株131和791均为对哈密瓜细菌性果斑病具有较好防效的芽孢杆菌(Bacillus),对瓜类作物细菌性果斑病的防治提供了理论补充,奠定了果斑病害生物防治的基础。

防治甜瓜细菌性果斑病种传病原菌的杀菌剂筛选

选择16种杀菌剂对甜瓜细菌性果斑病菌进行抑菌环试验,筛选到5种具有不同程度抑菌效果的杀菌剂,并选用其中抑菌效果较好的3种杀菌剂(杀菌剂1号200倍液、萎锈·福美双100倍液和0.3%四霉素250倍液)处理甜瓜带菌种子。结果表明:杀菌剂处理后,PCR检测结果仍为阳性,但在杀菌剂1号200倍液处理的甜瓜带菌种子中未分离到致病活菌,0.3%四霉素250倍液处理后种子的带菌量明显减少,而萎锈·福美双100倍液则无明显杀菌效果。杀菌剂1号200倍液和0.3%四霉素250倍液处理对种子发芽无明显影响,而苗期发病率与对照相比均显著降低。

荧光假单胞菌2P24防控瓜类果斑病机制初探

为初步解析荧光假单胞2P24对瓜类细果斑病的防控机制,测试其次生代谢物2,4-DAPG、MPC对西瓜嗜酸菌Acidovorax citrulli生长的影响,并比较分析2P24及其突变株△phlD(丧失2,4-DAPG合成能力)及△gacS(丧失2,4-DAPG、HCN、蛋白酶合成能力)的病害防控效果和对甜瓜生理生化指标的影响。结果表明,2,4-DAPG及MPC对病原菌的生长、游动性及生物膜的形成均具有抑制作用;与2P24相比,△phlD对病原菌的生长抑制降低,△gacS丧失生长抑制作用。△phlD及△gacS病害相对防治率分别下降了44.3%和77.1%。2P24对于西瓜、甜瓜幼苗有明显的促生作用,可显著提高幼苗株高和鲜重,同时发现2P24可在病原菌接种后诱导甜瓜抗性相关酶SOD、CAT、POD活性提升及3个相关抗性基因MELO3C023441、MELO3C022146及MELO3C004303的表达。本研究结果为瓜类果斑病的生物防治研究提供了参考和理论依据。

设施甜瓜细菌性果斑病的发生及防治

细菌性果斑病是当前甜瓜生产上最重要的病害,其病原菌为西瓜嗜酸病原菌,在我国甜瓜生产及制种地均有发生,严重影响甜瓜的商品性。笔者总结了该病在设施甜瓜种植中的发生特点和防控方法,供大家参考。一、发生条件甜瓜细菌性果斑病的远距离传播主要依赖种子带菌传播。

西瓜果斑病菌T2SS分泌蛋白的筛选和功能预测

利用KEGG和STRING数据库分析比较瓜类果斑病菌(西瓜嗜酸菌)(Acidovorax citrulli,Ac)和主要植物病原细菌Ⅱ型分泌系统(T2SS)的基因组成,收集有试验证据的植物病原细菌T2SS分泌蛋白序列信息,与已测序并经注释的果斑病菌AAC00-1菌株基因组进行序列比对,筛选出候选的果斑病菌同源T2SS分泌蛋白。通过对筛选出的分泌蛋白的信号肽、代谢通路、蛋白互作网络及其在植物细胞中的定位进行分析,预测部分分泌蛋白的生物学功能。

青脆李果斑病病原鉴定及室内药剂筛选

据《中国南方果树》2023年第4期《青脆李果斑病病原鉴定及室内药剂筛选》(作者周慧珍等)报道,为了给防治青脆李果斑病提供理论依据及开发化学防治技术,对青脆李果斑病进行了致病菌分离、纯化和鉴定,对分离菌株的致病力进行了评价,采用菌丝生长速率法进行了15种田间常用杀菌剂的室内药剂筛选。

10种杀菌剂处理对西瓜细菌性果斑病的防治效果

【目的】西瓜细菌性果斑病是一种危害范围广、毁灭性强的种子传播病害,是西瓜生产的主要病害之一。为筛选出能够有效防治西瓜细菌性果斑病的药剂,选择生产上常用的10种杀菌剂进行了防效测定。【方法】防效测定采用室内平板抑菌试验、盆栽防效测定。【结果】室内平板抑菌试验结果显示,3%中生菌素可湿性粉剂、3%噻霉酮水分散粒剂、1.5%噻霉酮水乳剂、2%春雷霉素水剂、20%噻菌铜悬浮剂和20%噻森铜悬浮剂对该病菌具有抑制作用,其中抑菌效果较好的为3%中生菌素可湿性粉剂和3%噻霉酮水分散粒剂。盆栽防效测定结果显示,在接种处理14 d后,3%中生菌素可湿性粉剂和3%噻霉酮水分散粒剂对西瓜细菌性果斑病的防治效果可达90%。【结论】3%中生菌素可湿性粉剂和3%噻霉酮水分散粒剂具有较好的抑菌效果,在生产上可推荐其用于西瓜细菌性果斑病的防治。

西瓜细菌性果斑病菌鞭毛基因fliS的功能分析

【目的】西瓜细菌性果斑病由西瓜噬酸菌(Acidovorax citrulli,Ac)引起,是一种严重的世界性病害。细菌的鞭毛通常被认为是细菌的运动器官,在细菌的侵染过程中也起重要作用,已有报道表明这种作用可受鞭毛蛋白基因fliS的调控,目前西瓜细菌性果斑病菌鞭毛蛋白基因fliS的功能及其调控机理尚不清楚,本研究旨在探讨该基因在鞭毛形成和致病性等生物学特性中的作用。【方法】以果斑病菌野生型致病菌株1号基因组DNA为模板,设计一系列引物,PCR扩增敲除基因fliS的上下游片段,通过回收、酶切、连接、转化等步骤构建敲除载体和互补载体,然后采用三亲杂交法,根据同源重组的原理,构建fliS基因缺失突变菌株及其互补菌株,并对其鞭毛的形态特征、致病性、过敏反应、游动性、群体感应、菌膜、生长速率、菌落形态等生物学特性进行测定;进一步提取细菌总RNA,以谷氨酰胺合成酶基因glnA为参照来校正目标基因的表达量,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)方法,比较野生菌株、敲除菌株和互补菌株部分鞭毛蛋白基因flh D、fliE、fliC、flgK、flgM、fliD和fliA的表达量差异。【结果】通过抗性基因Gm的筛选和PCR验证,成功构建了果斑病菌鞭毛蛋白基因fliS缺失突变菌株1-fliS及其互补菌株1-fliShb,并对所得菌株的生物学特性和鞭毛进行观察,结果表明,与野生菌株相比,鞭毛蛋白基因缺失突变菌株的游动性、菌膜形成能力减弱,互补后游动性、菌膜形成能力基本恢复;缺失突变菌株对甜瓜、西瓜幼苗以及西瓜果实的致病性降低,互补后对西瓜、甜瓜幼苗及西瓜果实的致病力完全恢复。电镜测试显示,突变菌株鞭毛变短,长度约为野生菌株的1/3—1/4,互补后鞭毛合成能力基本恢复,鞭毛长度约为野生菌的4/5;光学显微镜下,可观察到在NA平板上的野生菌株菌落周围有明显的由细菌颤泳形成的特殊晕圈,而缺失突变菌株在NA平板上不能形成这种晕圈,互补后晕圈形成能力部分恢复;缺失突变菌株的生长速率比野生菌株慢,互补后生长速率没有恢复;野生菌株、突变菌株和互补菌株在过敏性反应和群体感应方面无差异。qRT-PCR分析结果显示,fliS基因缺失突变后,flh D表达量较野生菌株明显降低,fliE、fliC和flgK表达量较野生菌株明显升高,flgM和fliD表达量略微上升,fliA表达量基本不变;互补菌株中flhD、fliE和fliC表达量部分恢复,flgK、flgM和fliD表达量没有恢复,与突变菌株相同。【结论】鞭毛基因fliS对果斑病菌鞭毛丝的形成、游动性、菌膜形成能力、生长速率、菌落形态、致病性等均有调控作用。

药剂处理种子防治哈密瓜细菌性果斑病

药剂处理带菌种子防治哈密瓜细菌性果斑病研究表明,以3％盐酸处理种子防效果最好,其次是47％加瑞农可湿性粉剂和新植霉素。用3％盐酸处理哈密瓜种子15min,水洗后,再用600倍加瑞农浸种处理过夜后播种,对哈密瓜细菌性果斑病具较好防效。

哈密瓜细菌性果斑病种子带菌的PCR检测

利用特异性引物PCR技术,用水或PBST浸提哈密瓜带菌种子中的病原物,浸提液直接作模板就可以扩增出特异性的条带,检测出瓜类果斑病菌(Acidovoraxavenaesubsp.citrulli)的种子带菌情况,种子的浸提时间对检测结果的影响不大,同时查明种皮是种子带菌的主要部位;病瓜种子只有在2粒以上才能检测。采用PCR技术对市售的11个哈密瓜品种的种子带菌情况进行检测,结果检测出8个品种携带瓜类果斑病菌,进一步说明这一方法的可行性和实用性。

巢式PCR快速检测西瓜细菌性果斑病菌

【目的】建立nested-PCR方法,快速检测西瓜种子中的燕麦嗜酸菌西瓜亚种(Acidovorax avenae subsp.citrulli,Aac),为西瓜细菌性果斑病(bacterial fruit blotch of watermelon,WFB)的防控提供技术支持。【方法】根据Aac BOX短重复序列的PCR产物设计两对引物BX-L1/BX-R5和BX-L1/BX-S-R2,建立以BX-L1/BX-R5为外侧引物,BX-L1/BX-S-R2为内侧引物的nested-PCR,以5μL样品处理液于99℃高温裂解10 min,再放置冰上冷却5 min,以所释放病原DNA为模板进行PCR扩增,采用50μL反应体系:5μL 10×PCR buffer(25 mmol·L-1MgCl2),4μL dNTP(D4030RA,2.5 mmol·L-1),引物(5μmol·L-1)各3μL,0.4μL Taq DNA酶(DR001B,5 U·μL-1),通过退火温度优化,反应条件为:引物BX-L1/BX-R5各3μL进行第一轮扩增,95℃,2 min;95℃,30 s;65℃,45s;72℃,1 min;35个循环;72℃,延伸7 min;取扩增后的产物1μL为模板,以引物BX-L1/BX-S-R2各3μL进行第二轮扩增,95℃,2 min;95℃,30 s,66℃,45 s,72℃,1 min,30个循环,72℃,7 min。在此条件下对梯度Aac菌悬液、模拟带菌种子提取液进行特异性、灵敏性及重复性检验,对不同带菌率的西瓜种子提取液进行检测。【结果】引物BX-L1/BX-R5和BX-L1/BX-S-R2在检测不同来源的Aac菌株时都产生了预期大小的片段,并且对其近源种燕麦嗜酸菌卡特莱兰亚种(A.avenae subsp.cattleyae)、魔芋假单胞菌(A.avenae subsp.konjaci)及其不相关菌株未扩增出目标片段。以BX-L1/BX-R5为外侧引物,BX-L1/BX-S-R2为内侧引物的nested-PCR,对Aac纯菌液和模拟带菌种子提取液的最低检测限4.7×101cfu/mL,比direct-PCR灵敏度高出1 000倍。当西瓜种子带菌率在0.1%—0.5%时,nested-PCR阳性检测率为66.7%;当种子带菌率为1%—10%时,nested-PCR的阳性检测率为83%—100%。【结论】以BX-L1/BX-R5为外侧引物,BX-L1/BX-S-R2为内侧引物的nested-PCR方法,能够快速、高效检测携带微量Aac的西瓜种子,检测结果重现性高。

福建省西瓜细菌性果斑病的病原鉴定

2004年在福建种植的西瓜上发现一种新细菌病害———西瓜细菌性果斑病.从病叶和病果上分离到20个细菌菌株,接种西瓜后,发病症状与自然发病症状完全一致,而且从接种病株上又重新分离到了相同细菌,这20个细菌菌株经柯赫氏法则证明均为该病的致病菌.各菌株间致病力无明显差异.挑选其中的14个菌株经革兰氏染色、菌体形态、培养性状、生理生化特性等测试,确认该病原菌为燕麦嗜酸菌西瓜亚种(Acidovorax avenaesubsp.citrulli).该病菌除侵染西瓜外,人工接种尚能侵染多种葫芦科及番茄、玉米、大豆等作物.

种子引发处理对无籽西瓜幼苗生长的影响和对细菌性果斑病菌消毒的效果

种子出苗率低和传带细菌性果斑病菌是制约三倍体无籽西瓜生产的主要原因。本试验利用KMnO4、CuSO4和ZnSO4的不同浓度溶液对无籽西瓜种子进行不同时间引发处理,通过滤纸发芽试验,观测其对种子发芽和幼苗生长的促进作用;借助平板法测定引发溶液对细菌性果斑病菌FC247的抑制作用,免疫凝聚试纸条和传统PCR检测引发处理对种子人工接菌FC247的消毒效果。结果表明:0.1%CuSO4溶液引发处理4 h和0.2%ZnSO4溶液引发处理24 h,分别比未引发处理的无籽西瓜种子发芽率提高71.1%和73.3%,并能显著提高发芽整齐度和幼苗素质;同时,引发溶液对细菌性果斑病菌有显著抑制作用,并对人工接菌种子表现出一定程度的消毒效果。

哈密瓜细菌性果斑病菌快速检测方法的建立

【目的】哈密瓜细菌性果斑病在中国为新发生的病害,其病原菌为燕麦食酸菌西瓜亚种(Acidovorax avenae subsp.Citrulli),危害瓜果造成品质下降。该病为典型的种传细菌性病害,因此种子检疫成为防治此病害的重要手段。【方法】通过实验,将生物学、免疫学和分子生物学检测技术有机结合,建立了一套针对哈密瓜果斑病的种子带菌检测方法Bio-IMS-Real-timePCR。【结果】经过人工模拟种子带菌检测实验,结果表明该方法可成功地检测出1000粒种子中的1粒带菌种子(带菌量约为1.04×105CFU/种子,经计算,可以检测的最初浓度为2CFU·ml-1ASCM培养液),且信号较强。【结论】该检测方法的建立,大大提高了对哈密瓜细菌性果斑病菌检测的精度,也为生产实践中哈密瓜果斑病的防治提供了重要的技术支持。

不同哈密瓜品种苗期对细菌性果斑病的抗病性鉴定

为探明新疆哈密瓜不同品种对瓜类细菌性果斑病(Acidovorax avenae subsp.citrulli)的抗性差异,提供筛选抗耐病性材料的新来源,通过室内喷雾接种法,对30个哈密瓜主栽品种和后备品种(系)进行了苗期抗病性鉴定,结果表明:新金雪莲为高抗品种,病情指数为2.73;新密25号等12个为中抗品种;新密杂7号等12个为中感品种;金凤凰等5个为高感品种,最高病情指数为52.30;没有免疫品种。

不同药剂对甜瓜细菌性果斑病(BFB)带菌种子处理的影响

利用3种药剂及其不同浓度对甜瓜细菌性果斑病(BFB)带菌种子进行消毒处理,并调查药剂处理后种子发芽率、鲜重、根长、过氧化氢酶活性、丙二醛、发病率和嫁接后表现,结果表明,福尔马林100倍液和果腐净一号900倍液处理对甜瓜细菌性果斑病带菌种子消毒效果、生长等综合表现较优。