废弃葡萄枝条复配基质栽培果类蔬菜配方筛选

【目的】通过对葡萄枝条堆肥化处理形成复配基质并栽培果类蔬菜,筛选出适合果菜生长发育的最佳基质配方,为废弃葡萄枝条循环利用提供理论依据。【方法】比较发酵后的葡萄枝条、草炭和珍珠岩3者体积比为20∶50∶30(T_(1))、30∶40∶30(T_(2))、40∶30∶30(T_(3))、50∶20∶30(T_(4))和商品基质(CK)的理化性质,测定在不同基质配比下种植3种果菜(黄瓜、茄子、番茄)的生长特性和品质指标,并对各指标进行相关性分析。【结果】不同基质理化性质均在果菜生长发育的适宜范围。与CK相比,黄瓜和茄子的T_(3)产投比差值为0.64和0.38;番茄的T_(4)产投比差值为3.02。典型晴天T_(3)和CK的基质温度日较差分别为6.01℃和5.75℃;典型阴天T_(4)基质平均温度较CK高1.17℃。3种果菜的生长及品质指标与基质特性相关性达到显著或极显著水平,其中黄瓜的生长及品质指标与基质全磷含量相关性最高,茄子与基质电导率(EC)值相关性最高,番茄与基质速效氮相关性最高。【结论】黄瓜和茄子在T_(3)处理下生长发育较好,番茄在T_(4)处理下生长发育较好。T_(3)和T_(4)处理的复配基质可作为废弃葡萄枝条栽培化的推荐配方,为葡萄园废弃物再利用提供新途径。

暖冬气候影响下金华地区桃园蛀果类害虫危害特点及防治策略

近年来受全球温室效应影响,金华地区桃产区普遍呈现暖冬气候特点,对桃园蛀果类害虫为害行为造成了极大影响。本文在对金华地区桃园蛀果类害虫连年调查的基础上,总结暖冬气候条件下蛀果类害虫种类和为害特点,并提出防治策略,以期为浙中地区桃园绿色生产提供参考。

慈溪市乡土树种资源调查研究(Ⅱ)——蓝果和黑果类绿化观赏树种资源与开发利用

对浙江省慈溪市乡土树种进行了调查整理,得到65种(含变种)蓝果和黑果类绿化观赏树种名录,隶属25科39属,其中慈溪新记录16种,隶属9科13属。分析了树种的地理分布、果实颜色、果熟期和果实观赏性等,并以园林观赏、生态防护、滨海盐土造林、断面边坡覆绿、水湿地绿化和其它用途的分类方式,对各树种的用途进行归类研究。最后列举了4种树种的性状和利用价值。

苹果锈果类病毒山东文登峰山分离物的克隆

苹果锈果病又名花脸病或裂果病,是严重影响苹果生产的主要病毒病之一.广泛分布于东北、西北、华北各苹果产区,目前仍有扩大蔓延趋势.其病原物为苹果锈果类病毒（Apple scar skin viroid,ASSVd）,主要侵染苹果和梨,最新研究发现还可侵染桃、杏、樱桃核果类果树.感病苹果因品种和环境条件的变化果实表现为5种病状：锈果型、花脸型、锈果-花脸型、环斑型和绿点型,发病较重的果实发生畸形龟裂,大大降低果品的食用价值和经济价值.对文登峰山地区富士苹果进行ASSVd扩增和克隆,以期明确ASSVd在文登地区富士苹果上的变异情况.

京郊设施果类蔬菜土肥水管理现状及技术需求

北京郊区设施蔬菜发展迅速,通过对京郊集约化设施果类蔬菜生产中土肥水管理现状的调查发现,水肥投入量过大,养分投入比例不合理是主要问题。蔬菜每年用水量为7 500～10 500 m3/hm2,番茄、黄瓜、椒类、茄子总养分(N-P2O5-K2O)投入量分别为1 206-504-782,1 426-735-1 101,1 298-599-915,1 255-631-958 kg/hm2;肥料选用与施肥灌溉技术缺乏指导,50%以上农民不懂如何选择肥料,有机肥的62%来自养殖场或农民自家堆制,68%和26%的农民仍凭经验施肥和灌溉。因水肥管理不当及连作导致土壤线虫病害、土壤板结、酸化、盐渍化等问题普遍,其中,根结线虫障碍的比重最高,占29%,无障碍土壤的比例仅占11%。京郊区土肥水现存问题在于管理和技术条件的制约,水肥管理和土壤质量综合提升技术成果转化与物化有待加强,为此提出开展水肥资源高效利用和土壤质量综合提升技术研发,探讨适合分散经营的技术推广机制与模式的技术需求。

苹果锈果类病毒山东栖霞分离物的分子鉴定及序列分析

本研究以采自山东省栖霞市的两个苹果样品为试验材料,利用二维电泳、斑点杂交、RT-PCR等分子生物学技术对样品中的苹果锈果类病毒(ASSVd)带毒情况进行了检测。结果表明:两个样品均携带ASSVd。对两个样品中的ASSVd进行克隆测序,并利用生物学软件DNAMAN对所得序列进行分析,结果表明:与世界上首次报道的ASSVd序列(X17696)相比,本研究所得到的ASSVd序列变异较小,相对比较保守。

苹果锈果类病毒实时荧光PCR检测方法的建立

【目的】建立苹果锈果类病毒(ASSVd)检测灵敏的方法。【方法】根据Gen Bank中ASSVd的RNA序列设计特异性引物ASSVd-F和ASSVd-R,利用实时荧光PCR方法对其进行检测,并对体系的特异性、灵敏性及适用性进行验证。【结果】实时荧光PCR体系能检测至1×10-6的模板浓度,而常规RT-PCR只能检测至1×10-4,由此可知,实时荧光PCR体系灵敏度高于常规RT-PCR 100倍;引物特异性强,能特异检测ASSVd,对苹果褪绿叶斑病毒(ACLSV)、苹果茎沟病毒(ASGV)、苹果茎痘病毒(ASPV)均不能检出;适用性广,可检测出植物不同部位的ASSVd。【结论】所建立的方法能够灵敏检测ASSVd,特异性强,适用性广。

根层调控:果类蔬菜高效利用养分的关键

集约化设施蔬菜生产中水肥投入远高于作物的需求,生产上为了实现根层充足的水肥供应,导致氮素过量投入、损失比例高、磷钾在土壤中明显积累,生理性缺素日趋严重。优质高效蔬菜生产的关键是在健康良好生长环境下根层合理的水肥供应,在保证作物生长前提下尽量减少不必要的养分损失。本研究总结了实现优质高产高效蔬菜生产的根层养分调控关键,即必须考虑到土壤溶液养分浓度、形态和养分离子间的平衡;减少水分渗漏并保持水分和养分空间一致的原则。结合土壤环境的增温、增施高碳氮比有机肥或秸秆进行土壤调理等措施,促进蔬菜根系发育、提高作物抗性和养分吸收效率,在设施生产中有机肥和化肥养分需采取"总量控制、分期调控",氮素采取"少量多次、近根施用、水肥耦合"原则;磷钾养分采用"作物需求和土壤肥力维持"相结合的总量控制原则,中微量元素"因缺矫正"原则,通过根层调控实现水肥资源的高效利用和设施菜田的可持续发展。

果类蔬菜水溶性肥料配方选择与应用

水溶性肥料具有水溶性好、肥效快、吸收率高等特点,在根系浅、养分需求强度大的果类蔬菜生产中的应用广泛。本文结合果类蔬菜氮、磷、钾等养分吸收比例特征、有机肥供应以及土壤养分积累特点,提出以"作物带走比例"为原则的大配方,并依据土壤肥力特征进行配方调整,制定适合的水溶性肥料追肥配方。针对N在土壤中比较活跃的特征,通过以N素供应为目标推荐,采用固定P、K配比的推荐思路,与灌溉相结合,实现"少量多次"的水肥同步供应,满足作物的生长需求。

新疆桃树上苹果锈果类病毒(ASSVd)的检测与全序列分析

在以往研究苹果和梨ASSVd的基础上,利用RT-PCR技术对新疆的桃树进行了检测,检测过程中首次发现桃树上有ASSVd类病毒的存在,利用RT-PCR技术分别获得了其全长序列,通过回收克隆测序,发现桃树苹果锈果类病毒基因组长为331 nt,将克隆测序结果在GenBank中登录,获得了桃树上的10条ASSVd的序列登录号为:EU031477～EU031486。为快速鉴定桃树苹果锈果类病毒奠定了良好基础。

新疆梨树上苹果锈果类病毒的检测与全序列分析

[目的]检测并分析新疆和静县223团场多年生早熟梨树上的苹果锈果类病毒(ASSVd)。[方法]对采自新疆和静县223团多年生早熟梨的枝条和叶片样品进行RNA抽提,经RT-PCR技术鉴定检测。[结果](1)多年生早熟梨树检测到苹果锈果类病毒,得到2条ASSVd核酸序列(JX861258～JX861259),所得序列与GenBank中已报道的国内外ASSVd序列同源性达86%以上。(2)原位RT-PCR检测进一步表明ASSVd的RNA阳性信号主要位于叶片肉组织的细胞核内。[结论]通过序列分析比对,各寄主上的ASSVd分离物核酸序列变异较小,地域和品种间核酸序列无明显差异。建立了优化的RT-PCR检测及原位RT-PCR检测方法,为果树ASSVd的快速检测奠定了良好的基础。

基于网络平台的果类特色农产品产业链的标准化

笔者介绍了果类特色农产品流通产业链的概念,并以电子商务网络为平台,构建了基于网上交易的果类特色农产品流通的新型产业链。围绕该产业链的生产加工环节、网上展示与交易环节、交易后服务环节遇到的标准化问题,提出了相对应的解决方案:在生产加工环节,应集中规模化种植;因地制宜地采摘和贮存;进行凸显品牌特色的绿色包装;建设果类农产品协会。在网上展示与交易环节,规范平台身份认证,完善认证技术和制度;注重产品展示统一化,信息丰富多元化;加强洽谈的专业化,体现沟通的差别化;定价综合化,参考因素多样化;准入条件法制化,账户管理差别化。在交易后服务环节,要不断拓宽物流业务范围,注重科技投入;以顾客为中心,制定特色服务标准子系统;建立明确的信用评价标准和严格的失信惩罚机制;实施客户关系管理系统,完善监控机制。

苹果锈果类病毒新疆分离物的克隆和序列分析

利用自行设计的方法分离提取总RNA,通过一对特异引物,扩增出苹果锈果类病毒的全长片段,该片段通过回收、克隆和测序,结果发现该片段全长330bp,与已发表的NC_001340同源性为99.7%,仅在第126有一个碱基差异。由此证明该片段是苹果锈果类病毒的全长序列,进一步证明该反应体系能很好地用于苹果锈果类病毒的RT-PCR检测,为快速鉴定类病毒奠定了良好基础。

新疆杏树苹果锈果类病毒的检测与全序列分析

在以往研究苹果锈果类病毒（ASSVd）的基础上，以斑点杂交检测ASSVd呈阳性的杏树为试验材料，利用RT-PCR技术扩增出苹果锈果类病毒全长特异片段，通过回收克隆测序，发现杏树苹果锈果类病毒基因组长为330nt，将克隆测序结果在GenBank中登录，获得10条序列，登录号为EU031487-EU031496。在此基础上，利用原位RT-PCR检测技术，进一步证明杏树叶片中有苹果锈果类病毒存在，主要分布在细胞核中。本研究证实苹果锈果类病毒也能侵染杏树。

应用RT-PCR和斑点杂交法检测新疆梨树上的苹果锈果类病毒

利用自行设计的方法分离提取总RNA,通过一对特异引物,分别扩增出不同梨树品种上苹果锈果类病毒的特异片段,通过对库尔勒香梨品种上获得的特异片段回收、克隆和测序。结果表明,该片段长250bp,与已发表的AF421195同源性为99%,在此基础上利用克隆的ASSVd质粒,通过RT-PCR合成了生物素标记的cDNA探针,利用该探针对梨样品进行了斑点杂交检测,取得了很好的检测效果。进一步证明该反应体系能很好地用于梨树苹果锈果类病毒的RT-PCR检测。

苹果锈果类病毒的几种提取方法及RT-PCR检测灵敏度的比较

以感染苹果锈果类病毒的苹果枝条为材料,利用不同的方法抽提,进行RT-PCR检测。比较了6种RNA的提取方法,结果发现:LiCl法、RNeasy plant mini kit和NA-PEX法检测效果较佳。RNeasy plant mini kit可检测到10-2,NA-PEX可检测到10-1;RNeasy plant mini kit检测效果好于NA-PEX,但价格比较贵,需要研磨;NA-PEX法组织无需液氮研磨,试剂便宜,耗时短,适合检测大批量的样品。

侵染小苹果的苹果锈果类病毒的检测和全序列分析

小苹果是抗寒海棠类与大苹果的杂交后代,因耐寒能力强,口感好,被广泛用于嫁接与育种材料,是我国寒凉苹果产区宝贵的种质资源。苹果锈果类病毒(Apple scar skin viroid,ASSVd)侵染苹果后引起果实表面产生锈状斑、花脸、畸形等症状,严重降低果实品质和市场价值。2013年在调查苹果病毒病时发现北京市延庆县种植的小苹果表现出典型畸形症状,应用RT-PCR方法对其进行检测后经测序和序列分析表明,小苹果被苹果锈果类病毒侵染。克隆此分离物(ASSVd-YQ)全基因组序列,分析后得到其基因组全长为329个核苷酸,系统发育分析表明该分离物与来自不同国家和地区的ASSVd分离物间的进化关系极近。二级结构预测表明,该分离物的中央保守区与末端保守区与ASSVd参考序列相同。这是对侵染小苹果的ASSVd的首次检测和鉴定。

梨树组织中的苹果锈果类病毒原位RT-PCR检测

利用自行设计的方法分离提取总RNA,通过一对特异引物,分别扩增出不同梨树品种上苹果锈果类病毒(ASSVd)的特异片段,经由回收、克隆和测序,有10条序列已在GenBank(EU031467-EU031476)登录,利用克隆的ASSVd质粒,通过RT-PCR合成了生物素标记的cDNA探针,建立了斑点杂交检测技术。在此基础上以已知带有苹果锈果类病毒的库尔勒香梨和无类病毒梨树叶片为材料,利用DIG标记,研究了梨树类病毒的叶片石蜡切片IS-RT-PCR检测技术。包括SuperScriptⅡ浓度、4种碱基混合物(dNTPs)、RNA酶抑制剂(RNasin)及互补引物浓度对cDNA合成的影响,退火温度、LA Taq DNA聚合酶、Mg2+、引物浓度及循环次数对原位PCR效果的影响。研究结果表明:RNasin的用量大于0.2U/μL时,信号强度随着RNasin量的加大而增强;只有当dNTPs浓度达0.4mmol/L时才能生成一定量的cDNA;SuperScriptⅡ浓度在0.5￣1.3U/μL均可进行正常的逆转录,而且在该范围内产物的量随SuperScriptⅡ浓度提高而增多;引物浓度达到0.9μmol/L以上时才能进行有效的逆转录,并且生成的cDNA的量随引物浓度增大而增加。原位扩增ASSVd的cDNA适合退火温度为62℃。循环30￣35次可出现较强的蓝色信号,引物浓度在0.8￣1.2μmol/L时显色较好;LA Taq酶浓度为0.004U/μL以上,均显示较深的蓝色;Mg2+浓度为1.5mmol/L就可满足原位PCR所需。

苹果凹果类病毒(ADFVd)的检测与序列分析

采集新疆焉耆地区的老果园的苹果树枝条、叶片和韧皮部,利用自行设计的方法提取总RNA,根据GenBank中的X99487序列设计引物,利用RT-PCR技术扩增出苹果凹果类病毒(ADFVd)特异条带,通过回收克隆测序,结果表明,获得的7条序列,有5条同源性很高,均在98%以上,另外2条的同源性只有85%左右,这7条序列均已在GenBank中登录(登录号:EU031497_EU031503)。在此基础上利用插入ADFVd目的DNA的质粒为模板,成功合成了地高辛标记的cDNA探针,该探针能很好地用于ADFVd的检测。同时利用原位RT-PCR技术,做了进一步检测,证明苹果叶片中有苹果凹果类病毒存在,主要分布在叶肉细胞的细胞核中。