超高压对果胶聚半乳糖醛酸酶的影响

研究测定了超高压 (4 0 0MPa以下 )对果胶半乳糖醛酸酶PG的影响 .从pH值、温度、加压时间、酶活力再生情况等几方面对PG酶的影响作了探讨 ,随压力升高 ,加压时间延长 ,酶活力下降 .经 4 0 0MPa,30min处理 ,下降约三分之一 ;经超高压处理后酶活力不会再生 .

澳新拟批准来自转基因米曲霉的多聚半乳糖醛酸酶和果胶酯酶作为加工助剂

2021年11月19日,澳新食品标准局发布180-21号通知,其中A1240号和A1241号申请,申请将来自转基因米曲霉的多聚半乳糖醛酸酶(Polygalacturonase enzyme)和果胶酯酶(Pectin esterase enzyme)作为加工助剂。据通知,该多聚半乳糖醛酸酶和果胶酯酶用于水果和蔬菜汁/产品制造、咖啡加工、调味品生产和葡萄酒的生产中。

黑曲霉果胶裂解酶和聚半乳糖醛酸酶合成的发酵调控

通过对黑曲霉(Aspergillus niger)wz 003液态发酵过程的调控,制备了高活性的果胶裂解酶,并讨论了发酵过程中聚半乳糖醛酸酶活力的变化情况。实验表明,发酵产酶培养基组成为(g/L):麸皮60,玉米粉40,酵母膏20,胡萝卜12,CaCO_3 10。培养条件为:初始pH 6.5,30℃,接种量8%,培养2 d。此时果胶裂解酶活力为375.3 U/mL,为基础条件下的6.225倍,而聚半乳糖醛酸酶的合成得到了有效控制,酶活仅为29.4 U/mL。改变发酵条件,有利于聚半乳糖醛酸酶的发酵生产,此时酶活力为基础条件下的5.05倍。

Ⅱ型鼠李半乳糖醛酸聚糖的制备方法和结构表征的研究进展

Ⅱ型鼠李半乳糖醛酸聚糖(RG-Ⅱ)是果胶结构域中的一种,其结构在不同物种之间具有高度的保守性。RG-Ⅱ的主链由约9个半乳糖醛酸经α-1,4糖苷键连接而成,并被6个(A–F)明确定义的侧链取代。其中二糖侧链C、D和单糖侧链E、F的结构在不同来源的RG-Ⅱ中基本保持相同。寡糖侧链A和B则存在轻微的变异性。通过相对分子质量、单糖组成和质谱分析等手段可实现RG-Ⅱ的结构表征。中药中含有RG-Ⅱ结构域的多糖具有很高的药用价值,使用内切多聚半乳糖醛酸酶(Endo-PG)和草酸青霉可将RG-Ⅱ从中药中分离并对其在多糖中的含量进行测定。从葡萄酒中可快速制备大量RG-Ⅱ标准品用于新定量方法的开发,实现对中药活性多糖的质量控制,推动中药多糖的研究进程。

苹果树腐烂病菌多聚半乳糖醛酸酶基因Vmpg7和Vmpg8的功能

【目的】前期转录组分析表明苹果树腐烂病菌(Valsa mali)两个多聚半乳糖醛酸酶(polygalacturonase,PG)基因Vmpg7和Vmpg8在病菌侵染定殖过程中显著上调表达。论文旨在分析Vmpg7和Vmpg8在病菌营养生长、致病力、果胶酶活性、对果胶的利用等方面的作用及基因双敲除对同家族内其他基因表达水平的影响,明确Vmpg7和Vmpg8在病菌致病过程中的生物学功能,为进一步解析苹果树腐烂病菌致病分子机理提供基础。【方法】通过q RT-PCR检测基因在病菌侵染过程中的表达水平及基因双敲除后PG家族内其他PG基因的表达量;利用double-joint PCR构建基因敲除载体并通过PEG介导的原生质体转化技术进行基因敲除,经4对引物PCR检测及Southern blot验证获得基因单敲除和双敲除突变体,并利用gap-repair技术对基因进行回复;利用PDA培养基常规培养法观察突变体营养生长状况;通过离体接种富士苹果叶片及枝条的方法检测基因缺失对病菌致病力的影响;通过3,5-二硝基水杨酸(DNS)比色法检测各突变体胞外果胶酶活性;利用Czapek培养基培养法分析突变体对果胶的利用情况。【结果】q RT-PCR分析表明,Vmpg7和Vmpg8在病菌侵染3 d后分别上调表达27.73和8.19倍。通过基因敲除技术,分别获得3个Vmpg7基因单敲除突变体、1个Vmpg8基因单敲除突变体和3个Vmpg7/Vmpg8基因双敲除突变体,并获得了Vmpg7和Vmpg8单敲除突变体的回复突变体。将突变体接种到PDA培养基上,菌落形态和生长速率均没有发生变化;接种到苹果叶片和枝条上,Vmpg7单敲除突变体及Vmpg7/Vmpg8双敲除突变体在叶片和枝条上的致病力显著降低,而Vmpg8单敲除突变体在叶片上的致病力显著降低;进一步对果胶酶活性及对果胶的利用分析,发现Vmpg8单敲除突变体及Vmpg7/Vmpg8双敲除突变体胞外果胶酶活性均显著降低,且所有突变体在果胶培养基上生长均明显减慢。此外,基因回复后突变体的致病力、果胶酶活性及在果胶上的生长速率均回复到野生型菌株03-8水平。重要的是,Vmpg7/Vmpg8双敲除后影响了PG家族中其他PG基因的表达水平,3个基因显著上调表达。【结论】多聚半乳糖醛酸酶基因Vmpg7和Vmpg8可能与同家族内其他基因协同作用,通过调节果胶酶活性参与苹果树腐烂病菌致病过程。

聚半乳糖醛酸酶高产菌的筛选及产酶条件研究

从腐烂的苹果中定向分离筛选出适合液态发酵法生产聚半乳糖醛酸酶的菌株YL-9,鉴定为扩展青霉(Penicillium expansum-Link)。经摇瓶产酶试验可知,此菌株的产酶培养基组成为:果胶0.7%,NaNO30.1%,MgSO40.02%,FeSO40.001%,KH2PO40.03%,豆粉1.0%,马铃薯20.0%;发酵条件为培养温度28℃,初始pH7.0,装液量50mL/250mL,接种量7%(v/v),培养时间48h。该条件下,酶活力达8.52U/mL。

皮落青霉产聚半乳糖醛酸酶酶学性质及其应用研究

聚半乳糖醛酸酶是水解果胶主要成分聚半乳糖醛酸的水解酶,具有广泛应用.本研究从柑桔果园土壤中筛选得到一株产聚半乳糖醛酸酶(PG)的菌株GYS-6,经鉴定为皮落青霉(Penicillium crustosum).以聚半乳糖醛酸酶活力为指标,单因素试验优化聚半乳糖醛酸酶酶活可达3.59 U/mL;该酶最适温度为45℃,最适pH值为5.0,在pH值2.2~8.0稳定30 min酶活达80%以上,具有较强的耐酸性.K^(+),Na^(+),Mg^(2+),Ba^(2+),Fe^(2+),Zn^(2+),Mn^(2+)离子对酶有一定激活作用,Cu^(2+),Co^(2+),Pb^(2+),Al^(3+)离子对该酶有抑制作用.硫酸铵分级沉淀在60%~80%段酶活最高;经十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)及酶谱分析,该聚半乳糖醛酸酶活性部分分子量主要分布在48 kDa左右;薄层色谱和高效液相色谱分析结果显示该酶酶解果胶可以高效制备果胶低聚糖.

黑曲霉SL2-111聚半乳糖醛酸酶的纯化和特性

通过硫酸铵分级沉淀、Sephcryl S-200分子筛柱层析、DEAE Sepharose Fast Flow阴离子交换柱层析3个步骤,从黑曲霉SL2-111发酵的果胶酶粗品中纯化出一种电泳纯的聚半乳糖醛酸酶.经SDS-PAGE测定其相对分子质量约为71.5 ku.最适pH值和最适温度分别为3.0和65℃.在50℃以下,pH值2.6～5.4之间酶活力相对稳定.浓度为5 mmol/L的Ca2+、Li+、Cu2+、Mg2+、K+对酶活力有激活作用;而Mn2+和Ag+具有抑制作用.

山楂果胶低聚半乳糖醛酸提取物对中波紫外线辐射HaCaT细胞氧化损伤和光老化的保护作用

探讨了山楂果胶低聚半乳糖醛酸提取物对中波紫外线(ultraviolet B,UVB)辐射后人永生化表皮角质形成细胞(HaCaT)的氧化损伤和光老化的保护作用。体外培养HaCaT细胞,分为对照组(HaCaT细胞不照射UVB,不给予山楂果胶低聚半乳糖醛酸提取物处理)、UVB辐射组(30 mJ/cm^2)、低剂量(5μg/mL)山楂果胶低聚半乳糖醛酸+30 mJ/cm^2 UVB辐射组、高剂量(10μg/mL)山楂果胶低聚半乳糖醛酸+30 mJ/cm^2 UVB辐射组。以噻唑蓝比色法检测细胞活力,采用试剂盒检测超氧化物歧化酶(superoxide dismulase,SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)、过氧化氢酶(catalase,CAT)和乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)活力,丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量,羟脯氨酸(hydroxyproline,Hyp)质量浓度和活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平。采用酶联免疫吸附测定实验检测肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor alpha,TNF-α)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)质量浓度和基质金属蛋白酶-1(matrix metalloproteinase 1,MMP-1)含量。结果表明,经UVB照射后,Ha Ca T细胞活力明显降低。低、高剂量的山楂果胶低聚半乳糖醛酸提取物对经UVB辐射的HaCaT细胞具有显著的增殖作用(P<0.05);SOD、GSH-Px、CAT活力增加;LDH活力、ROS水平和MDA含量下降;Hyp质量浓度增加;MMP-1含量和TNF-α、IL-6质量浓度下降,且与辐射组比较均具有显著或极显著差异(P<0.05或P<0.01)。实时荧光定量聚合酶链式反应检测MMP-1、TNF-α及IL-6 m RNA表达水平与其含量或质量浓度检测结果一致。因此,山楂果胶低聚半乳糖醛酸对UVB辐射Ha Ca T细胞的氧化损伤及光老化具有保护作用。

聚半乳糖醛酸酶（PG2）中色氨酸残基的化学修饰

用化学修饰法以Ｎ－溴代琥珀酰亚胺作修饰剂，对聚半乳糖醛酸酶（ＰＧ２）中色氨酸（Ｔｒｐ）残基与酶活性的关系进行研究，发现１个ＰＧ２分子中有６个Ｔｒｐ残基，其中４个位于酶分子内部，２个位于酶分子表面。该发现通过表面荧光猝灭实验得到进一步证明。酶分子表面的２个Ｔｒｐ残基中，有１个为活性必需的氨基酸，它的修饰导致大部分酶活力丧失。底物保护实验进一步证明该活性必需的Ｔｒｐ可能位于酶的活性部位。酶被修饰后其圆二色谱及荧光光谱发生了变化。

乙醇对聚半乳糖醛酸酶的活力及荧光光谱、CD光谱的影响

乙醇对PG短时间（不超过36h）的作用可使PG激活，最佳的作用时间是24h，否则乙醇导致PG失活。同时测得乙醇的浓度直接影响PG的活力。在作用时间为24h时，在20％乙醇浓度下，酶的活力最高。乙醇的作用时间及其浓度均影响PG的荧光光谱和CD光谱。这些光谱的变化与酶的活力变化显示了一致性。

真菌多聚半乳糖醛酸酶的研究进展

真菌多聚半乳糖醛酸酶是植物细胞壁果胶的主要降解酶之一,是植物病原真菌的重要致病因子。综述了多聚半乳糖醛酸酶的特性、多聚半乳糖醛酸酶基因及其特征、多聚半乳糖醛酸酶的分子进化、多聚半乳糖醛酸酶的表达调控及其在真菌致病过程中的作用。

聚半乳糖醛酸酶高产菌的产酶条件研究

通过单因素及正交试验对米曲霉 (Aspergillusoryza)C4 91产生聚半乳糖醛酸酶的发酵条件进行了优化。该菌株的摇床发酵滤液以桔子果胶为底物时酶活力可达 3443.8U/mL。产酶最适培养基组成为 :麦芽汁 (糖度 6 % )中添加 6 %桔皮粉 ,2 %硫酸铵 (w/v)。最适培养条件为 :起始pH 4 (灭菌前 ) ,30℃ ,2 5 0r/min ,培养 112h。Tween 80可以促进C 4

紫外-氯化锂复合诱变选育聚半乳糖醛酸酶高产菌株

[目的]研究聚半乳糖醛酸酶高产菌株的复合诱变条件。[方法]黑曲霉孢子经紫外线辐射2 min后,涂布于含0.8%LiCl的培养基上培养,经初筛和复筛后测定聚半乳糖醛酸酶活力。[结果]获得1株产聚半乳糖醛酸酶活力为10.450万U/ml的菌株,产酶活力比出发菌株提高了60.77%。[结论]产聚半乳糖醛酸酶的黑曲霉经紫外线辐射2 min、0.8%LiCl复合诱变后,产酶活力提高了60.77%。

猕猴桃采后不同部位淀粉酶和多聚半乳糖醛酸酶活性的变化

猕猴桃采后不同部位淀粉酶和多聚半乳糖醛酸酶活性的变化贺军民佘小平王仲田李忠歧（陕西师范大学生命科学学院，西安７１００６２；第一作者，男，３１岁，讲师）在许多果实的软化过程中，果实不同部位软化速度往往表现不同，猕猴桃也是如此．猕猴桃采后软化时，果肉软化...

聚半乳糖醛酸内切酶研究进展

论述了聚半乳糖醛酸内切酶的微生物分布、发酵机理和酶学性质、酶的固定化以及其分子生物学的研究进展。

黑曲霉内切聚半乳糖醛酸酶A基因在大肠杆菌中的表达及产物酶学性质研究

采用Trizol法提取黑曲霉(Aspergillus niger JL-15)的总RNA,RT-PCR扩增到黑曲霉内切聚半乳糖醛酸酶A基因(pgaA),pgaA全长1113bp,编码370个氨基酸残基.pgaA经EcoRI和NotI双酶切,定向插入到表达载体pET-32a(+)中,并转化Escherichia coli Rosetta-gami B(DE3),重组子经IPTG诱导,其表达产物(rePGA)果胶酶活性最高为637.0U/mg.酶学性质研究表明,rePGA的最适温度为60℃,热稳定性较差,最适pH为pH 5.0;Ca2+对其活性具有显著促进作用,而Fe3+和Mg2+对其活性具有显著抑制作用;SDS-PGAE结果表明,rePGA的相对分子质量约为40 500Da;rePGA的米氏常数(Km)和最大反应速度(Vmax)分别为4.05mg/mL和39.37μmol/(mL.min),rePGA能快速降低果胶溶液的粘度,符合其内切作用模式特点.

一株高产碱性内切聚半乳糖醛酸酶生产菌的筛选与鉴定

从碱性土样中经分离筛选得到1株固态发酵产碱性内切聚半乳糖醛酸酶活力较高的菌株。经提酶条件优化得到较优的酶液提取提条件为30倍Na2CO3/NaHCO3缓冲液提取1 h。从形态特征、培养特征、生理生化特征以及分子生物学鉴定结果来看,该菌株属B.gibsonii。

两种类型聚半乳糖醛酸酶的提纯及性质

黑曲霉(AspergilluS niger)AS 3.3883所产果胶酶经DEAE Sephadex A50及Sephadex G100柱层析分离出电泳纯的两种聚半乳糖醛酸酶(PG1,PG2),并对它们的性质及结构进行了比较研究。结果证明两种酶作用的最适条件、动力学性质、分子量、氨基酸组成及金属离子对酶活力影响等方面有很大差异,但二者的每个摩尔的活力及酶的构象很相似。

黑曲霉SL2-111固态发酵生产聚半乳糖醛酸酶

以麸皮为主要原料,采用黑曲霉(Aspergillusniger) 诱变菌株SL2 111进行聚半乳糖醛酸酶固态发酵,培养物最高酶活力可达到2 6 95U/g(鲜曲)。产酶最适培养基为:麸皮15 g ,柚皮粉1 5 g ,(NH4) 2 SO40 8g ,Ca Cl2 0 0 75g。最佳产酶条件为:2 8℃,pH6 0 ,培养72h。成曲的最佳浸提条件为:以0 1mol/L ,pH4 0柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液为浸提剂,在30℃下浸提5h。