湖北枫杨总黄酮对非小细胞肺癌A549细胞迁移、侵袭和铁死亡的影响

目的:探究湖北枫杨总黄酮对非小细胞肺癌A549细胞迁移与侵袭及铁死亡的影响及机制。方法:将A549细胞分为:对照组,低、中、高剂量(100、150和200μg/mL)枫杨总黄酮组,铁死亡抑制剂liproxstatin-1(Lip-1)组,Lip-1+高剂量枫杨总黄酮组。采用CCK-8法检测细胞活力;划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移及侵袭能力;谷胱甘肽(GSH)试剂盒检测细胞脂质过氧化水平;RT-qPCR检测细胞溶质载体家族7成员11(SLC7A11)和谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)的mRNA水平;Western blot检测SLC7A11、GPX4、Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1(Keap1)、核因子E2相关因子2(Nrf2)和血红素加氧酶1(HO-1)的蛋白表达水平。结果:与对照组相比,各剂量枫杨总黄酮组A549细胞活力降低(P<0.01),迁移及侵袭能力降低(P<0.01),GSH含量显著降低(P<0.01),SLC7A11和GPX4 mRNA及蛋白表达水平显著降低(P<0.01),Nrf2和HO-1蛋白表达水平显著降低(P<0.01),Keap-1蛋白表达水平升高(P<0.01);加入铁死亡抑制剂后,与高剂量枫杨总黄酮组相比,A549细胞活力显著升高(P<0.01),SLC7A11、GPX4、Nrf2、HO-1蛋白表达水平升高,Keap-1蛋白表达水平下降(P<0.01)。结论:湖北枫杨总黄酮能抑制A549细胞迁移与侵袭并且通过调控Keap-1/Nrf2/HO-1通路诱导肺癌A549细胞铁死亡。

湖北枫杨总黄酮通过调控PI3K/AKT信号通路抑制成纤维细胞样滑膜细胞的迁移和侵袭

目的:观察湖北枫杨总黄酮(PHSTF)对人类风湿成纤维细胞样滑膜细胞(MH7A细胞)迁移和侵袭的抑制作用并初步探讨其可能作用机制。方法:将MH7A细胞分为分为对照组(不做任何处理)、低剂量(6.25 mg/L)PHSTF组、中剂量(12.5 mg/L)PHSTF组、高剂量(25 mg/L)PHSTF组、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)激动剂740Y-P(10μmol/L)组和740Y-P(10μmol/L)+高剂量(25 mg/L)PHSTF组。采用CCK-8法检测MH7A细胞活力;划痕实验和Transwell实验检测MH7A细胞的迁移和侵袭;Western blot检测基质金属蛋白酶2(MMP-2)、MMP-9、PI3K、p-PI3K、AKT和p-AKT蛋白水平。结果:与对照组相比,各剂量PHSTF组MH7A细胞活力显著降低(P<0.05),划痕愈合面积显著减小(P<0.01),迁移和侵袭至下室的细胞显著减少(P<0.01),MMP-2和MMP-9蛋白表达水平及p-PI3K/PI3K和p-AKT/AKT比值显著降低(P<0.01)。与高剂量PHSTF组相比,PI3K激动剂740Y-P显著提高了PHSTF处理下MH7A细胞的迁移和侵袭能力(P<0.01),也使得MMP-2和MMP-9蛋白表达水平及p-PI3K/PI3K和p-AKT/AKT比值显著升高(P<0.01)。结论:PHSTF能通过调控PI3K/AKT信号通路抑制MH7A细胞迁移和侵袭。

枫杨总黄酮通过抑制中性粒细胞胞外陷阱网的释放减轻大鼠类风湿关节炎

目的探讨枫杨总黄酮(PHSTF)干预类风湿关节炎(RA)的机制,为治疗类风湿关节炎提供新的理论基础。方法将25只雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组(CIA组)、枫杨总黄酮低剂量组[CIA+PHSTF(45 mg/kg)]、枫杨总黄酮高剂量组[CIA+PHSTF(90 mg/kg)]、雷公藤多苷片组[CIA+TPG(10 mg/kg)],5只/组。除正常组外,对其余大鼠采用二次免疫法建立CIA大鼠模型。二次免疫结束后,枫杨总黄酮组和雷公藤多苷片组按相应剂量灌胃给药,1次/d,连续4周。采用ELISA检测血清中细胞因子(TNF-α、IL-1β)的水平;HE染色检测踝关节组织损伤情况;免疫组化(IHC)检测踝关节中性粒细胞胞外陷阱网(NETs)标志物瓜氨酸化组蛋白3(Cit-H3)的表达水平。建立细胞模型,设立枫杨总黄酮不同剂量组(0、12.5、25、50、100、200μg/mL),利用CCK-8探索PHSTF用药浓度,采用迪夫快速染色法观察中性粒细胞的形态;设立对照组(Control),佛波酯(PMA)刺激中性粒细胞模拟NETs形成建立模型组(PMA),枫杨总黄酮低剂量组[CIA+PHSTF(100μg/mL)],枫杨总黄酮高剂量组[CIA+PHSTF(200μg/mL)]。Western blotting检测枫杨总黄酮干预后NETs标志性蛋白Cit-H3,肽酰基精氨酸脱亚胺酶4(PADI4),中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)以及髓过氧化物酶(MPO)的表达,免疫荧光检测Cit-H3的表达观察NETs形成。结果体内实验中,与模型组相比较枫杨总黄酮可明显改善CIA大鼠踝关节的肿胀程度(P<0.05),降低血清中炎症因子水平(P<0.05),显著改善踝关节组织病理程度,降低血清以及踝关节软骨中性粒细胞胞外诱捕网浓度,抑制中性粒细胞胞外诱捕网的释放(P<0.05)。体外实验中,枫杨总黄酮并未对中性粒细胞活性有明显影响(P<0.01),此外枫杨总黄酮显著抑制PMA诱导的中性粒细胞胞外诱捕网的释放(P<0.05)。结论枫杨总黄酮可以通过抑制NETs的产生,达到干预类风湿关节炎的目的。

湖北枫杨总黄酮对非小细胞肺癌A549细胞的影响及机制研究

目的观察湖北枫杨总黄酮对非小细胞肺癌A549细胞的抑制作用,并探讨其可能作用机制。方法将A549细胞分为对照组和枫杨总黄酮低、中、高剂量组,分别用相应培养基培养,采用CCK-8法检测细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期,Western blot检测凋亡相关蛋白Fas、Bax、Bcl-2、Cleaved Caspase-3及周期相关蛋白Cyclin D1、P27表达。结果与对照组比较,枫杨总黄酮各剂量组细胞凋亡率明显升高(P<0.01),G_(0)/G_(1)期细胞比例明显升高(P<0.01),S期细胞比例明显降低(P<0.01),Fas、Bax、Cleaved Caspase-3、P27蛋白表达明显升高,Cyclin D1蛋白表达明显降低(P<0.05,P<0.01),枫杨总黄酮中、高剂量组细胞Bcl-2蛋白表达明显降低(P<0.01)。结论湖北枫杨总黄酮能抑制A549细胞增殖,其机制可能与激活线粒体和Fas介导的死亡受体通路以诱导A549细胞凋亡、促进A549细胞G_(0)/G_(1)期阻滞有关。

基于Fas/FasL介导的线粒体凋亡探讨枫杨总黄酮治疗类风湿关节炎的作用机制

目的:探讨枫杨总黄酮(PHSTF)通过Fas/FasL介导的线粒体凋亡治疗类风湿关节炎(RA)的可能机制。方法:体外培养胶原诱导型关节炎(CIA)-成纤维细胞样滑膜细胞(FLS),CCK-8检测PHSTF对细胞存活率的影响;流式细胞术检测PHSTF对细胞凋亡的影响;Western Blot检测Fas、FasL、Bax、Bcl-2、t-Bid、C-Caspase8、C-Caspase9、C-Caspase3蛋白表达,加入Fas抑制剂KR-33493后进一步检测PHSTF对相关蛋白表达的影响。体内实验采用Ⅱ型胶原诱导法构建CIA大鼠复制RA模型,设立Control组、Model组、PHSTF组、TG组,每组8只,评估大鼠关节炎指数(AI)和足趾肿胀度;ELISA检测血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β、IL-6含量;HE染色观察膝关节病理学变化;Western Blot检测滑膜组织Fas/FasL介导的线粒体凋亡相关蛋白的表达。结果:体外实验显示,PHSTF能够诱导CIA-FLS细胞凋亡(P<0.01);与Control组比较,PHSTF各浓度组Fas、FasL、Bax、t-Bid、C-Caspase8、C-Caspase9、C-Caspase3蛋白表达均显著增加、抗凋亡蛋白Bcl-2表达显著降低(P<0.05,P<0.01);加入Fas抑制剂KR-33493干扰Fas信号通路后,逆转了Fas信号通路相关蛋白的表达。体内实验显示,与Model组比较,PHSTF、TG组AI评分和足趾肿胀度显著降低(P<0.05),膝关节病理变化得到改善,血清中TNF-α、IL-1β、IL-6含量显著降低(P<0.01);Fas、FasL、Bax、t-Bid、C-Caspase8、C-Caspase9、C-Caspase3蛋白表达均增加、Bcl-2蛋白表达显著降低(P<0.01)。结论:PHSTF能够通过激活Fas/FasL介导的线粒体凋亡,抑制CIA-FLS细胞增殖、促进凋亡,改善CIA大鼠关节炎表型,起到治疗RA的作用。