枯草溶菌素转换酶9 siRNA抑制氧化型低密度脂蛋白诱导的THP-1源性巨噬细胞炎症因子表达

目的观察枯草溶菌素转化酶9 siRNA对氧化型低密度脂蛋白诱导的THP-1源性巨噬细胞炎症因子表达的影响。方法应用Lipofectamine 2000分别转染80 nmol/L浓度枯草溶菌素转化酶9 siRNAs进THP-1源性巨噬细胞中,作用24 h后加入80 mg/L氧化型低密度脂蛋白处理24 h,采用逆转录聚合酶链反应检测白细胞介素1α、白细胞介素6和肿瘤坏死因子αmRNA的表达。结果 80 mg/L氧化型低密度脂蛋白刺激THP-1源性巨噬细胞24 h后,白细胞介素1α、白细胞介素6和肿瘤坏死因子-αmRNA的表达明显增加(P<0.05),而枯草溶菌素转化酶9 siRNA转染组THP-1源性巨噬细胞白细胞介素1α、白细胞介素6和肿瘤坏死因子αmRNA的表达相对于氧化型低密度脂蛋白组明显降低(P<0.05)。结论枯草溶菌素转化酶9 siRNA能够抑制氧化型低密度脂蛋白诱导的THP-1源性巨噬细胞炎症因子表达,枯草溶菌素转化酶9可能参与了炎症反应的调节。

枯草溶菌素转换酶9在大鼠心肌缺血再灌注损伤中的表达变化

目的:研究枯草溶菌素转换酶9(proproteinconvertase subtilisin/kexin type 9,PCSK9)在大鼠心肌缺血再灌注损伤中的表达变化。方法:采用大鼠心肌缺血再灌注损伤模型,大鼠分4组:对照组(n=5)、实验组分别为缺血45 min再灌注6 h、12 h及24 h组(各组n=5)。实验终点时,收集血液及缺血区心肌组织,全自动生化分析仪测定心肌酶谱(CK、CK-MB和LDH),HE染色观察心肌组织病理学改变,分别采用实时定量PCR及Western blot方法检测心肌PCSK9 mRNA及蛋白水平表达的改变。结果:与对照组相比,实验组CK、CK-MB和LDH在6 h和12 h组均明显升高有统计学意义,24 h组恢复正常;HE染色发现心肌组织病理损伤随着再灌注时间延长而加重;实验各组心肌PCSK9 mRNA及蛋白水平表达均显著高于对照组,并且随着再灌注时间的延长表达水平逐渐增高。结论:PCSK9可能参与心肌缺血再灌注损伤的病理生理过程。

前蛋白转换酶枯草溶菌素9抑制剂降低脂蛋白(a)作用的机制

脂蛋白(a)(lipoprotein(a),Lp(a))在结构上与低密度脂蛋白相似,是动脉粥样硬化性心血管疾病发病的独立危险因素和潜在的治疗靶点。前蛋白转换酶枯草溶菌素9(proprotein convertase subtilisin/kexin type 9,PCSK9)抑制剂可有效降低Lp(a)的循环水平并减少心血管事件风险。本文综合近年来的相关研究,阐述PCSK9抑制剂减少Lp(a)合成和促进其降解的相关机制,分析该领域所面临的挑战和未来的发展方向。

枯草溶菌素转换酶9与血脂代谢调节

高胆固醇血症及其引起的冠心病已成为威胁人类健康的最重要因素，血脂代谢相关研究日益受到重视。最近的研究表明，一种前蛋白转换酶家族成员——枯草溶菌素转换酶9（proprotein convertase kexin type9，PCSK9）在血脂代谢调节中起着重要作用。PCSK9基因的表达和突变与低密度脂蛋白受体（low-density lipoprotein receptor，LDLR）含量密切相关，PCSK9高度表达能促进LDLR降解，从而提高血浆LDL水平；反之，PCSK9基因抑制则引起血浆LDL水平降低。因此，通过研究PCSK9的作用机制，有望开发出治疗高胆固醇血症、控制高血脂和预防冠心病的新型药物。

枯草溶菌素转换酶9对缺血再灌注心肌内质网应激的影响及机制研究

目的研究枯草溶菌素转换酶9(PCSK9)对缺血再灌注大鼠心肌内质网应激的影响及可能的作用机制,为临床研究提供新的研究方向。方法选取健康SD雄性30只,建立心肌缺血再灌注模型,按照随机数字表法分为假手术组、模型组和PCSK9组,各10只。建模成功24 h后,PCSK9组大鼠给予30μg PCSK9皮下注射,假手术组、模型组大鼠给予等体积的生理盐水进行皮下注射。检查各组大鼠用药干预结束后1 d LVEDP、心肌梗死面积率、LDH、CK-MB、CK、细胞凋亡率、增殖、GRP78、CHOP、cleaved-caspase3水平。结果PCSK9组干预后LVEDP[(8.83±0.28)mm Hg(1 mm Hg=0.133 kPa)]、心肌梗死面积率[(15.21±4.75)%]低于模型组干预后[(13.65±0.38)mm Hg、(37.35±8.16)%],高于假手术组干预后[(7.72±0.43)mm Hg、0%,F=731.290,t=7.420,均P<0.001];PCSK9组干预后LVSP[(127.94±7.67)mm Hg]高于模型组干预后[(79.84±6.44)mm Hg],低于假手术组干预后[(145.53±9.08)mm Hg,F=189.830,P<0.001]。模型组、PCSK9组干预后细胞凋亡率、LDH、CK-MB、CK水平以及GRP78、CHOP、cleaved-caspase3蛋白表达高于假手术组,细胞增殖率低于假手术组(均P<0.05)。结论PCSK9对缺血再灌注大鼠心肌内质网应激有抑制作用,通过调控GRP78、CHOP、cleaved-caspase3蛋白,改善大鼠心功能和心肌梗死状况。

血浆PCSK9水平预测急性ST段抬高型心肌梗死近期MACEs的临床价值

目的 探讨前枯草溶菌素前蛋白转换酶9(proprotein convertase subtilisin/kexin type 9,PCSK9)水平预测急性ST段抬高型心肌梗死(ST-segmentelevation myocardial infarction,STEMI)患者近期主要不良心血管事件(major adverse cardiovascular events,MACEs)的临床价值。方法 连续招募STEMI患者90例,所有患者入院后均接受经皮冠状动脉介入治疗(percutaneous coronary intervention,PCI),抽取静脉血采用酶联免疫吸附实验法检测外周血PCSK9水平,同时依据PCSK9中位数将患者分为高PCSK9组(n=45)及低PCSK9组(n=45),所有患者出院后均规律随访,记录患者MACEs,最长随访时间为30 d,通过ROC曲线评价PCSK9预测STEMI患者近期MCAEs的临床价值。结果 高PCSK9组年龄、低密度脂蛋白胆固醇(low-density lipoprotein cholesterol,LDL-C)和心肌肌钙蛋白Ⅰ(cardiac troponinⅠ,cTnⅠ)水平、MACEs发生率高于低PCSK9组,无事件生存时间短于低PCSK9组(P<0.05)。PCSK9水平与LDL-C和cTnⅠ呈正相关,与无事件生存时间呈负相关(P<0.05)。PCSK9预测STEMI患者MACEs的曲线下面积为0.843,95%CI:0.722~0.964。高PCSK9水平是影响STEMI患者30 d内MACEs的独立危险因素(P<0.05)。结论 高PCSK9水平患者MACEs发生率高,无事件生存时间短,且PCSK9与机体炎症指标及血脂紊乱程度有关,其是预测STEMI患者介入术后30 d内MACEs的潜在标记物,也是影响MACEs发生的独立危险因素。

前蛋白转换酶枯草溶菌素9纳米疫苗的构建与细胞吞噬效率的体外实验研究

目的:制备前蛋白转换酶枯草溶菌素9(proprotein convertase subtilisin/kexin type 9,PCSK9)纳米疫苗,并初步探讨树突状细胞(dendritic cells,DC 2.4)对纳米疫苗的体外吞噬效率。方法:选取PCSK9207-223为抗原肽,牛血清白蛋白(bovine se-rum albumin,BSA)为载体蛋白,用"还原-热聚-氧化"法将BSA分子转变为BSA纳米颗粒(BSA nanoparticle,BN),PCSK9多肽链接在BN表面合成纳米疫苗(BSA-PCSK9 nanoparticle,BPN),PCSK9多肽与分子BSA直接链接合成分子疫苗(BSA-PCSK9,BP)。动态光散射测定BN、BPN粒径和电位大小,透射电子显微镜观察形貌;SDS-PAGE电泳分析抗原负载情况;检测BPN不同时间点的粒径变化反映其在生理环境下的稳定性;BPN与DC 2.4细胞共孵育24 h,增强型细胞计数试剂盒-8(cell counting kit-8,CCK8)检测DC2.4细胞活性,反映BPN生物相容性;流式细胞仪检测DC 2.4对纳米疫苗的吞噬情况。结果:合成的BPN粒径为(68.2±3.1)nm、电位为(?14.8±0.6)mV,透射电子显微镜观察显示BPN近球形;SDS-PAGE电泳结果显示BPN相对分子质量增加,证明短肽链接成功;模拟生理环境下,BPN粒径在144 h内保持稳定;增强型CCK8检测结果显示DC2.4细胞活性均大于100%;流式细胞仪检测结果显示,相比BP,DC 2.4对BPN的吞噬效率更高。结论:BPN体外稳定性及生物相容性好,易于被DC吞噬。

PCSK9-siRNA在抗ox-LDL诱导的THP-1源性巨噬细胞凋亡中对Bax、Bcl-2表达的影响

目的研究PCSK9 siRNA在抗ox-LDL诱导的THP-1源性巨噬细胞凋亡中对Bax、Bc l-2表达的影响。方法用不同浓度ox-LDL处理THP-1源性巨噬细胞不同时间,免疫印迹法检测Bax、Bcl-2表达变化。应用L ipo-fectamine2000分别转染30、50 nmol/L和80 nmol/LPCSK9 siRNAs进THP-1源性巨噬细胞中,作用24 h后加入ox-LDL处理48 h,免疫印迹法分析细胞Bax、Bc l-2表达,Hoechst33258染色观察形态评价细胞凋亡。结果随着ox-LDL浓度的增加,Bax蛋白表达上调,而Bcl-2蛋白表达下调,呈浓度依赖性,80μg/mLox-LDL处理组作用最为明显;80μg/mLox-LDL处理THP-1源性巨噬细胞不同时间后,Bax蛋白表达上调,而Bcl-2蛋白表达下调,呈时间依赖性,48 h处理组作用最为明显;PCSK9 siRNA能明显下调Bax蛋白表达,上调Bcl-2蛋白表达,且均呈浓度依赖性;Hoechst33258染色显示,PCSK9 siRNA转染组细胞凋亡明显减少。结论 PCSK9 siRNA在抗ox-LDL诱导的THP-1源性巨噬细胞凋亡中下调促凋亡蛋白Bax表达,上调抗凋亡蛋白Bcl-2表达。

PCSK9-siRNA对ox-LDL诱导的THP-1源性巨噬细胞凋亡中Caspase-3表达的影响

目的:研究枯草溶菌素转化酶9(PCSK9)-siRNA对ox-LDL诱导的THP-1源性巨噬细胞凋亡中Caspase-3蛋白表达的影响。方法:用不同浓度ox-LDL处理THP-1源性巨噬细胞不同时间,Western blot检测Caspase-3蛋白表达变化。应用Li-pofectamine2000分别转染不同浓度PCSK9-siRNA进THP-1源性巨噬细胞中,作用24 h后加入ox-LDL处理48 h,Westernblot分析细胞Caspase-3蛋白表达。结果:随着ox-LDL浓度的增加,Caspase-3蛋白表达上调,呈浓度依赖性,80 mg/L ox-LDL处理组作用最为明显;80 mg/L ox-LDL处理THP-1源性巨噬细胞不同时间后,Western blot检测发现Caspase-3蛋白表达上调,呈时间依赖性,48 h处理组作用最为明显;PCSK9-siRNA能明显下调Caspase-3蛋白表达,呈浓度依赖性。结论:PC-SK9-siRNA抑制ox-LDL诱导的THP-1源性巨噬细胞凋亡与凋亡执行酶Caspase-3蛋白表达下调有关。

PCSK9 siRNA对THP-1源性巨噬细胞CD36、SR-A1及SR-B1表达的影响

目的:研究前蛋白转换酶枯草溶菌素9(PCSK9)siRNA对THP-1源性巨噬细胞CD36、SR-A1及SR-B1表达的影响。方法:以THP-1源性巨噬细胞为研究对象,应用Lipofectamine 2000转染不同浓度PCSK9 siRNA进THP-1源性巨噬细胞中,RT-PCR及Western blot筛选出最有效的siRNA,再转染入THP-1源性巨噬细胞,24 h后加入ox-LDL处理24 h,采用油红O染色检测细胞内脂质蓄积情况,RT-PCR分析细胞CD36、SR-A1及SR-B1表达。结果:浓度为80 nmol/L的PCSK9 siRNA基因沉默效应最佳;油红O染色结果表明ox-LDL组细胞内脂质蓄积情况最为明显,PCSK9 siRNA转染组次之;PCSK9 siRNA转染组CD36 mRNA表达水平相对于ox-LDL组降低(P<0.05),而ox-LDL组和PCSK9 siRNA转染组SR-A1及SR-B1 mRNA表达无明显差异。结论:PCSK9可能通过影响摄取脂质的细胞膜表面受体CD36表达,参与动脉粥样硬化的发生发展。

PCSK9抑制剂在缺血性卒中应用的研究进展

低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)升高是动脉粥样硬化的重要危险因素,降低LDL-C可有效减少心脑血管疾病的风险。前蛋白转换酶枯草溶菌素kexin 9型(PCSK9)抑制剂已被证实可以改善心血管疾病的预后。目前临床上已经广泛应用于冠状动脉硬化性心脏病急性期及二级预防的治疗,但其在缺血性脑卒中的应用及对卒中预后的影响报道较少。该文对PCSK9抑制剂在缺血性卒中应用的研究进展作一综述。

后他汀时代动脉粥样硬化性心血管疾病患者降脂治疗的研究进展

目前冠心病患者的发病率逐年增加,动脉粥样硬化是其主要危险因素,降低低密度脂蛋白胆固醇的水平成为防治动脉粥样硬化的关键方法之一。关于血脂管理,大致分为三个时代:他汀前时代、他汀时代和后他汀时代。随着血脂管理指南的更新,低密度脂蛋白胆固醇的靶目标值逐渐降低,越来越多的降脂药物可供选择,在他汀的基础上联合降脂治疗已成为动脉粥样硬化性心血管疾病患者未来的趋势。

PCSK9抑制剂对CHIP患者治疗策略转变的意义与展望

高危复杂冠心病患者(CHIP)因冠脉病变解剖复杂或病情危重,传统药物治疗效果有限,往往需要高风险的复杂冠脉介入治疗。近年来,前蛋白转换酶枯草溶菌素9(PCSK9)抑制剂在冠心病的心血管不良事件获益上表现优异,对于CHIP这类特殊患者,PCSK9抑制剂的应用是否可减少支架植入,甚至对部分CHIP患者实现“药物血运重建”?乃至改变CHIP患者治疗策略选择,降低其需要高危介入治疗的风险,以及PCSK9抑制剂在CHIP患者的最佳应用时机,将是未来研究的热点。

PCSK9影响糖尿病大血管粥样硬化病变的研究进展

糖尿病与心、脑、肾等生命器官疾病有着极为密切的联系,与心血管疾病的关系尤为密切,可以有大血管并发症,也可以有微血管并发症等。前蛋白转换酶枯草溶菌素9(proprotein convertase subtilisin kexin type 9,PCSK9),位于染色体1p32,长22kb,12个外显子编码一个692-氨基酸蛋白,主要由肝脏分泌,但在其他器官中也有少量表达。