基于SERS的苹果树腐烂病原菌早期侵染检测

为了早期诊断由黑腐皮壳真菌(Valsa mali Miyabe et Yamada)引起的苹果树腐烂病,该研究基于表面增强拉曼光谱(surface-enhanced Raman scattering,SERS)技术,以腐烂病菌丝、病原菌丝侵染的苹果树和健康的苹果树枝作为研究对象,结合S-G平滑和迭代自适应加权惩罚最小二乘法进行拉曼光谱预处理,经解析发现病原菌丝与染菌样本在1 598、1 595 cm^(-1)和2 930、2 925 cm^(-1)附近敏感谱峰明显区别于健康样本。重复试验分析发现,病原菌侵染可致寄主特征谱峰偏移以及谱峰强度改变:健康样本在1 286 cm^(-1)附近的特征峰随病原菌的侵染偏移至1 365 cm^(-1)附近;健康样本在1 286与1 587 cm^(-1)附近的谱峰强度比值小于0.5,染菌样本在1 365与1 595 cm^(-1)附近的谱峰强度比值大于0.5,而菌丝在1 327与1 598 cm^(-1)附近的谱峰强度比值大于1.0;1 595 cm^(-1)附近谱峰强度因染病而增强。构建BP神经网络模型进行早期染病样本的快速判别,识别率达90%以上。研究表明SERS技术结合BP神经网络可以准确识别苹果树腐烂病原菌丝,从而进行苹果树枝腐烂病的早期诊断,为植物病害的早期快速诊断和病害发生预警提供了研究思路和有效手段。

不同药剂对苹果树腐烂病防治效果的影响

为防治苹果树腐烂病,在刮病斑条件下涂化学药剂,调查治愈率和病斑愈合宽度。结果表明,苹果树腐烂病治愈率,甲硫萘乙酸+涂立康原液、43 g/L戊唑醇200倍液处理的最高,分别为96.15%、95.24%,高出对照12.82%、11.91%;其次为腐轮特原液、3%甲基硫菌灵原液、3.3%腐酸·硫酸铜原液、4.5%腐殖·硫酸铜原液,治愈率达90%以上,高出对照6.67%~7.58%;其余药剂治愈率在90%以下。病斑伤口两侧平均愈合宽度,甲硫萘乙酸+涂立康原液最高,为14.6 mm,高出对照44.55%;其次为4.5%腐殖·硫酸铜原液、腐轮特原液,分别为13.0、12.8 mm,高出对照28.71%、26.73%;再次为43 g/L戊唑醇200倍液、3%甲基硫菌灵原液,分别为11.3、11.1 mm,高出对照11.88%、9.90%;骨质种子提取液原液最低,为9.8 mm,低于对照。总之,刮净病斑涂抹甲硫萘乙酸+涂力康原液效果最好,43 g/L戊唑醇200倍液、腐轮特原液、4.5%腐殖·硫酸铜原液效果较好,建议生产上大面积推广应用。

苹果树腐烂病的诱发原因与应对措施

苹果树腐烂病俗称烂皮病,是造成北方果树减产的重要病害,多发于每年的3、4月和8、9月份,严重的甚至可能出现果树损毁,果园损毁情况,已成为果农关注的主要果树病害之一。腐烂病主要是由病害寄生菌导致,一旦果树树势衰弱,成果较多,就容易引发腐烂病。我国北方地区果树产区均有此病症发生,给果农造成严重经济损失。究其原因,主要与日常果园管理有直接关系,病虫害、老龄树园、管理不当等都是腐烂病的重要诱因。本文研究腐烂病发病机制,对病症、原因等进行深度分析,提出科学合理的防治措施及防治要点,强调果园管理工作、病害防治工作的重要性,为相关从业者提供借鉴。

三种药剂对苹果树腐烂病防效对比试验

苹果树腐烂病危害主枝、主干,导致果树枝干枯死甚至毁园。以43%戊唑醇悬浮剂、3%甲基硫菌灵糊剂、寡雄腐霉为参试药剂,在乔化红富士苹果树上开展了腐烂病防控效果单因素对比试验。分4次施药,定点调查苹果树腐烂病斑数、复发病斑数、新生病斑数,计算新生病斑增长率、病斑复发率和防治效果。结果表明,43%戊唑醇悬浮剂对苹果树腐烂病防治效果最好,寡雄腐霉次之,但两者差异不明显。从安全生产角度考量,优先推荐使用生物药剂寡雄腐霉。

苹果树腐烂病生防木霉菌的筛选及鉴定

为了筛选对苹果树腐烂病具有生防潜力的木霉菌,采用稀释平板法,从健康苹果根际土样中分离纯化了8株木霉菌,结合形态学和系统发育分析,3株为长枝木霉菌(Trichoderma longibrachiatum),5株为哈茨木霉(T.harzianum)。平板对峙培养试验表明,8株木霉菌对苹果树腐烂病菌(Cytospora pyri CP01)均具有抑制作用,其中长枝木霉菌ft-50在盘中对苹果树腐烂病病原菌CP01有较强的拮抗作用,抑菌率达78.6%。平板对扣试验表明,ft-50产生的挥发物抑菌效果最好,抑菌率为72.1%。离体苹果枝接种ft-50后,苹果树腐烂病病原菌的侵染和扩展具有显著抑制效果,防效为56.3%。本试验筛选的长枝木霉ft-50对苹果树腐烂病菌具有较强的拮抗活性,可作为生物防治资源应用于苹果树腐烂病的防治。

基于Box-Behnken响应面法的补骨脂种子提取物防治苹果树腐烂病增效技术研究

通过采用Box-Behnken响应面法,优化了补骨脂种子提取物涂抹剂助剂配方。当助剂中添加0.023g/mL山梨醇聚氧乙醚、0.046 g/mL聚醚改性硅油、0.005 g/mL糊精时,补骨脂种子提取物涂抹剂对苹果树腐烂病菌的抑制率可达92.52%。同时,通过田间试验,验证了补骨脂种子提取物涂抹剂对苹果树腐烂病菌的防效达90.40%,显著高于常规液态剂型。

杀菌剂对苹果树腐烂病的田间防效

为筛选苹果树腐烂病高效防治杀菌剂,采用病疤刮治、药剂刷干以及不同药剂交替刷干的方法,研究了6种杀菌剂对苹果树腐烂病的田间防治效果。结果显示,100万孢子/g寡雄腐霉菌可湿性粉剂500倍液的刮治效果最好,防效达89.58%,且促进病疤愈伤组织形成能力较强,愈合度达24.28%,显著优于其他杀菌剂。100万孢子/g寡雄腐霉菌可湿性粉剂500倍液与430 g/L戊唑醇悬浮剂300倍液交替刷干的效果明显优于单一药剂刷干,防治效果达93.06%,新生病疤减少率95.83%。寡雄腐霉菌与戊唑醇交替刷干可以显著降低新生病疤的发生数量,从而起到对苹果树腐烂病的预防作用,再结合病疤刮治措施,可有效促进腐烂病病疤愈合。

7种杀菌剂与拮抗菌SJ1606发酵代谢物配合对苹果树腐烂病菌的抑制活性

[目的]明确7种杀菌剂和拮抗菌SJ1606对苹果树腐烂病菌防治效果、筛选出高效混配剂,为传统化学杀菌剂的减量增效使用提供参考方向。[方法]采用菌丝生长速率法测定了7种杀菌剂和拮抗菌SJ1606发酵代谢物以及新型混剂对苹果树腐烂病菌的抑制效果。[结果]苹果树腐烂病菌对咪鲜胺、戊唑醇、丙环唑、多菌灵、苯醚甲环唑表现为高度敏感,以上5种化学杀菌剂对病原菌的EC_(50)分别为0.12、0.33、0.57、0.64、1.14μg/mL;对吡唑醚菌酯表现为中度敏感EC_(50)为6.92μg/mL;对福美双表现为不敏感,EC_(50)为149.99μg/mL。SJ1606发酵上清液和脂肽粗提物对病菌的EC_(50)分别为40.36、14.75μL/mL。采用体积混配方法,脂肽粗提物对部分化学药剂表现出较强的增效作用,其中与多菌灵混配以7∶3增效最为明显,毒性比达1.72;与吡唑醚菌酯以6∶4的毒性比最高为1.58,与咪鲜胺混配以6∶4的混配毒性比最高为1.50;与丙环唑混配以5∶5毒性比最高为1.48。[结论]成功筛选出脂肽粗提物对化学杀菌剂混配增效比例,这对后续生防菌SJ1606的开发利用、杀菌剂的减量使用以及新型混剂的创制提供技术支撑。

中国苹果树腐烂病发生和防治情况调查

2008年4～5月，通过国家苹果产业技术体系网络系统，对我国10个苹果主产省市的147个果园进行了苹果树腐烂病发生和防治情况调查。结果显示，在所调查苹果树中，总体发病率达52．7％。随着树龄的增大，腐烂病发病株率提高，4～10年生果树株发病率为26．8％，11～17年树龄的果树株发病率为54．0％，18~24年树龄的树株发病率为59．3％。不同省份之间以及不同品种之间，腐烂病在发生程度上存在一些差异，但不很明显。在腐烂病的化学防治中，石硫合剂是使用最多的药剂。在刮治病斑中，使用最多的是福美胂，其他还包括松焦油、腐殖酸、腐殖酸铜、过氧乙酸等。调查中发现防治腐烂病的用药比较混乱，由于福美胂毒性高，在无公害果园生产中已被禁用，因此研究替代福美胂的药剂成为当务之急。

陕西苹果树腐烂病菌(Cytospora spp.)不同分离株的生物学特性与致病性研究

本研究从陕西分离得到61株苹果树腐烂病菌(Cytospora spp.),选取在PDA培养基上菌落特征差异明显的7个分离株,对其生物学特性及致病性进行研究。结果表明:各分离株在PDA、PSA、PMA和PEMA培养基上菌落生长较好,但在PDA上的菌落颜色和产孢情况差异很大。各分离株均能在5～32℃生长,但对35℃以上高温的适应性差异较大;所有分离株均能在pH4～9的条件下生长,最适pH为5～6;光照对各分离株的菌落生长有明显的促进作用。各分离株均可在Cza-pek培养基及供试的其它碳、氮源培养基上生长,其中以葡萄糖、麦芽糖和酵母膏为最佳碳、氮源。采用烫伤接种的方法,分别以菌饼和分生孢子悬浮液接种苹果离体枝条,两者均可侵染发病,但各分离株致病力差异显著,其中菌落颜色为黄褐色的菌株致病性强。因此,根据菌落颜色、致病性和生物学特性可将这7个分离株划分为3个类群:Ⅰ型为黄褐色强致病类群,但各分离株的产孢量有差异;Ⅱ型为乳白色不产孢的弱致病类群;Ⅲ型为灰褐色易产孢弱致病类群。其余54株分离物均属于Ⅰ型,这些结果说明陕西省苹果树腐烂病菌具有多样性和致病性分化现象。

8种药剂对苹果树腐烂病的田间防效评价

为了有效防治苹果树腐烂病，通过夏季药剂涂干和春季病斑刮治试验，评价了8种药剂对苹果树腐烂病的田间防治效果。连续3a（2012—2014年）的预防试验结果显示：采用戊唑醇、噻霉酮、链霉菌Hhs．015、苯醚甲环唑和农抗120五种药剂在7月份连续2次啧涂苹果树枝干，能够有效地抑制腐烂病新病斑的形成，第2年新生病斑减少百分率的均值介于75．8％～84．1％，表现出稳定的防治效果；其中以43％的戊唑醇200倍液和1．6％的噻霉酮30倍液的效果相对较好，新生病斑减少百分卒均值分别达到了84．1％和81．6％。连续2a（2012—2013年）的病斑治疗试验结果显示：戊唑醇表现出优良的病斑治疗效果，处理的40个病疤中只有1个复发，复发率为2．5％；噻霉酮、苯醚甲环唑、拂蓝克和腐植酸·铜的治疗效果次之，病疤复发率为5％；进一步测量了药剂对伤口愈合的促进作用，发现拂蓝克和戊唑醇促进愈伤组织形成的能力较强，其愈伤组织宽度均值分别达到了16．7mm和15．3mm，显著高于其他药剂处理。以上结果说明，夏季在树干上喷涂适宜的化学药剂可以显著降低新生病疤的发生数量，从而起到对苹果树腐烂病的预防作用。在苹果树腐烂病的化学防治上要树立预防为主、刮治为辅的理念，即在夏季选择适宜的药剂喷涂树干2次（间隔7～10d），以降低新病疤的发生数量，然后再结合病疤刮治措施进行防治。

陕西渭北地区苹果树腐烂病发生情况调查

为明确近年来陕西省苹果主产区腐烂病发生动态,于2009-2011年在渭北7个县区对不同树龄、不同品种的525个苹果园进行系统调查。结果表明,这些果园苹果树腐烂病发生普遍,平均病株率55%、单株平均新生病疤数1.5个、病情指数25、侧枝发病率14%,年份间除侧枝外,其他发病率没有明显性差异。不同树龄的富士苹果树发病情况调查显示,其平均侧枝发病率、病情指数差异显著,树龄大发病严重,16～20a树龄比6～10a树龄的果园发病率和单株平均新生病疤数分别高出58.89%和46.21%;富士、嘎啦和秦冠3个品种发病情况调查显示,其平均侧枝发病率差异显著,以秦冠发病最轻,且平均病株率和病情指数也明显低于其他品种;不同地域富士发病情况差异显著,渭北台塬西部区的腐烂病发生最为严重,渭北台塬东部区次之,渭北高原沟壑区发病最轻;栽植密度对富士果园发病影响显著,栽植密度大的果园其平均病株率、单株平均新生病疤数、病情指数、侧枝发病率均明显高于栽植密度小的果园。

陕西省关中地区苹果树腐烂病调查初报

于2003—09～2004—06在陕西杨凌、周至、礼泉、淳化、黄陵等地，对苹果树腐烂病的发生情况，以及危害的严重程度进行了初步调查。结果显示，树龄与苹果树腐烂病的发生直接相关，表现为随着树龄的增加腐烂病危害逐渐加重。地区之间苹果树腐烂病严重程度存在着不同程度的差异，除地区间小气候外．管理水平也是影响腐烂病发生的重要因素。

苹果树腐烂病发生与叶片营养成分的关系

【目的】明确苹果树腐烂病发生程度与树体营养之间的关系,为苹果树腐烂病的防治提供理论指导。【方法】在陕西省苹果主产县白水县选取苹果树腐烂病发生程度不同的24个果园,调查苹果树腐烂病发生程度,测定发病叶片氮、磷、钾元素含量,研究苹果树腐烂病发生与叶片营养成分的关系。【结果】树体营养水平与苹果树腐烂病发生程度有明显相关性:单因子回归分析显示,当叶片K含量<9mg/g时,叶片K含量与腐烂病的发生程度呈极显著的负相关关系;多元回归分析显示,N、P、K元素间平衡与腐烂病发生程度关系密切,病情指数与N/K和P/K均呈极显著正相关关系。增施钾肥能提高叶片钾含量,使病斑扩展明显变慢,表明提高钾含量能够提高寄主抗腐烂病菌扩展能力。【结论】从控制苹果树腐烂病角度认为,果园叶片钾含量至少应该≥9mg/g,氮钾比小于2.5,磷钾比小于0.25。

新疆苹果树腐烂病病原菌(Cytospora schulzeri)的分离、鉴定及其生物学特性的研究

采集新疆苹果产区苹果树腐烂病标本,以组织分离法从标本中获得了5个菌株：PG576、PG431-2、PG534、PG650-1、PG787-1,通过室内致病性测定发现,5株菌均能够在健康枝条上致病且表现与田间相同的症状。经形态学特征结合多基因片段（ITS、NL、EF、ACT）的分子系统发育分析,明确PG576、PG431-2、PG534、PG650-1、PG787-1菌株为Cytospora schulzeri,首次发现该菌能够在新疆苹果树上造成危害。5株菌的最适生长条件为：PDA培养基,pH值6.0~7.0,28℃连续光照培养。

甘肃省苹果树腐烂病发生和防治情况调查

试验于2014年对甘肃省宁县、西峰区、庆城、镇原、泾川、崆峒区、静宁、庄浪、礼县、麦积区、秦安和甘谷12个县区23个乡镇的74个苹果园进行了苹果树腐烂病发生和防治情况调查．结果表明：在所调查的4011株苹果树中，总体发病率达4l_09％．庆城、镇原和庄浪果园的果树发病率较高，西峰区果树发病最轻；随着树龄的增大，腐烂病发病株率提高，3～10年生果树株发病率为5．28％，11-17年树龄的果树株发病率为28．23％，18-25年树龄的树株发病率为33．65％．‘秦冠’品种抗性最差，发病率和病情指数分别为53．75％和31．28，其次为‘富士系’‘元帅系’和‘澳洲青苹’品种；不同立地条件下腐烂病发生差异不明显．针对腐烂病防治过程中存在的问题提出了加强栽培管理，增强树势是防治腐烂病的重要措施．

丁香菌酯对苹果树腐烂病的防治

室内离体活性测定结果表明丁香菌酯(SYP-3375)对苹果树腐烂病具有优异的防治效果,其EC50值为1.83mg/L,防效高于嘧菌酯和生产常规药剂福美胂。连续2年的田间试验结果和试验中观察到的现象表明在500～1500mg/L使用剂量下,丁香菌酯能有效地抑制苹果树腐烂病病疤的复发,对病疤的愈合有非常明显的促进作用,效果明显优于对照药剂嘧菌酯和代森铵。在试验剂量下对苹果树安全,对非靶标生物无不良影响。

甘肃陇东苹果树腐烂病的发生规律与防治技术

通过2008—2010年对甘肃省陇东地区苹果树腐烂病的调查、观察与防治试验,摸清了该地区苹果树腐烂病的发病规律,结合防治试验与当地防治成功经验,总结并提出了该地区切实可行的苹果树腐烂病综合防治技术。

苹果树腐烂病斑季节扩展动态

本研究通过田间人工接种苹果树腐烂病病菌并在发病后对病斑进行连续观察,明确苹果树腐烂病在不同季节发生的难易程度和病斑扩展动态。结果表明,不同生长季节,苹果树腐烂病从人工接种到扩展为可见病斑（病斑径向扩展5mm）所需的时间不同,其中春季所需时间最短,平均为7.7d;其次是夏季,平均为10.2d;秋季所需时间最长,平均为12.5d。不同季节接种后形成的腐烂病斑在发病后2个月内都会出现一个快速扩展过程,随后病斑停止或缓慢扩展,经2~5个月后,再次出现一个快速扩展过程。无论哪个季节接种形成的病斑,第二个快速扩展期都出现在春季或秋季。

1.2%瑞拉菌素EW对苹果树腐烂病菌的室内毒力测定和田间药效试验

用瑞拉菌素、福美砷两种杀菌剂对苹果树腐烂病病菌进行了室内毒力测定和田间药效试验。结果表明,瑞拉菌素对苹果树腐烂病病菌的抑制作用效果优于福美砷,有效中量ED50分别为28.7、35.6mg/kg;1.2%瑞拉菌素水乳剂的毒力效果是40%福美砷WP的1.24倍;1.2%瑞拉菌素水乳剂涂治后的伤口愈合率为49.94%,明显优于40%福美砷WP的伤口愈合率,其相对防效达到88.17%。