长链非编码RNA PCGEM1通过转化生长因子β2/果蝇母源抗皮肤生长因子蛋白2信号通路调控膀胱尿路上皮癌细胞侵袭和转移的研究

目的 探讨长链非编码RNA PCGEM1(LncRNA PCGEM1)通过转化生长因子β2/果蝇母源抗皮肤生长因子蛋白2(TGF-β2/Smad2)信号通路调控膀胱尿路上皮癌(BUCC)细胞侵袭和转移。方法 将BUCC细胞分为空白对照组、T24-siNC组和T24-siPCGEM1组。空白对照组置于10%胎牛血清的DMEM培养基中进行培养;T24-siPCGEM1组和T24-siNC组分别用Lipofectamine 2000将10μmol·L^(-1)的siPCGEM1和阴性对照siNC转染至细胞,然后置于10%胎牛血清的DMEM培养基中进行培养。用实时荧光定量聚合酶链反应检测LncRNA PCGEM1的表达水平,用平板克隆实验检测细胞增殖情况,用蛋白质印迹法检测TGF-β2和Smad2的表达情况。结果 T24-siPCGEM1组、T24-siNC组和空白对照组的细胞克隆数分别为(192.83±15.59),(419.00±52.15)和(432.83±57.74)个,TGF-β2相对表达量分别为0.08±0.01,0.39±0.05和0.41±0.05,Smad 2相对表达量分别为0.10±0.03,0.58±0.03和0.59±0.03,T24-siPCGEM1组的上述指标与空白对照组和T24-siNC组相比,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论 LncRNA PCGEM1可能通过激活TGF-β2/Smad2信号通路,从而促进BUCC的进展。

SMAD基因家族PCR引物设计及其在非小细胞肺癌中的表达

目的自行设计并验证SMAD基因家族PCR引物,探讨应用上述引物进行RT-PCR检测SMAD基因在非小细胞肺癌中表达的可行性。方法自主设计并验证SMAD基因家族SMAD1~SMAD8特异引物,确定SMAD1-1、SMAD2-1、SMAD3-1、SMAD4-2、SMAD5-1、SMAD6-1、SMAD7-1、SMAD8-2引物的扩增效率更高、特异性更强。采用RT-PCR技术检测SMAD1~SMAD8在人正常支气管上皮细胞系BEAS-2B,肺腺癌细胞系A549、H1299,肺鳞癌细胞系SK-MES-1中的表达变化,引物为SMAD1-1、SMAD2-1、SMAD3-1、SMAD4-2、SMAD5-1、SMAD6-1、SMAD7-1、SMAD8-2。结果以正常支气管上皮BEAS-2B细胞中SMAD1表达量为基准(校正RQ约为1),SMAD2相对表达量为6.590±0.459、SMAD3为10.977±0.312、SMAD4为4.651±0.115、SMAD5为16.762±0.389、SMAD6为3.248±0.108、SMAD7为2.007±0.012、SMAD8为1.144±0.103,均较SMAD1表达升高,其中SMAD5表达最高,SMAD3次之。SMAD2、SMAD4、SMAD5、SMAD6、SMAD7、SMAD8在肺腺癌A549、H1299细胞及肺鳞癌SK-MES-1细胞中的表达均低于人正常支气管上皮BEAS-2B细胞;在H1299、SK-MES-1细胞中SMAD1表达高于BEAS-2B和A549细胞,且在A549细胞中SMAD1表达低于BEAS-2B细胞;在SK-MES-1细胞中SMAD3表达升高,且在H1299、A549细胞中SMAD3表达较BEAS-2B细胞下降;在H1299细胞中SMAD2、SMAD6、SMAD7表较其他三种细胞均下降;各细胞间比较P<0.05或<0.01。结论成功自主设计SMAD基因家族特异引物,并用于检测非小细胞肺癌中SMAD基因表达;SMAD5可能参与了肺癌的发生、发展,SMAD3可能与上皮相关性疾病相关。

左卡尼汀对糖尿病肾病维持性血液透析患者的肾保护作用研究

目的 基于转化生子因子β1(TGF-β1)/果蝇母源抗皮肤生长因子蛋白(Smad)通路分析左卡尼汀对糖尿病肾病(DKD)维持性血液透析(MHD)患者的肾保护作用。方法 回顾性队列分析进行MHD治疗的DKD患者的临床资料,将患者分为对照组和试验组。对照组进行低分子肝素抗凝等常规对症治疗,试验组在常规对症处理的基础上联合左卡尼汀治疗。观察2组DKD患者治疗前及治疗3个月后肾功能[血肌酸酐(Scr)、β_(2)微球蛋白(β_(2)-MG)、尿素氮(BUN)]、炎症状态[C反应蛋白(CRP)、白细胞介素17(IL-17)、白细胞介素6(IL-6)]、脂代谢[脂蛋白a(Lp-a)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、三酰甘油(TG)]、TGF-β1/Smad通路(TGF-β1、Smad4、Smad7)变化情况,并记录治疗期间药物不良反应发生情况。结果 对照组38例,试验组44例。试验组与对照组患者治疗3个月后Scr分别为(198.26±18.33)和(254.19±21.08)μmol·L^(-1),β_(2)-MG为(15.22±3.09)和(21.69±4.20)mg·L^(-1),BUN分别为(15.32±3.11)和(19.67±3.79)mmol·L^(-1),CRP分别为(6.48±1.27)和(7.44±1.39)mg·L^(-1),IL-17分别为(8.78±1.45)和(10.23±1.98)pg·mL^(-1),IL-6分别为(43.28±7.01)和(50.32±8.24)pg·mL^(-1),Lp-a分别为(220.71±28.37)和(249.63±32.40)mg·L^(-1),TG分别为(1.52±0.31)和(1.72±0.34)mmol·L^(-1),HDL-C分别为(1.20±0.16)和(1.12±0.14)mmol·L^(-1),在统计学上差异均有统计学意义(均P<0.05)。试验组患者治疗3个月后TGF-β1、Smad4、Smad7 mRNA相对表达水平分别为1.45±0.31、1.55±0.33和2.03±0.41,对照组分别为1.80±0.33、1.86±0.35和1.55±0.33,在统计学上差异均有统计学意义(均P<0.05)。试验组和对照组治疗期间药物不良反应发生率分别为2.27%和0,在统计学上差异无统计学意义(P>0.05)。结论 左卡尼汀用于DKD患者MHD治疗,可减轻炎症水平、改善脂代谢,调节TGF-β1/Smad通路,具有保护肾功能的作用。