子宫内膜腺癌组织中人类RUNT相关转录因子3与果蝇zeste基因增强子同源物2的表达

目的:检测子宫内膜腺癌组织中人类RUNT相关转录因子3(RUNX3)和果蝇zeste基因增强子同源物2(EZH2)的表达。方法:采用免疫组化SP法检测60例子宫内膜腺癌、40例子宫内膜增殖症和20例正常增生期子宫内膜组织中RUNX3与EZH2蛋白的表达。结果:子宫内膜腺癌、子宫内膜增殖症与正常增生期子宫内膜组织RUNX3蛋白的阳性表达率分别为43.3%(26/60)、67.5%(27/40)与95.0%(19/20),3组间相比,差异有统计学意义(χ2=18.090,P<0.001);上述3种组织中EZH2蛋白的阳性表达率分别为75.0%(45/60)、42.5%(17/40)与15.0%(3/20),3组间相比,差异有统计学意义(χ2=25.041,P<0.001)。RUNX3蛋白的表达与子宫内膜腺癌的组织分化程度、TNM分期及浸润深度有关(χ2=-3.561,-2.367,5.370,P均<0.05),EZH2蛋白的表达与子宫内膜腺癌的组织分化程度及浸润深度有关(χ2=-3.084,5.568,P均<0.05)。子宫内膜腺癌组织中RUNX3和EZH2蛋白的表达相关(rP=0.330,P=0.007)。结论:RUNX3蛋白表达缺失和EZH2蛋白过度表达在子宫内膜腺癌的发生与发展中起重要作用,高表达的EZH2可能在一定程度上参与调控RUNX3基因的表达下调。

烷基化修复蛋白B同源物5调控果蝇Zeste基因增强子人类同源物2对K562/阿霉素细胞耐药的影响

目的探讨烷基化修复蛋白B同源物5(ALKBH5)对K562/阿霉素(ADM)细胞耐药的影响及其作用机制。方法以人白血病细胞系K562和ADM抗性细胞K562/ADM细胞为研究对象,利用Lipofectamine;2000将K562/ADM细胞分为对照组、si-NC组、si-ALKBH5-1组、si-ALKBH5-2组、空载体组(转染pcDNA3.1)、ALKBH5-WT组(转染pcDNA3.1-ALKBH5-WT)、ALKBH5-MUT组(转染pcDNA3.1-ALKBH5-MUT)、si-ALKBH5-2+空载体组、si-ALKBH5-2+pcDNA3.1-EZH2组。采用比色法检测细胞中N6-甲基腺苷(m6A)含量;采用CCK-8法检测细胞的半数抑制浓度(IC_(50));采用荧光光度计法检测ADM外排;采用Western blot检测细胞中ALKBH5、果蝇Zeste基因增强子人类同源物2(EZH2)、P糖蛋白(P-gp)、多药耐药基因1(MDR1)的蛋白表达;采用RNA免疫共沉淀(RIP)实验验证ALKBH5与EZH2 mRNA的相互作用;采用甲基化RNA免疫共沉淀(MeRIP)检测EZH2 m6A水平。结果与K562细胞比较,K562/ADM细胞对ADM的耐药性及细胞中ALKBH5蛋白表达水平升高,m6A含量降低,差异有统计学意义(P<0.01);沉默ALKBH5可增加K562/ADM细胞中m6A含量,过表达野生型ALKBH5可减少m6A含量,而过表达突变型ALKBH5(H204A)对m6A含量无明显影响。与对照组、si-NC组比较,si-ALKBH5-1组、si-ALKBH5-2组细胞在450 nm处的光密度值(OD_(450nm)值)、P-gp、MDR1蛋白表达水平降低,细胞内荧光强度升高,差异有统计学意义(P<0.05)。在K562/ADM细胞中,ALKBH5蛋白能与EZH2 mRNA相互作用;沉默ALKBH5可上调K562/ADM细胞中EZH2 m6A水平,下调EZH2蛋白表达水平,过表达野生型ALKBH5则呈相反趋势;EZH2过表达逆转了沉默ALKBH5对K562/ADM细胞活力及耐药性的影响。结论沉默ALKBH5通过促进EZH2的甲基化来下调EZH2的表达,进而降低K562/ADM的耐药性。

果蝇zeste基因增强子的人类同源物2促进小细胞肺癌化疗耐药的作用及其分子机制

目的:观察果蝇zeste基因增强子的人类同源物2(Enhancer of zeste homologue 2,EZH2)对小细胞肺癌(Small cell lung cancer,SCLC)化疗耐药的影响并研究其潜在分子机制。方法:首先使用RT-PCR和蛋白印迹方法检测SCLC初治和耐药患者组织标本、敏感细胞株(H446)和耐药细胞株(H446DDP)的EZH2表达差异;再通过CCK8方法检测敲低EZH2后的耐药SCLC细胞株对化疗药物半抑制浓度(Half maximal inhibitory concentration,IC50)值变化;最后通过RNA测序和验证方法筛查EZH2的下游靶基因以及CHIP-qPCR方法检测EZH2敲低后其靶基因启动子区的EZH2表达变化。结果:SCLC化疗耐药患者EZH2阳性表达水平(80%)高于化疗敏感患者,耐药细胞株(H446DDP)的EZH2 mRNA和蛋白表达水平均高于敏感细胞株(H446)(P<0.01,P<0.001);敲低EZH2表达后,耐药SCLC细胞株对化疗药物IC50值降低;细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂-1A(Cyclin-Dependent Kinase Inhibitor 1A,CDKN1A)表达增加,且CDKN1A基因启动子EZH2蛋白沉积显著减少。结论:EZH2促进SCLC化疗耐药,其分子机制与EZH2靶向调控CDKN1A基因表达相关。

胶质瘤大鼠胶质瘤组织中果蝇zeste基因增强子的人类同源物2的表达及意义

目的探讨果蝇zeste基因增强子的人类同源物2(EZH2)在胶质瘤大鼠胶质瘤组织中的表达及意义。方法将48只雄性Sprague Dawley大鼠随机分为对照组(n=24)和模型组(n=24)。模型组大鼠颅内注射10μL C6胶质瘤细胞悬液(1×10^(9) L^(-1))制备胶质瘤模型,对照组大鼠注射等量的磷酸盐缓冲液。造模后2周通过测量肿瘤体积、观察肿瘤细胞形态来判断造模是否成功。应用蛋白质印迹和免疫组织化学法检测对照组大鼠脑组织和模型组大鼠肿瘤组织中EZH2蛋白表达,实时荧光定量聚合酶链反应技术检测对照组大鼠脑组织和模型组大鼠肿瘤组织中EZH2 mRNA表达。结果模型组22只大鼠造模成功。模型组大鼠肿瘤组织中EZH2 mRNA和蛋白表达量均显著高于对照组(P<0.05)。结论胶质瘤大鼠肿瘤组织中EZH2的表达增加,EZH2可能参与胶质瘤的发生、发展过程。

Zeste基因增强子同源物2抑制剂减轻氧糖剥夺/再灌注诱导的神经元氧化应激和铁死亡

目的探讨Zeste基因增强子同源物2(EZH2)抑制剂GSK126在神经元缺血-再灌注损伤中的作用及机制。方法采用海马神经元HT22细胞制备氧糖剥夺/再灌注(OGD/R)模型。细胞分为正常对照组(Control组)、OGD/R模型组(OGD/R组)和OGD/R模型+低、中、高浓度EZH2抑制剂组(OGD/R+GSK1260.5、1、5μmol/L组)。采用CCK-8法、流式细胞术检测各组HT22细胞损伤,相应试剂盒检测细胞氧化应激指标活性氧(ROS)水平、丙二醛(MDA)含量和谷胱甘肽/氧化型谷胱甘肽(GSH/GSSG)比值。通过荧光探针C11 BODIPY 581/591和FerroOrange检测细胞内铁死亡指标脂质过氧化物(Lipid ROS)和Fe^(2+)含量。实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-qPCR)和蛋白免疫印记法(Western blot)实验检测细胞EZH2、NRF2、HO-1、SLC7A11和GPX4的mRNA和蛋白表达。结果与Control组比较,OGD/R组HT22细胞活力降低,细胞死亡率升高,细胞内ROS水平升高,MDA含量增加,GSH/GSSG比值减少,Lipid ROS、Fe^(2+)含量增加,EZH2的mRNA和蛋白表达升高,NRF2、HO-1、SLC7A11和GPX4的mRNA和蛋白表达均降低(P值均<0.05)。与OGD/R组比较,OGD/R+GSK1260.5、1、5μmol/L组HT22细胞活力均升高,细胞死亡率均下降,细胞内ROS水平均下降,MDA含量均减少,GSH/GSSG比值均增加,Lipid ROS、Fe^(2+)含量均减少,EZH2的mRNA和蛋白表达均降低,NRF2、HO-1、SLC7A11和GPX4的mRNA和蛋白表达均升高(P值均<0.05)。结论EZH2抑制剂GSK126可减轻OGD/R诱导的神经元细胞损伤,其机制可能与NRF2/HO-1通路抑制氧化应激和SLC7A11/GPX4通路抑制铁死亡有关。

果蝇zeste基因增强子同源物2在乳腺癌组织中的表达及其与乳腺癌分子分型的相关性

目的 检测果蝇zeste基因增强子同源物2（EZH2）、细胞核增殖抗原（Ki-67）在乳腺癌组织中的表达,探讨EZH2的表达与新型乳腺癌分子分型及预后的相关性.方法 免疫组织化学方法检测42例临床乳腺癌组织石蜡切片中EZH2和Ki-67的表达水平,同时结合乳腺癌的病理检查结果雌激素受体（ER）、孕激素受体（PR）、人类表皮生长因子受体-2（Her-2）,按照新型乳腺癌分子分型标准,将乳腺癌进行分型;使用χ^2检验分析比较EZH2与乳腺癌临床病理参数及与乳腺癌新型分子分型间的关系;采用Kaplan-Meier法分析EZH2的表达与乳腺癌患者无病生存率的关系.结果 乳腺癌患者的年龄、肿瘤大小、绝经状态、淋巴结转移、术后分期等临床病理参数在乳腺癌分子分型间的差异无统计学意义（P＞0.05）,EZH2表达与乳腺癌患者的肿瘤大小、淋巴结转移、术后分期、ER、PR表达等临床病理参数明显相关（P＜0.05）.30例非三阴性型乳腺癌患者中占EZH2高表达为11例,低表达为19例;三阴性乳腺癌占12例,其中高表达10例,低表达2例,EZH2在三阴性乳腺癌中的表达明显高于非三阴性乳腺癌,差异有统计学意义（χ^2=7.467,P＜0.05）.且EZH2的表达在4组乳腺癌分子亚型间的差异也有统计学意义（χ^2 =9.24,P ＜0.05）.在随访超过5年的42例乳腺癌患者中,EZH2高表达的患者有6例死亡,2例复发、转移;EZH2低表达的患者有2例死亡,1例复发、转移.EZH2高表达组与EZH2低表达组的乳腺癌患者的无病生存率（DFS）差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 EZH2在三阴性型乳腺癌高表达,它可成为三阴性型乳腺癌的分子标志物之一。

莪术醇对膀胱癌EJ细胞增殖、凋亡和果蝇zeste基因增强子同源物2表达的影响

目的观察莪术醇对体外培养人膀胱癌EJ细胞增殖、凋亡及果蝇zeste基因增强子同源物2（EZH2）表达的影响，并探讨其分子机制。 方法使用不同浓度莪术醇（12.5、25.0、50.0、100.0 mg/L）及含1%无水乙醇培养基的对照组干预处理人膀胱癌EJ细胞，细胞计数试剂盒（CCK-8）法检测细胞的增殖能力，Hoechst 33258荧光染色法观察细胞凋亡的形态变化，流式细胞术检测细胞凋亡率，反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和Western blot检测细胞中EZH2 mRNA及蛋白的表达。结果莪术醇对EJ细胞的增殖有抑制作用，抑制率分别为（32.94±0.93）%、（46.75±1.28）%、（58.16±0.76）%、（69.13±1.94）%，并诱导其凋亡，凋亡率为（3.60±0.46）%、（6.70±1.83）%、（16.20±1.61）%、（28.70±2.65）%，呈一定的浓度和时间依赖性（P=0.006、0.028、0.003、0.000）；在高浓度莪术醇组的细胞荧光染色结果中可发现典型的细胞凋亡形态；随着莪术醇浓度的增加，EZH2 mRNA和蛋白的表达量逐渐降低，与对照组比较差异有统计学意义（P=0.023、0.002、0.001、0.000，0.016、0.001、0.000、0.000）。结论莪术醇可抑制膀胱癌EJ细胞的体外增殖并诱导细胞凋亡，其机制可能与EZH2基因表达下调有关。

果蝇zeste基因增强子同源物2(EZH2)在妇科肿瘤中的研究现状及进展

妇科肿瘤的发病率逐年升高且病患趋于年轻化,已严重威胁妇女的健康与生命。果蝇zeste基因增强子同源物2(EZH2)是近年发现的候选癌基因,通过转录抑制,参与肿瘤的发生、发展。EZH2在包括妇科肿瘤在内的多种肿瘤中都有高表达,与肿瘤的发生、发展关系密切,是重要的分子标志物,并为肿瘤的治疗提供新的分子靶向。

微小RNA-101靶向果蝇zeste基因增强子同源物2基因对人前列腺癌PC-3细胞生物学行为的影响

目的 观察微小RNA-101（miR-101）通过靶向抑制果蝇zeste基因增强子同源物2（EZH2）基因对人前列腺癌PC-3细胞生物学行为的影响.方法 应用miR-101模拟物转染PC-3细胞;实时定量聚合酶链反应（Real-time PCR）和Western blot法检测转染后miR-101和EZH2的表达;噻唑蓝（MTT）比色法检测细胞增殖、流式细胞仪检测细胞周期;膜联蛋白V（Annexin V）/碘化丙锭（PI）双染色法测量细胞凋亡率;划痕实验检测细胞迁移能力;Transwell侵袭实验检测细胞侵袭力.结果 miR-101在PC-3细胞中的表达明显低于RWPE-1细胞,EZH2 mRNA和蛋白在PC-3细胞中的表达显著高于RWPE-1细胞,miR-101的表达量与EZH2表达量呈负相关（P＜0.05）.miR-101模拟物转染PC-3细胞后,细胞中的miR-101表达上调（P＜0.05）,而EZH2 mRNA和蛋白表达水平也明显降低（P＜0.05）.MTT法显示：转染后48、72、96 h miR-101模拟物转染组细胞增殖明显低于两个对照组（P＜0.05）;流式细胞仪测定结果显示：转染后48 h,miR-101组发生了G0/G1期阻滞（P＜0.05）;细胞凋亡率检测结果显示：空白对照组、阴性对照组及miR-101模拟物转染组PC-3细胞凋亡率分别为（2.53±0.36）％、（2.71±0.42）％、（9.84±0.83）％,转染组凋亡率明显高于两个对照组（P＜0.01）.划痕实验显示：miR-101模拟物转染组细胞迁移能力明显低于两个对照组（P＜0.01）.Transwell侵袭实验结果显示：miR-101组穿过Matrigel凝胶的细胞数显著少于两个对照组（P＜0.01）.结论 miR-101负向调控EZH2基因,上调miR-101可抑制PC-3细胞中EZH2的表达,具有显著的肿瘤抑制效应.

EZH2抑制剂对恶性淋巴瘤细胞放疗抵抗、Th细胞分化及PD1/PD-L1表达的作用机制

目的探究Zeste基因增强子同源物(EZH)2抑制剂对恶性淋巴瘤细胞放疗抵抗、Th细胞分化及程序性死亡(PD)1/PD1配体(PD-L1)表达的作用机制。方法取对数生长恶性淋巴瘤放疗抵抗细胞株将其分为恶性淋巴瘤(A)组、多柔比星(B)组、EZH2抑制剂(C)组、EZH2抑制剂联合PD1/PD-L1抑制剂(D)组,酶联免疫吸附试验(ELISA)及流式细胞仪检测Th细胞分化相关因子,Western印迹检测PD1/PD-L1蛋白表达,Hoechst33258染色法、噻唑蓝(MTT)法及小室法检测恶性淋巴瘤细胞活性。结果与A组相比,B、C、D组细胞凋亡率、干扰素(INF)-γ水平明显升高,细胞增殖率、侵袭数量、白细胞介素(IL)-4水平、PD1、PD-L1蛋白表达明显降低(P<0.05),且C组比B组变化更明显,D组比C组变化更明显(P<0.05)。结论EZH2抑制剂可显著抑制恶性淋巴瘤细胞放疗抵抗,有效调控Th细胞分化,并抑制PD1/PD-L1蛋白表达。

果蝇EZH2与乳腺癌分子分型及临床病理特征的关系

目的探讨果蝇Zeste基因增强子人类同源物2(EZH2)与乳腺癌分子分型及临床病理参数的关系。方法根据新型乳腺癌分子分型标准,将乳腺癌进行分子分型;免疫组织化学方法检测乳腺癌组织石蜡切片中EZH2的表达;采用χ~2检验分析EZH2表达与乳腺癌新型分子分型,以及临床病理参数之间的关系;采用KaplanMeier法分析EZH2表达与乳腺癌患者无病生存率(DFS)的关系。结果 13例管腔上皮A型乳腺癌患者中,3例为EZH2高表达(23.08%);10例管腔上皮B型乳腺癌患者中,5例为EZH2高表达(50.00%);7例人表皮生长因子受体2过表达型乳腺癌患者中,3例为EZH2高表达(42.86%);12例三阴性型乳腺癌患者中,10例为EZH2高表达(83.33%)。乳腺癌各分子亚型间EZH2表达的比较,差异有统计学意义(P<0.05)。EZH2高表达与EZH2低表达患者DFS比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 EZH2可能是预测乳腺癌预后的指标之一。

RNA干扰抑制EZH2基因表达对人胶质瘤细胞凋亡及对卡莫司汀敏感性的影响

目的观察RNA干扰技术抑制EZH2基因表达对人胶质瘤U251细胞凋亡及其对卡莫司汀敏感性的影响。方法针对EZH2 mRNA序列设计合成小干扰RNA(siRNA)的DNA模板,构建pRNAT-EZH2重组表达载体,并用其转染人胶质瘤U251细胞。用RT-PCR法检测pRNAT-EZH2转染前后U251细胞中内源性EZH2表达;激光共聚焦显微镜观察转染后及加入卡莫司汀后U251细胞凋亡情况;MTT法检测转染前后U251细胞对化疗药物卡莫司汀敏感性;用分光光度法检测转染前后以及加入卡莫司汀后U251细胞中Caspase-3活性。结果成功构建pRNAT-EZH2重组质粒,并成功转染U251细胞。pRNAT-EZH2重组质粒转染后U251细胞中EZH2 mRNA表达量降低(P<0.01);卡莫司汀组及卡莫司汀加pRNAT-EZH2组U251细胞凋亡明显;与卡莫司汀联合时,pRNAT-EZH2组U251细胞生长抑制率明显增高(P<0.01);Caspase-3活性明显高于空白对照组和阴性对照组(P均<0.01)。结论pRNAT-EZH2可抑制EZH2在人胶质瘤U251细胞中的表达,并增强U251细胞对卡莫司汀敏感性。

EZH2基因对人食管癌细胞增殖的影响

目的:探讨过表达或沉默果蝇Zeste基因增强子人类同源物2(enhancer of zeste homolog 2,EZH2)基因对食管癌细胞增殖的影响。方法:选用人食管癌细胞株ECA109、TE1、KYSE30、KYSE170作为研究对象,采用实时荧光定量PCR(q PCR)、Western blotting法分别检测食管癌细胞EZH2 m RNA和蛋白的表达水平,然后采用q PCR检测过表达和沉默EZH2基因后对4株食管癌细胞EZH2 m RNA的表达变化;CCK-8增殖实验、克隆形成实验检测过表达和沉默EZH2基因及EZH2抑制剂DZNep(3-deazaneplanocin A)处理对食管癌细胞增殖能力和克隆形成率的影响。结果:食管癌ECA109、TE1细胞中EZH2 m RNA和蛋白水平明显高于KYSE30、KYSE170细胞(P<0.05)。食管癌TE1、ECA109细胞转染EZH2-Sh RNA后EZH2表达水平下调(均P<0.05)、细胞增殖能力降低(1.07±0.08 vs1.59±0.09,P<0.05;0.88±0.08 vs 1.05±0.11,P<0.05)、克隆形成数下调[(200.00±11.43)vs(480.00±13.10)个,P<0.05;(88.00±8.16)vs(220.00±14.69)个,P<0.05]。KYSE30、KYSE170细胞转染EZH2过表达质粒后EZH2表达水平升高(均P<0.05)、细胞增殖能力显著增强(1.06±0.07 vs 0.76±0.06,P<0.05;3.36±0.30 vs 1.50±0.08,P<0.05)、克隆形成数显著升高[(45.00±3.27)vs(18.00±1.63)个,P<0.05;(65.00±4.08)vs(23.00±2.45)个,P<0.05];DZNep处理后,ECA109和TE1细胞增殖能力降低(均P<0.05)、克隆形成数下降(均P<0.05)。结论:EZH2基因能有效促进食管癌细胞的增殖和克隆形成能力,为深入研究EZH2作为食管癌治疗的新靶点提供了实验研究基础。

LncRNA FEZF1-AS1通过调控EZH2对肺间质细胞增殖、迁移及侵袭的作用

目的研究长链非编码RNA FEZ家族锌指1-反义RNA 1(lncRNA FEZF1-AS1)调控zeste同源物增强子2(EZH2)对肺间质细胞增殖、迁移、侵袭能力及上皮细胞-间质转化(EMT)的影响及其作用机制。方法将人肺腺癌细胞系A549分为对照组(control)和模型组[model,用转化生长因子β1(TGF-β1)20 ng/mL作用48 h,诱导成为肺间质细胞]。用Western blot检测细胞中E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)及波形蛋白(vimentin)的蛋白表达。RT-qPCR检测细胞中lncRNA FEZF1-AS1和EZH2基因表达。转染组细胞分为转染si NC组、si lncRNA FEZF1-AS1+OE vector组和si lncRNA FEZF1-AS1+OE EZH2组。CCK-8法检测细胞增殖、细胞划痕检测细胞迁移、Transwell小室法检测细胞侵袭;用Western blot检测细胞中E-cadherin、N-cadherin、vimentin及EZH2的蛋白表达,用RNA免疫沉淀(RIP)测定FEZF1-AS1与EZH2的直接结合作用。结果与对照组比较,模型组E-cadherin的蛋白表达水平减少(P<0.05);N-cadherin及vimentin的蛋白表达水平升高(P<0.05);与对照组比较,模型组lncRNA FEZF1-AS1与EZH2基因的表达水平明显升高(P<0.05);与si NC组相比,si lncRNA FEZF1-AS1+OE vector组细胞增殖、迁移、侵袭能力降低,E-cadherin蛋白表达升高,N-cadherin、vimentin、EZH2蛋白表达降低(P<0.05);与si lncRNA FEZF1-AS1+OE vector组比较,si lncRNA FEZF1-AS1+OE EZHZ组细胞增殖、侵袭、迁移能力升高,E-cadherin蛋白表达降低,N-cadherin、vimentin、EZH2蛋白表达升高(P<0.05);RIP实验进一步证实了lncRNA FEZF1-AS1与EZH2具有结合作用。结论LncRNA FEZF1-AS1通过调控EZH2促进肺间质细胞增殖、侵袭、转移和EMT过程。

EZH2基因与胃癌相关性研究进展

zeste基因增强子人类同源物2基因(EZH2)是多梳基因家族(PcG)的核心成员,作为转录阻遏因子,参与形成染色质结构、调节基因表达以及控制细胞生长。EZH2在多种恶性肿瘤中呈现高表达,与肿瘤的发生、侵袭转移性、耐药性及预后密切相关。本文就EZH2基因与胃癌遗传易感性、肿瘤侵袭转移、化疗敏感性及预后之间的关系进行综述。

EZH2基因与卵巢癌细胞系A2780化疗敏感性的关系

目的:探讨RNA干扰沉默果蝇zeste基因增强子同源物2(enhancer of zeste homolog2,EZH2)基因与卵巢癌细胞A2780顺铂敏感性的关系。方法:获得稳定表达EZH2短发夹状RNA(short hairpin RNA,shRNA)的人卵巢癌细胞A2780-shEZH2,实时定量PCR(Real time RT-PCR)法和免疫印记法检测转染株的EZH2基因表达,MTT法检测细胞对顺铂的耐药性,流式细胞学检测细胞凋亡。结果:以未转染组A2780细胞EZH2的表达水平为100%,EZH2-shRNA转染组A2780-shEZH2细胞EZH2的mRNA及蛋白水平分别下降90.20±1.66%和76.54±8.92%,与未转染组比较差异均有高度统计学意义(P<0.01)。EZH2-shRNA转染组A2780-shEZH2细胞对顺铂的IC50与未转染组A2780细胞IC50值和空质粒转染组A2780-shVector细胞IC50值比较,差异无统计学意义(P>0.05)。EZH2-shEZH2转染组的细胞凋亡率与空质粒转染组凋亡率及未转染细胞凋亡率相比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:EZH2基因与卵巢癌原发性顺铂耐药无关。

lncRNA NEAT1通过抑制hsa-miR-450b-5p促进胃癌细胞中EZH2的表达与细胞的增殖和迁移能力

目的:筛选果蝇Zeste基因增强子同源物2(EZH2)基因上游miRNA及lncRNA,分析其在胃癌细胞中的表达并验证其间的靶向关系,探讨它们对胃癌细胞增殖、迁移和凋亡的影响。方法:通过ENCORI、miRDB和Target Scan数据库查询并分析、筛选EZH2上游miRNA(has-miR-450b-5p),ENCORI数据库和DAINA数据库筛选has-miR-450b-5p上游lncRNA(lncRNA NEAT1),预测hsa-miR-450b-5p、lncRNA NEAT1与EZH2之间的结合位点,双荧光素酶报告基因实验验证hsa-miR-450b-5p与lncRNA NEAT1的结合关系。采用q PCR和WB法检测lncRNA NEAT1和EZH2在正常胃黏膜细胞(GES-1)与胃癌细胞(MGC-803、SGC-7901和MKN-28)中的表达量。按转染物的不同将MGC-803和SGC-7901细胞分为hsa-miR-450b-5p-mimic组、mimicNC组、si-NEAT1组和si-NC组,转染36~48 h后qPCR法验证过表达及敲减效果;通过qPCR、WB法检测观察过表达hsa-miR-450b-5p对细胞中lncRNANEAT1和EZH2m RNA、蛋白表达的影响,以及敲减lncRNANEAT1对hsa-miR-450b-5p和EZH2mRNA表达的影响;CCK-8法、划痕愈合实验和流式细胞术分别检测敲减EZH2或敲减lncRNA NEAT1对细胞增殖、迁移和凋亡能力的影响。结果:生物信息学分析筛选获得EZH2上游miRNA和lncRNA为has-miR-450b-5p和lncRNA NEAT1,双荧光素酶报告基因实验验证了两者间存在靶向关系。lncRNA NEAT1和EZH2 mRNA、蛋白在胃癌细胞中均呈高表达(均P<0.05)。与mimic-NC组相比,hsa-miR-450b-5p-mimic组MGC-803、SGC-7901细胞中miR-450b-5p水平均显著升高,而EZH2 mRNA、蛋白和lncRNA NEAT1的表达量均显著降低(P<0.05或P<0.01);与si-NC组相比,si-NEAT1组MGC-803、SGC-7901细胞中lncRNA NEAT1和EZH2 mRNA的表达量均显著降低(均P<0.01),SGC-7901细胞中hsa-miR-450b-5p表达量显著升高(P<0.05)。敲减EZH2或敲减lncRNA NEAT1后,MGC-803、SGC-7901细胞的增殖、迁移能力均显著降低(均P<0.01)。结论:lncRNA NEAT1和EZH2在胃癌细胞中均呈高表达,lncRNA NEAT1可通过hsa-miR-450b-5p促进EZH2的表达并提高胃癌MGC-803和SGC-7901细胞的增殖和迁移能力。

lncRNA XIST通过miR-32-5p/EZH2分子轴调控结直肠癌HCT-8细胞的恶性生物学行为

目的:探讨lncRNA XIST通过miR-32-5p/果蝇Zeste基因增强子同源物2(enhancer of zeste homolog2,EZH2)分子轴调控结直肠癌HCT-8细胞的恶性生物学行为。方法:收集2014年7月至2018年8月中南大学湘雅医院直肠肛门外科资料完整的结直肠癌患者28例癌组织和配对的癌旁组织标本,采用qPCR检测结直肠癌组织及细胞系中lncRNA XIST和miR-32-5p的表达水平,双荧光素酶报告基因验证1ncRNA XIST、miR-32-5p和EZH2的靶向关系,并进一步通过WB检测EZH2的表达水平。CCK-8、Transwell及Annexin V-FITC/PI染色流式细胞术检测HCT-8细胞增殖、迁移及凋亡情况。结果:lncRNA XIST在结直肠癌组织及细胞系中高表达,且在HCT-8细胞中表达最高(P<0.05或P<0.01)。双荧光素酶报告基因证实,lncRNA XIST靶向负调控miR-32-5p(P<0.05),且EZH2是miR-32-5p的靶基因。敲降1ncRNA XIST抑制HCT-8细胞增殖和迁移并诱导其凋亡(P<0.05或P<0.01);进一步实验证明,敲降lncRNA XIST上调miR-32-5p的表达水平,从而下调EZH2表达水平,进而抑制HCT-8细胞增殖和迁移并诱导其凋亡。结论:lncRNA XIST通过miR-32-5p/EZH2分子轴促进HCT-8细胞增殖、迁移并抑制细胞凋亡。

脑胶质瘤EZH2基因的表达分析

目的探讨脑胶质瘤果蝇zeste基因增强子同源物2(EZH2)蛋白的表达变化。方法选取2010年5月至2011年12月手术切除的胶质瘤组织标本83例,其中2008年WHO分级Ⅰ级15例,Ⅱ级20,Ⅲ级26例,Ⅳ级22例;术前均未接受放疗或化疗。另外,收集30例颅脑损伤内减压手术切除的无肿瘤脑组织作为对照。采用实时荧光定量PCR法检测EZH2 m RNA表达。根据EZH2 m RNA表达水平分为高表达组(EZH2 m RNA≥0.3,48例)和低表达组(EZH2 m RNA<0.3,35例),分析两组术后生存期。结果胶质瘤组织EZH2 m RNA表达水平明显高于对照组(P<0.01),高级别胶质瘤(WHOⅢ、Ⅳ级)组织EZH2 m RNA表达水平明显高于低级别胶质瘤(WHOⅠ、Ⅱ级)组织(P<0.01)。低表达组患者术后生存期较高表达组显著延长(P<0.01)。结论脑胶质瘤组织EZH2 m RNA呈高表达,且其表达水平与病理分级具有相关性。

miR-32-5p通过靶向下调EZH2的表达抑制胰腺癌PANC-1细胞的恶性生物学行为与裸鼠移植瘤生长

目的:探究miR-32-5p通过靶向zeste基因增强子人类同源物2(EZH2)对胰腺癌PANC-1细胞恶性生物学行为的影响及其分子机制。方法:利用GEPIA数据库分析胰腺癌组织中EZH2的表达水平及其与患者的预后生存期的关系,并分析miR-32-5p表达与患者临床病理因素的关系。qPCR法检测正常胰腺HPDE6-C7细胞和胰腺癌PANC-1、AsPC-1、SW1990细胞中miR-32-5p和EZH2 mRNA的表达,通过Lipofectamine^(TM)2000将miR-NC、miR-32-5p mimic、miR-32-5p inhibitor、pcDNA-NC、pcDNA EZH2质粒分别转染PANC-1细胞,其分为对照组(不转染)、miR-NC组(转染miR-NC)、miR-32-5p mimic组(转染miR-32-5p mimic)、Anti-miR-32-5p组(转染miR-32-5p inhibitor)、miR-NC+pcDNA-NC组(转染miR-NC+pcDNA-NC)、miR-NC+pcDNA EZH2组(转染miR-NC+pcDNA EZH2)、miR-32-5p mimic+pcDNA-NC组(转染miR-32-5p mimic+pcDNA-NC)、miR-32-5p mimic+pcDNA EZH2组(转染miR-32-5p mimic+pcDNA EZH2)。双荧光素酶报告基因实验验证miR-32-5p与EZH2的靶向关系;MTT法及克隆形成实验检测各组细胞的增殖能力,划痕愈合实验检测各组细胞的迁移能力;Transwell小室实验检测各组细胞的侵袭能力,WB法检测各组细胞EZH2、E-cadherin、N-cadherin的表达;裸鼠成瘤实验检测转染后各组PANC-1细胞移植瘤的生长情况,免疫组化染色法观察移植瘤组织中Ki67和MMP-2的表达。结果:GEPIA数据库显示胰腺癌组织中EZH2的表达水平高于癌旁组织,患者预后生存期与EZH2的表达水平呈负相关(均P<0.05);miR-32-5p表达水平与胰腺癌神经浸润、肿瘤分化程度、TNM分期、淋巴结转移有明显的关联(均P<0.05);与HPDE6-C7细胞相比,PANC-1、AsPC-1、SW1990细胞中miR-32-5p呈高表达、EZH2 mRNA呈低表达、miR-32-5p表达水平与EZH2表达水平呈负相关(均P<0.05)。miR-32-5p靶向EZH2且抑制其表达(均P<0.05);过表达miR-32-5p能够下调Ki67、MMP-2、N-cadherin表达水平、上调E-cadherin表达水平,抑制PANC-1细胞的增殖、迁移和侵袭能力,抑制移植瘤质量增加(均P<0.05)。结论:miR-32-5p能够靶向调控EZH2从而影响胰腺癌PANC-1细胞的增殖、迁移、侵袭、EMT进程及裸鼠体内移植瘤的生长。