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枝状枝孢霉MD2的候选基因A00981的克隆及转基因菌株的构建
1
作者
张鹏
刘盼
+4 位作者
周兰
裴婷
甘喆
李浩东
宋发军
《中南民族大学学报(自然科学版)》
CAS
2019年第1期45-49,共5页
目的:为揭示真菌紫杉醇合成分子机制.方法:克隆了产紫杉醇内生真菌枝状枝孢霉MD2的候选基因A00981,该基因DNA和cDNA序列分别为969 bp和894 bp;其编码蛋白含有298个氨基酸、无跨膜结构和信号肽,与酰基辅酶A脱氢酶(ACAD)具有73%的一致性....
目的:为揭示真菌紫杉醇合成分子机制.方法:克隆了产紫杉醇内生真菌枝状枝孢霉MD2的候选基因A00981,该基因DNA和cDNA序列分别为969 bp和894 bp;其编码蛋白含有298个氨基酸、无跨膜结构和信号肽,与酰基辅酶A脱氢酶(ACAD)具有73%的一致性.进一步构建该基因的超表达载体pTFC-A00981,并转化枝状枝孢霉MD2,共获得9株转基因菌株.结果:Southern blot分析证明其中5株转基因菌株的外源基因是以单拷贝方式插入.结论:该结果为深入分析超表达候选基因A00981对枝状枝孢霉MD2紫杉烷类合成的影响奠定了基础.
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关键词
枝状枝孢霉md2
紫杉醇
基因克隆
转基因菌株
下载PDF
职称材料
产紫杉醇内生真菌枝状枝孢霉MD2的发酵条件优化
被引量:
14
2
作者
苗莉云
张鹏
+1 位作者
周蓬蓬
余龙江
《微生物学通报》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第6期1033-1040,共8页
【目的】通过优化内生真菌枝状枝孢霉MD2的发酵条件,提高10-去乙酰巴卡亭Ⅲ(10-DAB)和紫杉醇(Taxol)的产量。【方法】采用单因素试验分析不同的培养基初始pH值、培养温度、摇床转速和培养时间对10-DAB和紫杉醇产量的影响,优化枝状枝孢霉...
【目的】通过优化内生真菌枝状枝孢霉MD2的发酵条件,提高10-去乙酰巴卡亭Ⅲ(10-DAB)和紫杉醇(Taxol)的产量。【方法】采用单因素试验分析不同的培养基初始pH值、培养温度、摇床转速和培养时间对10-DAB和紫杉醇产量的影响,优化枝状枝孢霉MD2的培养条件;以YES为基本培养基,采用单因素试验和正交试验分析添加苯甲酸钠、苯丙氨酸、丝氨酸和甘氨酸4种前体物对10-DAB和紫杉醇产量的影响,优化枝状枝孢霉MD2的培养基组分。【结果】优化后发酵条件为:在初始pH为5.0的300 mL YES培养基中,添加15 mg/L苯甲酸钠、25 mg/L苯丙氨酸、5 mg/L丝氨酸、15 mg/L甘氨酸,接种1 mL枝状枝孢霉MD2的孢子悬液(107 108个孢子/mL),28.0°C、220 r/min发酵培养12 d。在此条件下,枝状枝孢霉MD2的生物量、10-DAB和紫杉醇的产量分别为15.5 g/L、471.5μg/L和569.5μg/L,与初始发酵条件相比,分别提高了1.3、3.6和3.4倍。【结论】首次获得了枝状枝孢霉MD2生产10-DAB和紫杉醇的较适摇瓶发酵条件,可为进一步放大发酵培养提供参考。
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关键词
内生真菌
枝状枝孢霉md2
10-去乙酰巴卡亭Ⅲ
紫杉醇
发酵条件
原文传递
紫杉醇合成相关候选基因A02725的克隆及转基因菌株的构建
被引量:
1
3
作者
刘盼
柯友胜
+5 位作者
周兰
德格
裴婷
甘喆
李浩东
张鹏
《基因组学与应用生物学》
CAS
CSCD
北大核心
2020年第1期145-150,共6页
真菌紫杉醇合成相关基因的功能研究是揭示真菌紫杉醇合成机制的关键。为了揭示产紫杉醇内生真菌枝状枝孢霉MD2的候选基因A02725对宿主紫杉烷类合成的作用,本研究克隆了候选基因A02725的DNA全长序列(1 524 bp);生物信息学预测结果表明该...
真菌紫杉醇合成相关基因的功能研究是揭示真菌紫杉醇合成机制的关键。为了揭示产紫杉醇内生真菌枝状枝孢霉MD2的候选基因A02725对宿主紫杉烷类合成的作用,本研究克隆了候选基因A02725的DNA全长序列(1 524 bp);生物信息学预测结果表明该基因编码蛋白为亲水蛋白,含508个氨基酸,无信号肽和跨膜结构,与牻牛儿基牻牛儿基焦磷酸合成酶(geranylgeranyl pyrophosphate synthase,GGPPS)具有79%的一致性;进一步构建该基因的超表达载体并转化枝状枝孢霉MD2,通过抗性筛选以及Southern blot检测,共获得27株转基因菌株,其中5株转基因菌株的外源基因是以单拷贝方式整合。该结果为深入分析超表达候选基因A02725对宿主紫杉烷类合成的影响奠定了基础。
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关键词
枝状枝孢霉md2
紫杉醇
候选基因
转基因菌株
原文传递
题名
枝状枝孢霉MD2的候选基因A00981的克隆及转基因菌株的构建
1
作者
张鹏
刘盼
周兰
裴婷
甘喆
李浩东
宋发军
机构
中南民族大学生命科学学院生物技术国家民委重点实验室/武陵山区特色资源植物种质保护与利用湖北省重点实验室
出处
《中南民族大学学报(自然科学版)》
CAS
2019年第1期45-49,共5页
基金
国家自然科学基金资助项目(31370118
31770134)
文摘
目的:为揭示真菌紫杉醇合成分子机制.方法:克隆了产紫杉醇内生真菌枝状枝孢霉MD2的候选基因A00981,该基因DNA和cDNA序列分别为969 bp和894 bp;其编码蛋白含有298个氨基酸、无跨膜结构和信号肽,与酰基辅酶A脱氢酶(ACAD)具有73%的一致性.进一步构建该基因的超表达载体pTFC-A00981,并转化枝状枝孢霉MD2,共获得9株转基因菌株.结果:Southern blot分析证明其中5株转基因菌株的外源基因是以单拷贝方式插入.结论:该结果为深入分析超表达候选基因A00981对枝状枝孢霉MD2紫杉烷类合成的影响奠定了基础.
关键词
枝状枝孢霉md2
紫杉醇
基因克隆
转基因菌株
Keywords
Cladosporium cladosporioides
md
2
taxol
gene clone
transgenic strain
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
Q93 [生物学—微生物学]
下载PDF
职称材料
题名
产紫杉醇内生真菌枝状枝孢霉MD2的发酵条件优化
被引量:
14
2
作者
苗莉云
张鹏
周蓬蓬
余龙江
机构
运城学院生命科学系
华中科技大学生命科学与技术学院资源生物与生物技术研究所
湖北省农业科学研究院经济作物研究所
出处
《微生物学通报》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第6期1033-1040,共8页
基金
国家自然科学基金项目(No.20776058
20906036)
+1 种基金
中国博士后科学基金项目(No.20100471183)
运城学院自然科学基金项目(No.CY2012004)
文摘
【目的】通过优化内生真菌枝状枝孢霉MD2的发酵条件,提高10-去乙酰巴卡亭Ⅲ(10-DAB)和紫杉醇(Taxol)的产量。【方法】采用单因素试验分析不同的培养基初始pH值、培养温度、摇床转速和培养时间对10-DAB和紫杉醇产量的影响,优化枝状枝孢霉MD2的培养条件;以YES为基本培养基,采用单因素试验和正交试验分析添加苯甲酸钠、苯丙氨酸、丝氨酸和甘氨酸4种前体物对10-DAB和紫杉醇产量的影响,优化枝状枝孢霉MD2的培养基组分。【结果】优化后发酵条件为:在初始pH为5.0的300 mL YES培养基中,添加15 mg/L苯甲酸钠、25 mg/L苯丙氨酸、5 mg/L丝氨酸、15 mg/L甘氨酸,接种1 mL枝状枝孢霉MD2的孢子悬液(107 108个孢子/mL),28.0°C、220 r/min发酵培养12 d。在此条件下,枝状枝孢霉MD2的生物量、10-DAB和紫杉醇的产量分别为15.5 g/L、471.5μg/L和569.5μg/L,与初始发酵条件相比,分别提高了1.3、3.6和3.4倍。【结论】首次获得了枝状枝孢霉MD2生产10-DAB和紫杉醇的较适摇瓶发酵条件,可为进一步放大发酵培养提供参考。
关键词
内生真菌
枝状枝孢霉md2
10-去乙酰巴卡亭Ⅲ
紫杉醇
发酵条件
Keywords
Endophytic fungi, Cladosporium cladosporioides
md
2
, 10-Deactyl baccatin III,Taxol, Fermentation conditions
分类号
TQ920.6 [轻工技术与工程—发酵工程]
原文传递
题名
紫杉醇合成相关候选基因A02725的克隆及转基因菌株的构建
被引量:
1
3
作者
刘盼
柯友胜
周兰
德格
裴婷
甘喆
李浩东
张鹏
机构
中南民族大学生命科学学院
出处
《基因组学与应用生物学》
CAS
CSCD
北大核心
2020年第1期145-150,共6页
基金
国家自然科学基金资助项目(No.31370118,No.31770134)
湖北省本科高校“生物技术专业综合改革”试点项目(GJZ15006)共同资助。
文摘
真菌紫杉醇合成相关基因的功能研究是揭示真菌紫杉醇合成机制的关键。为了揭示产紫杉醇内生真菌枝状枝孢霉MD2的候选基因A02725对宿主紫杉烷类合成的作用,本研究克隆了候选基因A02725的DNA全长序列(1 524 bp);生物信息学预测结果表明该基因编码蛋白为亲水蛋白,含508个氨基酸,无信号肽和跨膜结构,与牻牛儿基牻牛儿基焦磷酸合成酶(geranylgeranyl pyrophosphate synthase,GGPPS)具有79%的一致性;进一步构建该基因的超表达载体并转化枝状枝孢霉MD2,通过抗性筛选以及Southern blot检测,共获得27株转基因菌株,其中5株转基因菌株的外源基因是以单拷贝方式整合。该结果为深入分析超表达候选基因A02725对宿主紫杉烷类合成的影响奠定了基础。
关键词
枝状枝孢霉md2
紫杉醇
候选基因
转基因菌株
Keywords
Cladosporium cladosporioides
md
2
Taxol
Candidate gene
Transgenic strain
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
枝状枝孢霉MD2的候选基因A00981的克隆及转基因菌株的构建
张鹏
刘盼
周兰
裴婷
甘喆
李浩东
宋发军
《中南民族大学学报(自然科学版)》
CAS
2019
0
下载PDF
职称材料
2
产紫杉醇内生真菌枝状枝孢霉MD2的发酵条件优化
苗莉云
张鹏
周蓬蓬
余龙江
《微生物学通报》
CAS
CSCD
北大核心
2013
14
原文传递
3
紫杉醇合成相关候选基因A02725的克隆及转基因菌株的构建
刘盼
柯友胜
周兰
德格
裴婷
甘喆
李浩东
张鹏
《基因组学与应用生物学》
CAS
CSCD
北大核心
2020
1
原文传递
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