枯草芽孢杆菌β-葡聚糖酶基因的克隆和表达

背景：β-葡聚糖已广泛用于保健和临床治疗。通过酶水解的方法得到分子量大小适中的β-葡聚糖，这一研究日益受到重视。目的：实验旨在构建高表达β-葡聚糖酶的工程菌。并对该酶活性及热稳定性做出分析，为今后能够利用到临床医学奠定基础。方法：通过克隆得到枯草芽孢杆菌β-葡聚糖酶的基因，利用分子生物学技术将β-葡聚糖酶基因与表达载体pET28b＋构建重组质粒后导入大肠杆菌中构建工程菌株。利用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导其表达目的蛋白，通过镍离子螯合树脂纯化得到目的蛋白。结果与结论：实验成功编码枯草芽孢杆菌β-葡聚糖酶的基因被克隆到大肠杆菌中，并能高效的表达。根据酶活力测定发现，该酶在50-60℃有较高的酶活性，在50℃最高。β-葡聚糖酶在30—40℃保持较高的热稳定性。实验初步发现，β-葡聚糖酶的工程菌表达产物能分解它的底物，但是否适用于临床治疗需要进行更多的研究。