白藜芦醇对结肠癌大鼠果蝇WNT同源基因/β-连环蛋白信号通路的影响

目的探讨白藜芦醇对结肠癌大鼠果蝇WNT同源基因/β-连环蛋白(Wnt/β-catenin)信号通路的影响。方法用N-甲基-N-亚硝基脲灌肠构建结肠癌模型。将造模成功大鼠随机分为模型组、对照组和低、高剂量实验组,每组15只;另取15只正常大鼠作为空白组。空白组和模型组均灌胃给予0.9%NaCl_(2) mL,qd;低、高剂量实验组分别灌胃给予2.5和5.0 mg·mL^(-1)白藜芦醇溶液2 mL,qd;对照组尾静脉注射给予5.44 mg·mL^(-1)奥沙利铂溶液1 mL,每3周1次。5组大鼠均连续给药12周。比较各组的抑瘤率,用蛋白质印迹法测定肿瘤组织Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白的表达水平。结果治疗后,低、高剂量实验组和对照组的抑瘤率分别为(35.42±3.71)%,(47.52±4.26)%和(57.24±6.04)%,低、高剂量实验组的抑瘤率与对照组比较,差异均有统计学意义(均P <0.05)。治疗后,低、高剂量实验组和对照组、模型组、空白组肿瘤组织的β-catenin相对表达量分别为1.74±0.23,1.38±0.17,1.14±0.15,2.53±0.34和0.58±0.08,TCF-4相对表达量分别为1.89±0.25,1.67±0.23,1.25±0.17,2.62±0.36和0.64±0.09,C-myc相对表达量分别为1.82±0.22,1.53±0.21,1.21±0.14,2.59±0.37和0.61±0.07,Cyclin D1相对表达量分别为1.78±0.21,1.57±0.22,1.33±0.18,2.49±0.35和0.52±0.07。模型组的上述指标与低、高剂量实验组和空白组、对照组比较,差异均有统计学意义(均P <0.05)。结论白藜芦醇能够剂量依赖性地抑制结肠癌大鼠肿瘤组织生长,其作用可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路激活有关。

敲减SRY相关高迁移率族盒蛋白9基因下调Wnt/β-连环蛋白信号对气道肉芽组织成纤维细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨敲减SRY相关高迁移率族盒蛋白9(SOX9)基因下调Wnt/β-连环蛋白信号对气道肉芽组织成纤维细胞增殖和凋亡的影响。方法应用基因芯片筛选出气道肉芽组织和气道正常黏膜组织差异表达的基因,用R软件进行分析,挑选最显著的差异基因SOX9作为研究对象,并借助逆转录聚合酶链反应技术验证气道肉芽组织及气道正常黏膜组织SOX9的表达。提取气道肉芽组织成纤维细胞,通过构建shRNA-SOX9慢病毒载体转染气道肉芽组织成纤维细胞,稳定感染shRNA-SOX9慢病毒的细胞标记为shRNA-SOX9(shRNA-SOX9组),稳定感染shRNA阴性对照的慢病毒的细胞标记为阴性对照组,无质粒载体加入的细胞设定为空白对照组。利用实时定量逆转录聚合酶链反应、蛋白质印迹法检测细胞内SOX9和Wnt/β-连环蛋白信号通路上下游基因表达情况;使用细胞计数试剂盒8检测成纤维细胞的活力;流式细胞术检测细胞凋亡率,组间做比较。结果SOX9在气道肉芽组织中呈高表达,shRNA-SOX9慢病毒转染气道肉芽组织成纤维细胞后,SOX9和Wnt/β-连环蛋白信号通路相关基因表达均低于阴性对照组和空白对照组;敲减SOX9后,气道肉芽组织成纤维细胞的增殖能力下降,转染24、48、72 h后,shRNA-SOX9组气道肉芽组织成纤维细胞增殖抑制率明显高于阴性对照组和空白对照组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。shRNA-SOX9组细胞凋亡率高于空白对照组和阴性对照组[(16.9±2.0)%比(9.1±1.2)%、(10.1±1.8)%],3组间差异有统计学意义(F=3.854,P=0.021)。结论敲减SOX9可以通过调节Wnt/β-连环蛋白信号通路抑制气道肉芽组织成纤维细胞的增殖、促进凋亡。

转染nm23-H_1基因靶向阻断人大细胞肺癌细胞株L9981 Wnt信号传导通路

目的 探讨nm2 3 H1 基因转染靶向阻断人高转移大细胞肺癌细胞株L9981Wnt信号传导通路的可行性 ,为阐明nm2 3 H1 基因调控肺癌转移抑制的分子机制和靶向治疗提供实验依据。方法 以转染nm 2 3 H1 基因的L9981 nm 2 3 H1 、原代L9981、空载L9981 pLXSN三株人高转移大细胞肺癌细胞为研究对象 ,应用Westernblot检测比较各株肺癌细胞胞浆、胞核中Wnt信号传导通路关键激酶GSK 3 β和 β 连环蛋白表达的变化。结果 ①GSK 3 β在L9981 nm 2 3 H1 肺癌细胞胞浆中表达量IOD( 63 41± 5 41)显著高于L9981( 373 6± 2 98)和L9981 pLXSN( 3 613± 3 83 ) (P <0 .0 0 1) ;②GSK 3 β在L9981 nm2 3 H1 肺癌细胞胞核中表达量IOD( 4 3 5 6± 490 )显著高于L9981( 65 7± 5 7)和L9981 pLXSN ( 70 5± 75 ) (P <0 .0 0 1) ;③β 连环蛋白在L9981 nm 2 3 H1 肺癌细胞胞浆中表达量IOD( 3 64 9± 118)显著高于L9981( 14 0 1± 3 1)和L9981 pLXSN ( 13 5 0± 5 5 )(P <0 .0 0 1) ;④β 连环蛋白在L9981 nm 2 3 H1 肺癌细胞胞核中表达量IOD( 2 945± 68)与L9981( 2 60 4± 2 3 )和L9981 pLXSN( 2 65 2± 5 3 )比较无显著性差异 (P >0 .0 5 ) ;⑤L9981与L9981 pLXSN两者间GSK 3 β和β 连环蛋白在肺癌细胞胞浆和胞核的?

外源性神经生长因子对APP/PS1转基因小鼠Wnt/β-catenin信号通路的调节

目的：探讨外源性神经生长因子（NGF）对APP/PS1转基因小鼠Wnt/β-catenin信号通路的调节.方法：鼻腔给予小鼠NGF治疗14周,应用免疫组织化学检测小鼠脑内β淀粉样蛋白（Aβ）老年斑的分布,应用免疫印迹检测小鼠脑内糖原合酶激酶3β（GSK3β）、p-GSK3β、β-连环蛋白（β-catenin）和p-β-catenin的表达.结果：Aβ免疫组织化学显色结果显示,与对照组小鼠大脑内的Aβ老年斑相比较,NGF治疗组转基因小鼠大脑内的Aβ老年斑数量减少了30.22％,沉积减少了35.85％,差异有统计学意义.免疫印迹结果显示,外源性NGF减少APP/PS1转基因小鼠脑内GSK3β的表达,增加β-catenin的表达.结论：外源性NGF可能通过抑制GSK3β的活性和增加β-catenin的活性,激活Wnt/β-catenin信号通路,对神经元起保护作用.

长基因间非编码RNA 842对非小细胞肺癌细胞侵袭迁移和Wnt/β-catenin信号通路的影响

目的探讨长基因间非编码RNA 842(LINC00842)对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞侵袭迁移和Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路的影响。方法从美国国家生物技术信息中心的GEO数据库中下载NSCLC数据集GSE30219的series matrix数据用于分析NSCLC组织的LINC00842水平。采用实时荧光定量PCR(qPCR)检测正常肺上皮细胞BEAS-2B及NSCLC细胞系(NCI-H1299、SPC-A-1、A549和NCI-H1975)的LINC00842水平。脂质体法向NCI-H1975细胞转染LINC00842过表达质粒pcDNA3.1-LINC00842(过表达组)和pcDNA3.1空质粒(空载体组)并设未转染的细胞为对照组。细胞计数试剂盒8(CCK-8)、划痕实验和Transwell小室实验检测细胞增殖活力、划痕愈合率和穿膜细胞数,qPCR和Western blotting检测wnt1和β-catenin水平。结果GSE30219数据集中的基因表达数据显示272例NSCLC组织的LINC00842水平为3.385±0.218,低于14例正常组织的3.538±0.137(P<0.05)。NSCLC细胞的LINC00842水平均低于BEAS-2B细胞(P<0.05),选取LINC00842水平最低的NCI-H1975细胞进行后续的功能验证实验。过表达组NCI-H1975细胞转染48 h后的LINC00842水平高于其余两组(P<0.05)。与对照组和空载体组相比,在转染处理后48、72 h,过表达组NCI-H1975细胞的增殖活力降低(P<0.05)。过表达组NCI-H1975细胞的划痕愈合率和穿膜细胞数分别为(25.764±2.584)%和(159.987±13.203)个,低于对照组的(78.551±6.726)%和(279.464±20.427)个及空载体组的(76.945±4.370)%和(265.823±21.246)个(P<0.05)。与对照组和空载体组相比,过表达组NCI-H1975细胞的wnt1和β-catenin水平均降低(P<0.05)。对照组和空载体组上述指标的差异无统计学意义(P>0.05)。结论LINC00842在NSCLC组织和细胞中表达均下调,增强LINC00842表达可抑制细胞的增殖和侵袭迁移能力及Wnt/β-catenin信号通路的激活,可能通过调控Wnt/β-catenin信号通路来发挥抑癌作用。

急性缺血性卒中患者静脉溶栓后血清微小RNA-874-3p、微小RNA-181a-5p及Wnt/β-catenin信号通路与神经功能预后的关系

目的探讨急性缺血性卒中(acute ischemic stroke,AIS)患者静脉溶栓后血清微小RNA(microRNA,miRNA)-874-3p(miR-874-3p)、miRNA-181a-5p(miR-181a-5p)与Wnt/β-catenin信号通路和神经功能预后的关系。方法前瞻性连续纳入2021年3月—2022年12月深圳市龙华区中心医院接受静脉溶栓治疗的AIS患者进入AIS组,选取同期体检健康者进入对照组。检测并比较两组血清miR-874-3p、miR-181a-5p及外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)中Wnt/β-catenin相对表达水平,采用Pearson相关性分析AIS患者血清miR-874-3p、miR-181a-5p表达与Wnt/β-catenin信号通路的相关性。所有AIS患者出院后均随访3个月,根据mRS评分将完成随访的患者分为神经功能预后良好组和神经功能预后不良组,比较两组患者血清miR-874-3p、miR-181a-5p相对表达水平。采用多因素logistic回归方程分析AIS患者神经功能预后的影响因素。结果本研究中,AI S组纳入185例患者,平均(62.8±7.3)岁;对照组纳入65例体检健康者,平均(63.4±6.9)岁。与对照组相比,AIS组血清miR-874-3p(1.02±0.21 vs.1.46±0.23,P<0.001)相对表达水平及PBMC中Wnt mRNA(2.41±0.64 vs.4.59±1.13,P<0.001)、β-catenin mRNA(1.19±0.18 vs.2.34±0.73,P<0.001)相对表达水平均低于对照组,血清miR-181a-5p(1.95±0.32 vs.1.27±0.27,P<0.001)相对表达水平高于对照组;Pearson相关性分析显示,AIS患者血清miR-874-3p表达与PBMC中Wnt mRNA(r=0.562,P<0.001)、β-catenin mRNA(r=0.611,P<0.001)表达呈正相关,miR-181a-5p表达与PBMC中Wnt mRNA(r=-0.586,P<0.001)、β-catenin mRNA(r=-0.595,P<0.001)表达呈负相关。AIS组中,神经功能预后良好104例,预后不良81例,预后不良率为43.78%;神经功能预后不良组血清miR-874-3p相对表达水平显著低于神经功能预后良好组(0.79±0.20 vs.1.20±0.22,P<0.001),miR-181a-5p相对表达水平显著高于神经功能预后良好组(2.26±0.31 vs.1.71±0.24,P<0.001);神经功能预后不良组年龄([65.48±7.45)岁vs.(62.29±7.21)岁,P=0.004]、发病至入院时间([4.36±1.03)h vs.(3.79±1.15)h,P=0.001]、入院时NIHSS评分([6.81±2.45)分vs.(4.67±1.76)分,P<0.001]及Hcy水平([13.34±4.12)μmol/L vs.(11.75±3.46)μmol/L,P=0.005]均高于神经功能预后良好组;多因素logistic回归结果显示,年龄偏高(OR 1.056,95%CI 1.005~1.108,P=0.029)、发病至入院时间延长(OR 1.125,95%CI 1.008~1.256,P=0.035)、入院时NIHSS评分高(OR 1.220,95%CI 1.093~1.362,P<0.001)、miR-874-3p低表达(OR 0.632,95%CI 0.498~0.803,P<0.001)及miR-181a-5p高表达(OR 1.506,95%CI 1.209~1.875,P<0.001)是导致AIS神经功能预后不良的危险因素。结论AIS组患者血清miR-874-3p表达下降,miR-181a-5p表达升高,均与Wnt/β-catenin信号通路相关,血清miR-874-3p、miR-181a-5p水平是患者神经功能预后的影响因素。

阿托伐他汀对激素性股骨头坏死大鼠的作用及对Wnt/β-catenin信号通路的影响

目的探究阿托伐他汀对激素性股骨头坏死大鼠的作用及对果蝇无翅基因/β-连环蛋白(Wnt/β-catenin)信号通路的影响。方法30只SD雄性大鼠随机分为对照组、模型组及阿托伐他汀组,每组10只。模型组和阿托伐他汀组复制激素性股骨头坏死模型并对每只大鼠腹腔注射醋酸泼尼松龙(24.5 mg/kg)和青霉素钠(8万u),2次/周,连续给药6周,共18只大鼠模型复制成功。模型复制的同时,阿托伐他汀组腹腔注射阿托伐他汀1 mg/(kg·d),对照组与模型组给予等量的生理盐水,连续治疗6周后,检测各组大鼠血清钙(S-Ca)、血清磷(S-P)水平,以及血清碱性磷酸酶(ALP)、转化生长因子β_(1)(TGF-β_(1))水平;比较大鼠骨组织ALP、TGF-β_(1)mRNA相对表达量;比较大鼠骨组织Wnt1、β-catenin蛋白的表达。结果与对照组比较,模型组大鼠血清S-Ca、S-P及TGF⁃β_(1)水平降低(P<0.05),ALP水平升高(P<0.05),ALP mRNA相对表达量升高(P<0.05),TGF⁃β_(1)mRNA相对表达量降低(P<0.05),Wnt1水平和β-catenin蛋白相对表达量下降(P<0.05);与模型组比较,阿托伐他汀组大鼠血清S-Ca、S-P及TGF⁃β_(1)水平升高(P<0.05),ALP水平降低(P<0.05),ALP mRNA相对表达量下降(P<0.05),TGF-β_(1)mRNA相对表达量升高(P<0.05),Wnt1水平和β-catenin蛋白相对表达量升高(P<0.05)。结论阿托伐他汀能够改善激素性股骨头坏死大鼠骨代谢指标,其机制可能与Wnt/β-catenin信号通路有关。

LncRNA DLEU2对宫颈癌细胞生物学行为、miR-21和Wnt/β-catenin信号通路的影响

目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)淋巴细胞白血病缺失基因2(DLEU2)对宫颈癌细胞生物学行为的影响,并基于miR-21和Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路探讨其作用机制。方法 将宫颈癌HeLa细胞分为对照组、DLEU2干扰组、DLEU2干扰空载组、DLEU2过表达组、DLEU2过表达空载组。除对照组外,给予其他组细胞转染相应的质粒。转染24 h后,检测各组的细胞增殖活性、细胞凋亡情况及凋亡相关蛋白表达水平、细胞周期及细胞周期相关因子的mRNA表达水平、细胞侵袭数量及上皮细胞-间充质转化(EMT)相关蛋白表达水平、miR-21表达水平、Wnt/β-catenin的蛋白及mRNA表达水平。结果 (1)与对照组相比,DLEU2过表达组的细胞增殖活性降低、细胞凋亡率增加、B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)蛋白表达水平下调、Bcl-2相关性蛋白X和Caspase-3蛋白表达水平上调(P<0.05)。(2)与对照组相比,DLEU2过表达组的G_(1)期和S期细胞比例降低、G_(2)期细胞比例升高、细胞周期相关因子的mRNA表达水平下调(P<0.05)。(3)与对照组相比,DLEU2过表达组的细胞侵袭数减少,神经型钙黏蛋白表达水平下调,上皮型钙黏蛋白表达水平上调(P<0.05)。(4)与对照组相比,DLEU2过表达组的miR-21表达水平及Wnt3a、β-catenin的mRNA和蛋白表达水平均下调。(5)DLEU2干扰组的上述指标变化均与DLEU2过表达组相反(P<0.05),而两个空载组与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论 DLEU2可能通过调控miR-21及抑制Wnt/β-catenin信号通路活性,从而影响宫颈癌细胞的存活、死亡、EMT和侵袭等生物学行为。

Wnt/β-catenin信号通路与microRNA相互作用的研究进展

Wnt 基因最早是1982年 Nusse等［1］在用小鼠乳头瘤病毒诱导小鼠产生乳腺癌的过程中发现的。 Wnt基因表达因子参与细胞生长、凋亡及干细胞分化等重要生理过程。 Wnt基因所编码的蛋白是一类分泌型糖蛋白，它具有分泌型生长因子的特点，Wnt 被分泌后，既可与自身细胞的膜受体结合发挥自分泌调节作用，也可与邻近细胞的膜受体结合发挥旁分泌作用。现已发现的Wnt通路分支有（1）经典Wnt／β-连环蛋白（Wnt／β-catenin）信号转导通路；（2）平行细胞极性通路；（3） Wnt／Ca＋通路；（4）调节纺锤体定向和不对称细胞分裂的通路［2］。其中经典Wnt 信号通路即 Wnt／β-catenin 通路，是 Wnt 信号中研究最清楚的一条通路，在整个进化过程中高度保守。微小RNA（microRNA）是广泛存在于真核生物中的一类长度约为22个核苷酸的内源性非编码单链小分子RNA，由一段具有茎环结构、长度为70～80个核苷酸单链RNA前体剪切而成，可通过与其相关的mRNA分子3′端非编码区（untranslated region， UTR）互补配对，与Argonaute 蛋白结合形成 RNA 诱导的沉默复合体（RISCs）促进靶mRNA的降解或抑制其翻译负调控基因表达而发挥生物学作用［3-5］，也可以通过甲基化及调节转录因子参与基因表达的转录后调控［6］。

沉默lncRNA ST7-AS1通过Wnt/β-catenin信号通路对肝癌细胞增殖、迁移和侵袭影响的实验研究

目的:探讨沉默长链非编码RNA(lncRNA)致癌性抑制基因7反义RNA1(ST7-AS1)通过Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路对肝癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法:肝癌细胞系HCCLM3分成Control组、Vector组、ST7-AS1组、sh-NC组、sh-ST7-AS1组和sh-ST7-AS1+Wnt/β-catenin通路激动剂(SKL2001)组。结果:与Control组比较,ST7-AS1组HCCLM3细胞的吸光度(A570)值及N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vemintin)、Wnt1和β-catenin的表达升高,克隆数量和迁移、侵袭数目增多,上皮细胞钙黏蛋白(E-cadherin)和GSK-3β的表达降低(P<0.05)。Wnt/β-catenin通路激动剂SKL2001可部分逆转沉默ST7-AS1对HCCLM3细胞增殖、迁移、侵袭的影响(P<0.05)。结论:沉默ST7-AS1可通过抑制Wnt/β-catenin信号通路激活抑制肝癌细胞增殖、迁移和侵袭。

叉头框转录因子F2作用于结肠癌细胞中Wnt/β-连环蛋白信号通路候选靶基因的研究

目的筛选叉头框转录因子F2(FOXF2)作用于结肠癌细胞中Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路的候选靶基因并分析其生物学功能。方法设置干扰FOXF2基因的最佳慢病毒转染获得的HT29细胞为沉默组, 空载慢病毒转染获得的HT29细胞为对照组。对照组和沉默组各取三个样本行转录组测序分析;富集到Wnt/β-catenin信号通路, 实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)、蛋白质印迹法(Western blot)验证该通路的候选靶基因。多组间比较采用单因素方差分析, 两组间比较采用t检验。结果 3组干扰慢病毒沉默HT29细胞中FOXF2的表达效果显著高于空载慢病毒[FOXF2基因信使RNA(mRNA)表达分别为0.29±0.02、0.28±0.05、0.26±0.01比1.00±0.13, FOXF2基因蛋白表达分别为0.20±0.02、0.16±0.01、0.12±0.01比1.00±0.01], 差异有统计学意义(F=75.948、3 549.333, 均P<0.01), 第3组慢病毒沉默FOXF2效果最佳。HT29细胞沉默FOXF2后有389个差异表达基因(DEGs);基因本体论(GO)功能富集分析显示, DEGs显著富集在免疫效应过程、细胞外区域、腺苷酸转移酶活性等功能集团;京都基因与基因组百科全书(KEGG)分析显示, DEGs主要涉及EB病毒感染、NOD样受体信号通路及Wnt信号通路等;Wnt/β-catenin信号通路的候选靶基因骨形成蛋白和激活素的跨膜抑制剂(BAMBI)、富含亮氨酸重复序列的G蛋白耦联受体5(LGR5)、富含亮氨酸重复序列的G蛋白耦联受体6(LGR6)和MSTRG.14182(新基因)主要涉及正向调控Wnt信号通路、细胞增殖和迁移等生物学过程。沉默组中BAMBI、LGR5、LGR6 mRNA和蛋白表达显著高于对照组[mRNA表达分别为1.86±0.21比1.00±0.20、1.95±0.11比1.00±0.09、2.06±0.10比1.00±0.03, 蛋白表达分别为1.88±0.02比1.00±0.06、2.08±0.12比1.00±0.04、1.80±0.03比1.00±0.08], 差异有统计学意义(t=-5.066、-11.646、-17.584、-24.100、-14.820、-16.710, 均P<0.01)。结论沉默FOXF2基因的HT29细胞存在较多的差异表达基因, Wnt/β-catenin信号通路的候选靶基因可能参与正向调控Wnt信号通路、细胞增殖及迁移等生物学过程。

小干扰RNA干扰Wnt／β-连环蛋白信号转导通路抑制肝癌细胞生长

以β-连环蛋白（β-catenin）为中心的Wnt信号转导通路是肿瘤发生、发展过程中关键的信号传导通路之一。本实验应用RNA干扰技术沉默β-连环蛋白基因的表达，研究Wnt／β-连环蛋白信号传导通路对肝癌细胞生长的影响，以进一步揭示肝癌的发病机制，并观察小干扰（si）RNA能否用于肝癌的治疗。

干扰性小核糖核酸靶向抑制趋化因子受体4基因表达对鼻咽癌细胞增殖和侵袭的影响

目的探讨干扰性小核糖核酸(siRNA)靶向抑制鼻咽癌细胞趋化因子受体4(CXCR4)基因表达对癌细胞增殖、侵袭的影响及机制。方法收集新乡医学院第一附属医院2014年1月至2016年12月保存的鼻咽癌及相应的癌旁组织标本各42例,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)和Western blot法分别检测鼻咽癌及相应的癌旁组织中CXCR4 mRNA及蛋白表达。将人鼻咽癌细胞系CNE-2Z分为空白对照组(细胞未做任何处理)、阴性对照组(细胞转染无义siRNA序列)和CXCR4转染组(细胞转染CXCR4的靶向siRNA序列),转染48 h后采用Western blot法检测各组细胞中CXCR4、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、β-连环蛋白(β-catenin)和细胞周期素D1(Cyclin D1)蛋白表达;应用细胞计数试剂盒和Transwell小室分别检测细胞的增殖和侵袭能力。结果鼻咽癌及相应的癌旁组织中CXCR4 mRNA表达分别为5.526±0.143、0.953±0.091,蛋白表达分别为0.522±0.047、0.053±0.011,鼻咽癌组织中CXCR4 mRNA及蛋白表达均显著高于癌旁组织(P<0.05)。CXCR4转染组细胞中CXCR4、MMP-2、MMP-9、β-catenin、Cyclin D1蛋白表达及细胞存活率、细胞侵袭数均显著低于空白对照组和阴性对照组(P<0.05),但空白对照组和阴性对照组细胞中CXCR4、MMP-2、MMP-9、β-catenin、Cyclin D1蛋白表达及细胞存活率、细胞侵袭数比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论抑制鼻咽癌CNE-2Z细胞中CXCR4基因表达可显著降低肿瘤细胞的增殖与侵袭能力,其机制可能与下调Wnt/β-catenin信号通路有关。

槲皮素抑制人前列腺癌PC-3细胞增殖及与Wnt/β-catenin信号通路的机制

目的:观察槲皮素对人前列腺癌PC-3细胞增殖和Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路的调控作用,探讨其抗前列腺癌的可能机制。方法:体外培养PC-3细胞,以不同终浓度槲皮素进行处理,设空白组。采用噻唑蓝比色法(MTT)观察槲皮素对PC-3细胞增殖抑制作用,计算半数抑制浓度(IC50);采用流式细胞仪检测槲皮素对PC-3细胞凋亡的影响;采用免疫印迹法(Western blot)和逆转录-PCR(RT-PCR)分析检测槲皮素对β-catenin和下游靶基因细胞周期素D1(Cyclin D1),原癌基因(c-Myc)蛋白表达和转录水平;采用免疫荧光分析检测槲皮素对β-catenin表达的影响;利用荧光酶报告基因分析检测槲皮素对Wnt/β-catenin信号通路的影响。结果:与空白组比较,槲皮素对PC-3细胞增殖具有明显抑制作用(P<0.05),并诱导PC-3细胞凋亡(P<0.05)。与空白组比较,槲皮素可显著抑制PC-3细胞β-catenin的蛋白表达和转录活性,从而阻断Wnt/β-catenin信号通路的传导,抑制下游靶基因的表达水平(P<0.05,P<0.01)。结论:槲皮素可显著抑制PC-3细胞增殖,其机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路有关。

β-榄香烯对人肝癌细胞HepG2增殖的影响及机制探讨

目的观察β-榄香烯对人肝癌细胞株Hep G2增殖的影响,并探讨其作用机制。方法取对数生长期Hep G2细胞分为A、B、C、D组,分别置于含10%胎牛血清RPMI 1640培养基、5μg/m Lβ-榄香烯+10%胎牛血清RPMI 1640培养基、10μg/m Lβ-榄香烯+10%胎牛血清RPMI 1640培养基、20μg/m Lβ-榄香烯+10%胎牛血清RPMI 1640培养基中培养。采用MTT法检测培养0、24、48、72 h时细胞增殖抑制率,采用RT-PCR法检测各组培养24 h时细胞轴蛋白(Axin)、结肠腺瘤息肉易感基因(APC)蛋白和β-连环蛋白(β-catenin)mRNA。结果培养0、24、48、72 h各组细胞增殖抑制率均B组<C组<D组,P均<0.05;且与本组前一时间段比较,P均<0.05。培养24 h时各组细胞β-catenin mRNA相对表达量为A组>B组>C组>D组,各组细胞Axin、APC mRNA相对表达量为A组<B组<C组<D组,P均<0.05。结论β-榄香烯可抑制Hep G2增殖,其机制可能为降低β-catenin而上调Axin、APC的表达阻断Wnt/β-catenin信号通路。

非综合征型先天缺牙致病基因和分子机制的研究进展

先天缺牙是牙齿发育过程中常见的牙数目发育异常,对患者的颌面部发育及美观和咀嚼功能产生严重的影响。根据有无伴发全身症状,先天缺牙可分为综合征型先天缺牙与非综合征型先天缺牙。近几年发现新的相关基因和新的突变位点及分子机制已成为目前非综合征型先天缺牙基因研究的主要方向。本文通过对近年来文献的回顾,对与非综合征型先天缺牙主要相关的Wnt/β-catenin信号通路、TGF-β/BMP信号通路、PAX9基因和MSX1基因、EDA/EDAR/NF-κb信号通路的分子机制以及相互调节的紧密联系进行综述,为未来先天缺牙的防治提供了新的理论基础。非综合征型先天缺牙致病基因的分子机制的研究目前甚少,对于其机制的精准探索将成为先天缺牙未来主要的研究方向之一。

E-Cadherin/β-Catenin与PTEN-PI3K/Akt在卵巢浆液性肿瘤中的表达及其意义

目的通过检测卵巢浆液性肿瘤(OST)组织中上皮型-钙粘蛋白(E-Cadherin)、β-连环蛋白(β-Catenin)、第10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白同源物基因(PTEN)、磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)110α、磷酸化丝氨酸蛋白激酶B(p-PKB/AktSer473)以及Ki-67表达,揭示E-Cadherin/β-Catenin与PTEN-PI3K/Akt通路在OST发生发展中的作用,探讨OST的发生发展机制。方法应用免疫组化法,检测10例卵巢正常上皮(NOT)、12例浆液性囊腺瘤(OSA)、18例浆液性交界性囊腺瘤(OSBT)、60例卵巢浆液性癌(OSC)石蜡包埋组织中E-Cadherin、β-Catenin、PTEN、PI3K110α、p-AktSer 473以及Ki-67蛋白表达,并结合OSC的临床病理特征进行统计分析。结果(1)OSC组E-Cadherin、PTEN阴性细胞率均高于OSBT、OSA和NOT(均P<0.05)。(2)OSC浸润与非浸润的标本中E-Cadherin、PTEN阴性细胞率的差异有统计学意义(P<0.05);OSC有无淋巴结转移的标本中E-Cadherin、PTEN阴性细胞率差异也有统计学意义(P<0.05)。(3)OSC中PI3Kp110α、p-AktSer473、β-Catenin以及Ki-67阳性细胞率高于OSBT、OSA和NOT,差异有统计学意义(P<0.01)。(4)OSC浸润与非浸润的标本比较,PI3Kp110α、p-AktSer473、β-Catenin以及Ki-67阳性细胞率的差异有统计学意义(P<0.01);OSC有无淋巴结转移的标本比较,PI3Kp110α、p-AktSer473、β-Catenin以及Ki-67阳性细胞率的差异均有统计学意义(均P<0.01)。结论E-Cadherin、PTEN蛋白表达的缺失伴随PI3K110α、p-AktSer473、β-Catenin以及Ki-67蛋白的过度激活,可能共同参与OST的发生发展,检测上述蛋白可为OST的临床诊治以及预后判断提供依据。

TC-1在Wnt/β-catenin信号通路中的研究进展

肿瘤的发生是一个涉及多基因改变的多步骤的复杂过程，其发生与癌基因的活化与抑癌基因的失活有关。目前，备受关注的Wnt／β-catenin信号通路在调节细胞增殖、分化、运动、形态等方面起到了重要作用，该信号通路的异常激活与肿瘤的发生密切相关[1,2]，pcatenin在Wnt／β-catenin信号通路的活化过程中起着枢纽的作用[3]，TC-1作为该信号通路的新成员，可通过上调Wnt／β-catenin信号通路的目的基因，激活肿瘤相关靶基因，促进肿瘤的发生。甲状腺癌相关基因1（TC-1）是癌基因家族的重要一员，又名为C80rf4基因。TC-1作为一个正向调控因子参与了wnt／β-连环蛋白信号传导通路的调节[4]，促进多种癌基因的表达上调，与多种肿瘤的恶性转化与进展有关。现就TC-1的发现、结构特点、生物学作用、作用机制以及TC-1与肿瘤的关系作一综述。

骨质疏松分子生物学研究专家共识

骨质疏松分子生物学研究在骨代谢分子信号通路、骨质疏松易感基因、骨质疏松相关蛋白、骨质疏松靶向治疗等方向取得了很大进展。核因子κB受体活化因子/核因子κB受体活化因子配体/骨保护素(RANK/RANKL/OPG)信号通路、核因子κB受体活化因子(NF-κB)信号通路、丝裂原活化蛋白激酶/细胞外调节蛋白激酶(MAPK/ERK)信号通路、巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)信号通路、钙离子(Ca^(2+))信号通路、酪氨酸激酶、蛋白激酶B(Src、Akt)信号通路、蛋白激酶C(PKC)信号通路等骨代谢重要通路,维生素D受体(VDR)基因、低密度脂蛋白相关蛋白5(LRP5)基因、亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)基因、雌激素受体(ER)基因等易感基因,载脂蛋白E(Apo E)、Klotho蛋白(Klotho)、骨形态发生蛋白(BMP)、骨涎蛋白(BSP)等相关蛋白,以直接或间接的方式参与调控骨代谢,作用重叠相互联系,互为结果,已在本专业领域达成共识。

多形性腺瘤基因样因子2在胃癌组织中的表达及其影响胃癌细胞侵袭、上皮-间充质转化的机制

目的观察多形性腺瘤基因样因子2(PLAGL2)在胃癌组织和胃癌细胞株中的表达,探讨其对胃癌细胞侵袭、上皮-间充质转化(EMT)的影响及分子机制。方法采用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)和Western blot方法检测PLAGL2 mRNA和蛋白在胃癌及相应癌旁组织和人胃癌MKN-28、BGC-823、NCI-N87、SGC-7901细胞株中的表达。将PLAGL2小干扰RNA(siRNA)转染SGC-7901细胞,Real-time PCR、Western blot检测PLAGL2 mRNA和蛋白表达,Transwell侵袭实验检测敲低PLAGL2对细胞侵袭的影响,Western blot检测敲低PLAGL2对EMT相关分子标志物N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)及Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路相关分子表达的影响。分别采用Wnt/β-catenin信号通路激活剂SKL2001和抑制剂XAV939处理转染PLAGL2-siRNA的SGC-7901细胞,Transwell侵袭实验检测细胞侵袭变化。结果PLAGL2 mRNA和蛋白在胃癌组织中的表达量(mRNA:1.11±0.27;蛋白:0.98±0.26)高于癌旁组织(mRNA:0.37±0.10;蛋白:0.28±0.11;t=-20.941,P<0.01;t=-20.186,P<0.01)。PLAGL2 mRNA和蛋白在胃癌细胞株MKN-28、BGC-823、NCI-N87、SGC-7901中的表达量高于人胃黏膜正常细胞GES-1(mRNA:t=-12.327,P<0.01;t=-19.812,P<0.01;t=-13.080,P<0.01;t=-15.218,P<0.01;蛋白:t=-11.816,P<0.01;t=-21.162,P<0.01;t=-14.517,P<0.01;t=-15.899,P<0.01)。转染后,SGC-7901的PLAGL2 mRNA和蛋白表达(mRNA:2.10±0.29;蛋白:1.96±0.27)较Control siRNA组(mRNA:6.61±0.73;蛋白:6.46±0.71)显著降低(t=-1.000,P<0.01;t=-1.000,P<0.01)。转染24、48、72 h后PLAGL2-siRNA组侵袭细胞数[(30.75±5.74)、(48.75±6.90)、(64.50±4.80)个]较Control siRNA组[(51.00±4.97)、(75.75±4.92)、(132.50±5.57)个]显著减少(t=-1.000,P<0.05;t=-1.000,P<0.01;t=-1.000,P<0.01),同时N-cadherin、Vimentin、β-catenin、基质金属蛋白酶(MMP)-7、c-Myc蛋白表达显著降低,E-cadherin蛋白表达显著增高(t=-1.000,P<0.01;t=-1.000,P<0.01;t=-1.000,P<0.01;t=-1.000,P<0.01;t=-1.000,P<0.01;t=-8.205,P<0.01)。此外,SKL2001能够逆转敲低PLAGL2对SGC-7901细胞侵袭的抑制作用,XAV939则能够进一步加强以上作用。结论胃癌组织PLAGL2表达上调,siRNA干扰PLAGL2可通过抑制Wnt/β-cateninn信号通路的激活和EMT抑制胃癌侵袭。