长链非编码RNA PCGEM1通过转化生长因子β2/果蝇母源抗皮肤生长因子蛋白2信号通路调控膀胱尿路上皮癌细胞侵袭和转移的研究

目的 探讨长链非编码RNA PCGEM1(LncRNA PCGEM1)通过转化生长因子β2/果蝇母源抗皮肤生长因子蛋白2(TGF-β2/Smad2)信号通路调控膀胱尿路上皮癌(BUCC)细胞侵袭和转移。方法 将BUCC细胞分为空白对照组、T24-siNC组和T24-siPCGEM1组。空白对照组置于10%胎牛血清的DMEM培养基中进行培养;T24-siPCGEM1组和T24-siNC组分别用Lipofectamine 2000将10μmol·L^(-1)的siPCGEM1和阴性对照siNC转染至细胞,然后置于10%胎牛血清的DMEM培养基中进行培养。用实时荧光定量聚合酶链反应检测LncRNA PCGEM1的表达水平,用平板克隆实验检测细胞增殖情况,用蛋白质印迹法检测TGF-β2和Smad2的表达情况。结果 T24-siPCGEM1组、T24-siNC组和空白对照组的细胞克隆数分别为(192.83±15.59),(419.00±52.15)和(432.83±57.74)个,TGF-β2相对表达量分别为0.08±0.01,0.39±0.05和0.41±0.05,Smad 2相对表达量分别为0.10±0.03,0.58±0.03和0.59±0.03,T24-siPCGEM1组的上述指标与空白对照组和T24-siNC组相比,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论 LncRNA PCGEM1可能通过激活TGF-β2/Smad2信号通路,从而促进BUCC的进展。

肾气丸对肾间质纤维化大鼠肾组织TGF-β1/Smad3信号通路及AngⅡ表达的影响

目的探讨肾气丸对肾间质纤维化大鼠肾组织转化生长因子(TGF)-β1/果蝇抗生物皮肤生长因子蛋白家族(Smad)3信号及血管紧张素(Ang)Ⅱ表达的影响。方法SD大鼠分为正常组、模型组、实验组、过表达组,其中模型组、实验组、过表达组每日以250 mg/kg的腺嘌呤生理盐水混悬液进行灌胃处理造模,每日1次,连续12 d后,更换为每两日1次,连续12 d,造模周期共24 d,正常组以等剂量的生理盐水进行灌胃;实验组每日尾静脉注射5×10^(9) pfu/ml的pcDNA3.1-TGF-β1-NC,并且以10 g/kg的肾气丸进行灌胃处理;过表达组每日尾静脉注射5×10^(9) pfu/ml pc DNA3.1-TGF-β1,并且以10 g/kg的肾气丸进行灌胃处理;模型组和正常组每日尾静脉注射5×10^(9) pfu/ml的pcDNA3.1-TGF-β1-NC并以生理盐水进行灌胃处理。酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组大鼠血清血肌酐(Scr)和血尿素氮(BUN)的含量,免疫组化检测各组α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和Ⅳ型胶原蛋白(ColⅣ)的表达,Western印迹法检测肾组织中AngⅡ、TGF-β1、p-Smad3的表达水平。结果与正常组相比,模型组、实验组、过表达组血清中Scr和BUN的含量、α-SMA和ColⅣ的阳性细胞比例及AngⅡ、TGF-β1、p-Smad3的表达明显升高(均P<0.05);与模型组相比,实验组、过表达组血清中Scr和BUN的含量、α-SMA和ColⅣ的阳性细胞比例及AngⅡ、TGF-β1、p-Smad3的表达明显降低(均P<0.05);与实验组相比,过表达组血清中Scr和BUN的含量、α-SMA和ColⅣ的阳性细胞比例及AngⅡ、TGF-β1、p-Smad3的表达明显升高(均P<0.05)。结论肾气丸能减轻肾间质纤维化大鼠肾组织的病理损伤,改善其肾功能,这与抑制TGF-β1/Smad3信号的激活有关。

褐藻聚合酚下调TGF-β_(1)/Smads信号通路抑制大肠癌细胞增殖与侵袭

目的探讨褐藻聚合酚(PFFE-A)对大肠癌细胞增殖与侵袭的影响,以及其对转化生长因子β_(1)(TGF-β_(1))及母体抗生物皮肤生长因子同源物2/3(Smad2/3)通路的调控作用。方法细胞分组:依次以50、100、150μmol·L-1的小、中、大剂量的PFFE-A干预细胞,另设立正常对照组细胞。5-乙炔基-2'脱氧尿苷(EdU)染色检测细胞的增殖;Transwell小室检测细胞的侵袭能力;异种种植结肠癌裸鼠模型检测细胞的体内生长与转移能力;实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测细胞中上皮间质转化(EMT)相关基因的表达;Western blotting检测细胞中TGF-β_(1)、p-Smad2/3的表达水平。结果与正常对照组比较,PFFE-A小、中、大剂量组细胞的增殖率、侵袭细胞数、肿瘤瘤体质量、病灶转移比例、神经型钙黏附蛋白(N-cadherin)的mRNA的表达、TGF-β_(1)和p-Smad2/3的表达明显下降(P<0.05),E-钙黏蛋白(E-cadherin)的mRNA的表达明显升高(P<0.05),具有明显的剂量依赖性(P<0.05)。结论PFFE-A能抑制肿瘤细胞的EMT过程,抑制大肠癌细胞HT29的体外增殖与侵袭能力,下调其体内生长与转移的能力,这可能是通过下调TGF-β_(1)/Smads信号实现的。

柴胡皂甙D通过调控TGF-β1/Smads信号通路抑制人胚肺成纤维细胞增殖和胶原蛋白产生

目的研究柴胡皂甙D(SSD)对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的人胚肺成纤维细胞(HELF)增殖、转分化以及TGF-β1/果蝇抗生物皮肤生长因子蛋白家族(Smads)信号通路的影响。方法体外培养HELF,设立正常对照组、 1 ng/mL TGF-β1处理组、 1 ng/mL TGF-β1联合0.5μmol/L SSD处理组、 1 ng/mL TGF-β1联合1μmol/L SSD处理组、 1 ng/mL TGF-β1联合2μmol/L SSD处理组。采用CCK-8法检测HELF的增殖情况,荧光定量PCR法检测Smad2、 Smad3、 Smad7的mRNA水平, Western blot法检测α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、 1型胶原蛋白(Col1)、 Smad2、 Smad3、磷酸化的Smad2(p-Smad2)、 p-Smad3、 Smad7的蛋白水平。结果与正常对照组比较, TGF-β1处理组细胞增殖明显, Col1、α-SMA蛋白水平增加, Smad2和Smad3 mRNA和蛋白磷酸化水平显著增加, Smad7 mRNA和蛋白水平显著降低;与TGF-β1处理组比较,不同浓度SSD处理组细胞增殖降低,可逆转以上各指标的改变,呈一定的量效关系。结论 SSD通过调控TGF-β1/Smads信号通路,发挥抗肺纤维化的作用。

神经酰胺合成酶3通过SMAD6基因影响肝细胞癌的侵袭和转移

目的:由于缺乏早期诊断和有效治疗,肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)患者预后较差。因此迫切需要更好地了解HCC相关的分子机制,并确定早期诊断和治疗的有效靶点。本研究旨在探讨神经酰胺合成酶3(ceramide synthase 3,CerS3)在HCC中的表达及其生物学作用。方法:收集深圳市人民医院159例HCC接受根治性切除术患者的临床标本,包括HCC组织和邻近非肿瘤组织。采用免疫组织化学染色、蛋白印迹法和real-time PCR检测CerS3在HCC组织和邻近非肿瘤组织中的表达。体外实验中,将Hep3B细胞分为载体对照组和CerS3载体组,并分别用含有cDNA对照或CerS3 cDNA的反转录病毒载体转染细胞;将HCC LM3细胞分为shRNA对照组或CerS3 shRNA组,并分别用含有shRNA对照或CerS3 shRNA慢病毒载体转染细胞。分别采用MTT、EdU、Transwell和划痕试验测定细胞的增殖、迁移和侵袭,并进行RNA测序以确定CerS3的下游信号。结果:与相应的相邻非肿瘤组织相比,HCC组织中CerS3 mRNA和蛋白质水平均升高(均P<0.05)。Cox回归生存模型的单变量和多变量分析显示:静脉浸润(95%CI:1.8~9.2,P<0.01)、TNM分期(95%CI:2.3~5.2,P<0.05)、组织学分级差(95%CI:1.4~6.8,P<0.05)和CerS3(95%CI:1.5~3.9,P<0.05)与HCC患者总生存率显著相关。此外,与肿瘤组织中CerS3低表达患者相比,CerS3高表达患者的总生存率显著缩短(P<0.05)。与载体对照组相比,CerS3载体组Hep3B细胞活力、EdU阳性细胞数、迁移和侵袭细胞数均显著增加(均P<0.05)。与shRNA对照组相比,CerS3 shRNA组HCC LM3细胞活力、EdU阳性细胞数、迁移和侵袭细胞数均显著降低(均P<0.05)。RNA测序将母体抗生物皮肤生长因子同源物6(small mothers against decapentaplegic family member 6,SMAD6)基因鉴定为促进HCC转移的致癌基因。结论:CerS3的过度表达与不良临床特征和不良预后密切相关。CerS3在功能上可通过激活SMAD6基因参与肝癌细胞的增殖、侵袭和转移。

盐酸氨溴索基于AE-IPF TGF-β1/smads信号通路对大鼠气管黏膜的保护作用

目的探究盐酸氨溴索基于转化生长因子-β1(TGF-β1)/果蝇抗生物皮肤生长因子蛋白家族(Smads)信号通路对特发性肺纤维化急性加重(AE-IPF)大鼠气管黏膜的保护作用。方法选取50只SPF级健康成年雄性大鼠,随机选取10只分为正常组,剩余40只建立AE-IPF模型大鼠,分为模型组、盐酸氨溴索低、中、高剂量组,每组10只。采用Western-blotting法检测紧密连接蛋白ZO-1(ZO-1)、多药耐药相关蛋白1(MRP1)、TGF-β1、smads蛋白水平。结果与正常组比较,模型组、盐酸氨溴索低、中、高剂量组支气管平滑肌厚度增加(P<0.05)ZO-1、MRP1蛋白水平降低(P<0.05),MMP-2、TIMP-1水平及TGF-β1、smads蛋白水平升高(P<0.05);与模型组比较,盐酸氨溴索低、中、高剂量组支气管黏膜受损面积、支气管平滑肌厚度减少(P<0.05),ZO-1、MRP1蛋白水平升高(P<0.05),MMP-2、TIMP-1水平及TGF-β1、smads蛋白水平降低(P<0.05);与盐酸氨溴索低剂量组比较,盐酸氨溴索中、高剂量组支气管黏膜受损面积、支气管平滑肌厚度减少(P<0.05),ZO-1、MRP1蛋白水平升高(P<0.05),MMP-2、TIMP-1水平及TGF-β1、smads蛋白水平降低(P<0.05);与盐酸氨溴索中剂量组比较,盐酸氨溴索高剂量组支气管黏膜受损面积、支气管平滑肌厚度减少(P<0.05)ZO-1、MRP1蛋白水平升高(P<0.05),MMP-2、TIMP-1水平及TGF-β1、smads蛋白水平降低(P<0.05)。结论盐酸氨溴索基于TGF-β1/smads信号通路对AE-IPF大鼠气管黏膜具有保护作用,从而改善大鼠肺纤维化。

SMAD基因家族PCR引物设计及其在非小细胞肺癌中的表达

目的自行设计并验证SMAD基因家族PCR引物,探讨应用上述引物进行RT-PCR检测SMAD基因在非小细胞肺癌中表达的可行性。方法自主设计并验证SMAD基因家族SMAD1~SMAD8特异引物,确定SMAD1-1、SMAD2-1、SMAD3-1、SMAD4-2、SMAD5-1、SMAD6-1、SMAD7-1、SMAD8-2引物的扩增效率更高、特异性更强。采用RT-PCR技术检测SMAD1~SMAD8在人正常支气管上皮细胞系BEAS-2B,肺腺癌细胞系A549、H1299,肺鳞癌细胞系SK-MES-1中的表达变化,引物为SMAD1-1、SMAD2-1、SMAD3-1、SMAD4-2、SMAD5-1、SMAD6-1、SMAD7-1、SMAD8-2。结果以正常支气管上皮BEAS-2B细胞中SMAD1表达量为基准(校正RQ约为1),SMAD2相对表达量为6.590±0.459、SMAD3为10.977±0.312、SMAD4为4.651±0.115、SMAD5为16.762±0.389、SMAD6为3.248±0.108、SMAD7为2.007±0.012、SMAD8为1.144±0.103,均较SMAD1表达升高,其中SMAD5表达最高,SMAD3次之。SMAD2、SMAD4、SMAD5、SMAD6、SMAD7、SMAD8在肺腺癌A549、H1299细胞及肺鳞癌SK-MES-1细胞中的表达均低于人正常支气管上皮BEAS-2B细胞;在H1299、SK-MES-1细胞中SMAD1表达高于BEAS-2B和A549细胞,且在A549细胞中SMAD1表达低于BEAS-2B细胞;在SK-MES-1细胞中SMAD3表达升高,且在H1299、A549细胞中SMAD3表达较BEAS-2B细胞下降;在H1299细胞中SMAD2、SMAD6、SMAD7表较其他三种细胞均下降;各细胞间比较P<0.05或<0.01。结论成功自主设计SMAD基因家族特异引物,并用于检测非小细胞肺癌中SMAD基因表达;SMAD5可能参与了肺癌的发生、发展,SMAD3可能与上皮相关性疾病相关。

左卡尼汀对糖尿病肾病维持性血液透析患者的肾保护作用研究

目的 基于转化生子因子β1(TGF-β1)/果蝇母源抗皮肤生长因子蛋白(Smad)通路分析左卡尼汀对糖尿病肾病(DKD)维持性血液透析(MHD)患者的肾保护作用。方法 回顾性队列分析进行MHD治疗的DKD患者的临床资料,将患者分为对照组和试验组。对照组进行低分子肝素抗凝等常规对症治疗,试验组在常规对症处理的基础上联合左卡尼汀治疗。观察2组DKD患者治疗前及治疗3个月后肾功能[血肌酸酐(Scr)、β_(2)微球蛋白(β_(2)-MG)、尿素氮(BUN)]、炎症状态[C反应蛋白(CRP)、白细胞介素17(IL-17)、白细胞介素6(IL-6)]、脂代谢[脂蛋白a(Lp-a)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、三酰甘油(TG)]、TGF-β1/Smad通路(TGF-β1、Smad4、Smad7)变化情况,并记录治疗期间药物不良反应发生情况。结果 对照组38例,试验组44例。试验组与对照组患者治疗3个月后Scr分别为(198.26±18.33)和(254.19±21.08)μmol·L^(-1),β_(2)-MG为(15.22±3.09)和(21.69±4.20)mg·L^(-1),BUN分别为(15.32±3.11)和(19.67±3.79)mmol·L^(-1),CRP分别为(6.48±1.27)和(7.44±1.39)mg·L^(-1),IL-17分别为(8.78±1.45)和(10.23±1.98)pg·mL^(-1),IL-6分别为(43.28±7.01)和(50.32±8.24)pg·mL^(-1),Lp-a分别为(220.71±28.37)和(249.63±32.40)mg·L^(-1),TG分别为(1.52±0.31)和(1.72±0.34)mmol·L^(-1),HDL-C分别为(1.20±0.16)和(1.12±0.14)mmol·L^(-1),在统计学上差异均有统计学意义(均P<0.05)。试验组患者治疗3个月后TGF-β1、Smad4、Smad7 mRNA相对表达水平分别为1.45±0.31、1.55±0.33和2.03±0.41,对照组分别为1.80±0.33、1.86±0.35和1.55±0.33,在统计学上差异均有统计学意义(均P<0.05)。试验组和对照组治疗期间药物不良反应发生率分别为2.27%和0,在统计学上差异无统计学意义(P>0.05)。结论 左卡尼汀用于DKD患者MHD治疗,可减轻炎症水平、改善脂代谢,调节TGF-β1/Smad通路,具有保护肾功能的作用。

牛初乳的生物活性物质及其应用

牛初乳是奶牛正常分娩后最初几天内所分泌的乳汁,其无论是在营养素方面还是在免疫组成上均与常乳存在极大差别。牛初乳中除了含有常乳中所具有的蛋白质、碳水化合物、脂肪、维生素和矿物质外,还含有在常乳中根本不存在的或者是含量极微的寡糖、生长因子、抗微生物化合物和免疫调控物质。这些大量的营养素、生长因子和免疫调控物质可以为免疫系统还不成熟的新生仔畜提供被动免疫,也有利于新生仔畜消化道或其他组织的生长和免疫成熟。

胫骨平台骨折术后感染危险因素与TGF-β1/Smad4和Th17/Treg水平

目的分析胫骨平台骨折术后感染危险因素及转化生长因子-β1(TGF-β1)/果蝇抗生物皮肤生长因子蛋白4(Smad4)信号通路及辅助性T细胞17(Th17)/调节性T细胞(Treg)水平的变化。方法回顾性分析2017年3月-2022年3月苏州市第九人民医院收治的102例胫骨平台骨折术后切口红肿、渗出患者临床资料,根据切口渗出物病原菌培养情况分为感染组35例与未感染组67例,记录切口渗出物病原菌情况,采用非条件Logistic回归分析评估影响胫骨平台骨折术后切口感染的危险因素;在患者出现红肿等感染征象时采集次日空腹外周静脉血,比较两组外周血TGF-β1、Smad4、Smad7表达水平及Th17、Treg、Th17/Treg比值。结果102例胫骨平台骨折术后切口红肿、渗出患者检出病原菌阳性35例,共检出44株病原菌,其中革兰阳性菌28株占63.64%,革兰阴性菌16株占36.36%;非条件Logistic回归分析显示,植骨材料为人工骨及并发骨筋膜室综合征为胫骨平台骨折术后切口感染的危险因素(OR=2.487,2.428,P均<0.05);感染组外周血TGF-β1、Smad4 mRNA相对表达水平及Th17水平、Th17/Treg比值高于未感染组(P<0.05),Smad7 mRNA相对表达水平及Treg水平低于未感染组(P<0.05)。结论革兰阳性菌为胫骨平台骨折术后切口感染的主要致病菌,植骨材料为人工骨及并发骨筋膜室综合征是感染的高危因素,TGF-β1/Smad4信号被激活及Th17/Treg平衡被打破可能参与了感染的发生机制。

miR-544在心肌梗死大鼠心肌纤维化的作用机制研究

目的探讨微小RNA 544(miR-544)在心肌梗死大鼠心肌纤维化的作用机制。方法将大鼠随机分成假手术组、模型组、转染组-1和转染组-2。假手术组、模型组心脏注射磷酸盐缓冲液(phosphate buffered saline,PBS),转染组-1和转染组-2分别心脏注射9型重组腺相关病毒(rAAV9)-miR-544-mimics-NC病毒载体和rAAV9-miR-544-mimics病毒载体。注射30 min后,采用无菌7-0结扎线结扎大鼠的左前降支冠状动脉的方法来构建心肌梗死大鼠模型。依次使用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time quantitative reverse transcription polymerase chain reaction,qRT-PCR)、2,3,5-氯化三苯基四氮唑(2,3,5-triphenyl tetrazolium chloride,TTC)染色、免疫组化染色法检测各组大鼠心肌组织miR-544表达水平、心肌梗死比例、Ⅰ和Ⅲ型胶原蛋白的表达;荧光素酶报告基因分析miR-544与果蝇抗生物皮肤生长因子蛋白3(drosophila mothers against decapentaplegic 3,Smad3)的作用关系,以蛋白质印迹法测定大鼠心肌组织中转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)及Smad3蛋白的表达。结果假手术组、模型组、转染组-1和转染组-2大鼠心肌组织miR-544相对表达水平依次为1.02±0.08,0.43±0.16,0.40±0.14,0.68±0.04;心肌梗死比例依次为0,(58.22±0.13)%,(56.78±0.37)%,(19.86±0.15)%;Ⅰ型胶原蛋白的相对表达水平依次为1.01±0.03,4.56±0.16,4.32±0.41,2.01±0.12;Ⅲ型胶原蛋白的相对表达水平依次为0.99±0.04,7.63±0.13,7.52±0.28,2.16±0.28;TGF-β1的相对表达水平依次为1.00±0.01,4.25±0.08,4.23±0.09,1.86±0.06;Smad3的相对表达水平依次为0.99±0.02,4.73±0.13,4.75±0.11,2.25±0.07。模型组与假手术组比较,转染组-2与模型组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论miR-544能靶向调控Smad3的表达,进而阻断TGF-β1/Smad3信号通路,以发挥其抗纤维化效应。

基于TGF-β1/Smads信号通路观察异丙托溴铵雾化液对慢性阻塞性肺疾病大鼠肺功能、气道重塑的影响

目的 研究异丙托溴铵雾化液对慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)大鼠肺功能、气道重塑的影响及其对于转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)/母体抗生物皮肤生长因子同源物2/3(mothers against decapentaplegic homolog 2/3,Smad2/3)通路信号通路的调控机制。方法 将SD大鼠按照随机数字表法分为正常组、模型组、实验组、阳性对照组,每组15只;其中模型组、实验组、阳性对照组中的大鼠以泰山茉莉香烟烟熏法复制COPD大鼠模型:将大鼠放入烟熏箱内,点燃15只泰山茉莉香烟,持续1 h,每日3次,连续90 d,正常组大鼠不进行烟熏操作,常规喂养。成功复制COPD模型后,实验组大鼠每日在自制微小动物密闭箱内以雾化器吸入用异丙托溴铵溶液1 mg/4 m L,每日1次,每次2 h,阳性对照组大鼠皮下注射TGF-β1抑制剂LY2157299(20 mg·kg-1),每日1次,正常组、模型组大鼠分别皮下注射等剂量的生理盐水。在给药28 d后,使用小微动物肺功能测定仪依次检测各组大鼠的肺功能。TUNEL染色各组大鼠肺组织中的细胞凋亡,免疫荧光检测各组大鼠肺组织中气道重塑标志蛋白α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)的表达,Western blotting检测各组大鼠肺组织中TGF-β1、p-Smad2/3的表达。结果 与正常组相比,模型组大鼠的呼吸频率、肺组织的细胞凋亡率、α-SMA的荧光强度、TGF-β1、p-Smad2/3的表达出现了明显升高,大鼠的通气量和潮气量出现了明显下降(均P<0.05);与模型组相比,实验组和阳性对照组大鼠的呼吸频率、肺组织的细胞凋亡率、α-SMA的荧光强度、TGF-β1、p-Smad2/3的表达出现了明显下降,大鼠的通气量和潮气量出现了明显升高(均P<0.05)。结论 异丙托溴铵能抑制肺组织的细胞凋亡,缓解COPD大鼠的气道重塑,改善其肺功能,这可能与抑制TGF-β1/Smads通路有关。