枯草芽孢杆菌1000亿芽孢/g可湿性粉剂防治稻瘟病药效试验

在水稻的拔节期、始穗期、齐穗期分别施用不同剂量的生物药剂枯草芽孢杆菌1 000亿芽孢/g可湿性粉剂,可有效控制稻瘟病的发生,促进水稻增产。同时,应根据水稻稻瘟病实际发生情况选择不同的药剂处理,以降低防治成本,达到节本增效的目的。

枯草芽孢杆菌CH-1降解羽毛产物对Cr(Ⅵ)的还原作用

本研究旨在探索一种对环境友好的方法以减少重金属六价铬Cr(Ⅵ)的毒性。采用枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)CH-1发酵羽毛,制备出富含半胱氨酸的羽毛发酵液(Feather Fermentation Broth,FFB)。实验结果显示FFB能够有效地将有毒的六价铬还原为相对无害的三价铬。通过对FFB的β-角蛋白酶酶活性、半胱氨酸浓度以及对六价铬Cr(Ⅵ)的还原率的测定。我们发现FFB中β-角蛋白酶酶活性在21 h左右达到最大值,而半胱氨酸含量在36 h达到最高值,Cr(Ⅵ)的还原效果最佳时间也是36 h。值得注意的是,即使经过高压高温处理,FFB对Cr(Ⅵ)的还原力并未受到影响,表明还原过程不依赖于生物酶的作用。进一步实验,将FFB上清原液浓缩5倍后处理重铬酸钾溶液,发现浓缩液的还原效果是原始上清液效果的1.5倍。研究表明枯草芽孢杆菌CH-1能较好地降解羽毛废弃物,水解产物中含大量半胱氨酸,对Cr(Ⅵ)具有显著的还原能力。综上所述,本研究提供了一种使用枯草芽孢杆菌CH-1无公害处理羽毛废弃物的新策略,并为其在循环农业生态系统中的应用提供了理论依据和精确计算方法。这一发现对于实现农业废弃物资源化利用,以及环境中有毒六价铬的安全处理具有重要意义。

枯草芽孢杆菌Czk1与化学杀菌剂复配对橡胶树炭疽病和白粉病的防效测定

为使生防菌部分甚至完全替代化学药剂来防治植物病害,降低化学药剂使用量,削弱化学药剂对生态环境造成的破坏,本研究根据橡胶树炭疽病和白粉病分级标准,对田间施药前后橡胶树叶片进行取样调查。结果表明,对橡胶树炭疽病防效最好的复配剂是Czk1+25%咪鲜胺复配剂中浓度,防效为75.18%。Czk1+25%丙环唑戊唑醇复配剂高浓度的防效为58.24%,低于Czk1+25%咪鲜胺复配剂中浓度,但两者之间的差异不显著。Czk1+25%丙环唑戊唑醇复配剂中浓度、Czk1+25%咪鲜胺复配剂低浓度的防效与对照药剂16%百菌清咪鲜胺三唑酮的防效未有显著差异,分别为39.02%、35.99%和25.57%,但均显著低于Czk1+25%咪鲜胺复配剂中浓度;防治橡胶树白粉病效果较好的复配剂是Czk1+25%丙环唑戊唑醇复配剂中浓度,防效为71.34%。Czk1+25%丙环唑戊唑醇复配剂高浓度、Czk1+25%咪鲜胺复配剂中和低浓度,防效分别为59.54%、64.27%和59.51%,显著低于Czk1+25%丙环唑戊唑醇复配剂中浓度,4个参试浓度复配剂的防效均显著优于对照药剂16%百菌清咪鲜胺三唑酮;增效作用研究结果表明,对防治橡胶树炭疽病和白粉病增效作用最强的复配剂均为Czk1+25%咪鲜胺复配剂中浓度,Czk1+25%丙环唑戊唑醇复配剂只对防治白粉病表现出较好的增效作用,对防治炭疽病的增效作用不明显。Czk1+25%咪鲜胺复配剂中浓度和Czk1+25%丙环唑戊唑醇复配剂中浓度分别对橡胶树炭疽病和白粉病表现出了较好的防效,同时实现了化学农药的减量和增效作用,为开发绿色、高效、可持续的新型橡胶树两种病害防治手段提供了理论支持和实践经验。

枯草芽孢杆菌XF-1提取物对11种植物病原菌的抑制作用

采用盐酸和甲醇抽提法,提取了枯草芽孢杆菌XF-1(Bacillus subtilis XF-1)的抑菌物质。以该提取物处理根肿菌孢子2 d,有50%孢子活性被抑制;处理9 d后,孢子萌发相对抑制率始终保持在90%以上。提取物对三七根腐病菌、水稻纹枯病菌、禾谷镰刀菌、魔芋基腐菌、烟草赤星菌生长抑制率分别为71.97%、62.23%、60.96%、60.70%和57.92%。

枯草芽孢杆菌XF-1中脱乙酰几丁质酶在大肠杆菌中的表达及其抑菌活性

根据脱乙酰几丁质酶同源基因序列设计引物,扩增、克隆和测序了枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis菌株XF-1的脱乙酰几丁质酶基因(csn)。该基因编码区为834bp,编码由277个氨基酸组成的约30kD的蛋白质,其基因序列与枯草芽孢杆菌菌株B168的脱乙酰几丁质酶基因的相似性达到99%,氨基酸序列相似性为98%,在第19、47、60、256和257位的氨基酸发生了变化,分别由异亮氨酸代替了菌株B168脱乙酰几丁质酶中的甲硫氨酸、缬氨酸代替了谷氨酸、苏氨酸代替了异亮氨酸、天冬氨酸代替了谷氨酸、赖氨酸代替了天冬酰胺。菌株XF-1对稻瘟病菌Magnaporthe oryzae和芸薹根肿菌Plasmodiophora brassicae有抑制作用,而菌株B168没有。菌株XF-1和B168的csn基因在大肠杆菌Escherichia coli中的表达产物均具有脱乙酰几丁质酶活性,但前者的表达产物对稻瘟病菌及芸薹根肿菌具有抑制作用,而后者没有。表明脱乙酰几丁质酶是XF-1抑制根肿病作用机制之一,且上述5个氨基酸替代可能与抑菌机制有关。

枯草芽孢杆菌C1-B941的D-核糖发酵中间试验

使用转酮醇酶变异株—枯草芽孢杆菌C1－B941进行了D－核糖发酵中间试验。3000L发酵罐试验结果表明，发酵培养基中的葡萄糖浓度为18％时，发酵周期约为64h，发酵转化率达36．84％。发酵液经离子交换树脂纯化后，可以直接用于生产VBZ合成的中间体—N－D－核糖醇基－3，4－二甲苯胶。

枯草芽孢杆菌XF-1膏状悬浮剂增稠剂的筛选

生物相容性、贮存稳定性和析水性研究表明,先糊化6%可溶性淀粉成初级增稠剂,再在100 mL初级增稠剂中加入1 g枯草芽孢杆菌XF-1原粉和35 g可溶性淀粉所组成的初级悬浮剂,具有很好的热稳定性和耐冷性,XF-1菌体数达9.30×1010 CFU/g。

枯草芽孢杆菌BI1产抗真菌脂肽培养条件的优化

采用Plackett—Burman设计对枯草芽孢杆茵BI1产抗菌脂肽培养条件中相关影响因素(即种龄、接种量和pH值)的效应进行评价并筛选出重要的影响因素,然后用Box-Behnken设计及响应面分析确定了重要影响因素的最佳条件,优化后的溶血透明圈直径达到17.5 mm,比优化前的13.75 mm提高了27.27%。

枯草芽孢杆菌BI1-1产抗白念珠菌物质培养条件的优化

目的对发酵产抗白念珠菌物质的培养基及培养条件进行优化,使抗菌物质的产量得到提高。方法以基本培养基为基础,利用单因素实验,确定碳氮源。采用Plackett-Burman设计对培养条件中相关影响因素的效应进行评价并筛选出重要的影响因素。然后用Box-Behnken设计及响应面分析确定了重要影响因素的最佳条件。结果优化后的碳源为蔗糖4%,氮源为硫酸铵0.5%,发酵条件为pH值7.53,温度30.48℃,培养时间64.4h。结论优化后的抗菌抑菌圈直径达到40.00mm,比优化前的18.25mm提高了119.2%。

假单胞菌YT3和枯草芽孢杆菌DZ1的发酵罐生长条件优化

假单胞菌(Pseudomonas sp.)YT3和枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)DZ1是从植物根际土壤筛选出的具有应用潜力的植物根际促生细菌。研究发酵罐中接种量、转速、通气量等因素对YT3菌量以及对DZ1芽孢率、菌量的影响。结果表明:不同的接种量、转速和通气量对Pseudomonas sp.YT3的活菌数、Bacillus subtilis DZ1的活菌数及芽孢率均有显著影响。1 0%的接种量、2 m 3/h的通气量对YT3和DZ1菌株的作用效果与15%的接种量、3 m 3/h相当,但显著高于5%的接种量和1 m 3/h。当转速为200 r/min时,YT3具有最高的活菌数,DZ1具有最高的活菌数和芽孢率。综合分析认为,YT3和DZ1发酵罐的最佳条件为接种量10%、转速200 r/min和通气量2 m 3/h。

枯草芽孢杆菌XF1菌株中XFsacA基因的克隆及功能验证

枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis XF1是从土壤中分离的一株利用蔗糖快、能高效防治根肿病的专利菌株.为探明其高效的蔗糖代谢机制,用PCR从该菌中扩增到蔗糖代谢关键基因蔗糖-6-磷酸水解酶基因(XFsacA基因),其编码的蛋白质氨基酸序列与枯草芽孢杆菌B168菌株中的XFsacA基因有97%的相似性,且发生了12个氨基酸突变.将该基因中约1.4 kb的编码框序列连接到表达载体pQE30上,构建了重组表达质粒pQE30-XFsacA,该质粒转入到不能利用蔗糖的Escherichia coli BL21中,后者能在以蔗糖为唯一碳源的M9无机离子培养基中正常生长,并表达出了一条约54 000蛋白条带.结果预示XFsacA基因氨基酸序列的替代可能是XF1高效利用蔗糖的基础,同时XFsacA基因的克隆与其在E.coli中的表达研究,为利用蔗糖发酵的工程E.coli构建奠定了基础.

枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)B1、B2菌株对当归、黄芪的防病促进生长效果

对枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)B1、B2菌株在当归、黄芪上的防病促生效果进行了田间试验研究。结果表明:B1、B2对当归、黄芪根腐病具有较好的防治作用。B1对当归、黄芪根腐病的防治效果分别为39.13%、41.48%,B2为41.30%和48.16%,B2防治效果与化学农药无显著性差异;同时,B1、B2对当归、黄芪具有促生增产作用,B1增产率分别为7.74%、12.5%;B2分别为17.2%、16.25%。且B1、B2均可提高当归和黄芪的品质。

10种农业化学品对柑橘内生菌枯草芽孢杆菌L1-21的影响

【目的】明确农业化学品对柑橘内生菌的影响,指导柑橘合理用药。【方法】采用平板菌落计数法,测定了6种杀虫剂、3种杀菌剂和微肥EDTA-Cu对生防菌株枯草芽孢杆菌L1-21的相容性及对柑橘植株内生菌的抑制作用。【结果】56.00 mg·L^(-1)吡虫啉、121.80 mg·L^(-1)虫螨腈、4.00 mg·L^(-1)甲氨基阿维菌素、50.00 mg·L^(-1)噻虫嗪、45.60 mg·L^(-1)氟氯氰菊酯、800.00 mg·L^(-1)辛硫磷、402.00 mg·L^(-1)喹啉铜、3728.00 mg·L^(-1)硫磺、620.60 mg·L^(-1)氧化亚铜和321.00 mg·L^(-1)EDTA-Cu在平板上对L1-21的抑制率均达100.00%。2倍剂量处理离体叶片24 h后,除8.00 mg·L^(-1)甲氨基阿维菌素的抑制率(16.84%)显著低于其他5种杀虫剂外,其他5种杀虫剂对L1-21的抑制率均无显著差异。2倍剂量处理柑橘活体叶片24 h后,8.00 mg·L^(-1)甲氨基阿维菌素对柑橘叶片内的L1-21抑制作用(4.23%)不明显,显著低于其他5种杀虫剂和3种杀菌剂与微肥EDTACu;对内生菌总量的抑制率以8.00 mg·L^(-1)甲氨基阿维菌素(6.78%)最低,其他制品达46.90%~70.06%,且差异未达显著水平。【结论】10种农业化学品在平板上均可抑制L1-21,抑制率的大小与其浓度有关。2倍田间登记使用量处理时,10种农业化学品均可影响L1-21在柑橘叶片上的定殖及降低柑橘内生细菌总量。因此,田间施用化学品对柑橘内生菌的负面影响不可忽视。

枯草芽孢杆菌XF-1的碳水化合物活性酶类(CAZymes)蛋白预测与遗传关系分析

枯草芽孢杆菌XF-1对多种植物病原菌具有较好的抑制作用,是农业生产上非常重要的生防菌之一.碳水化合物活性酶类蛋白(CAZymes)作为植物病原真菌、细菌中重要的蛋白,在其生长和发育过程中发挥着重要作用.基于前期获得的枯草芽孢杆菌XF-1中104个分泌蛋白基本序列信息,利用CAT预测程序对该菌中的CAZymes蛋白进行预测分析,明确其含有CAZymes蛋白的数量是58个,上述蛋白可以分为主要类别和复合类别两大类,前者包括26个GHs、21个CBMs以及2个CEs、3个PLs、2个GTs;后者则包括4个复合蛋白类型GH/CBM.该研究有效地实现了枯草芽孢杆菌XF-1中CAZymes的预测,为进一步开展其功能研究打下坚实的理论基础.

日粮中添加Na和N1型纳豆枯草芽孢杆菌培养物对犊牛瘤胃发育的影响

试验研究了Na和N1型纳豆枯草芽孢杆菌培养物对犊牛瘤胃乳头发育的影响。24头荷斯坦公犊牛(7d±1.1d)随机分为3个处理组,每组8头。断奶前Na型和N1型纳豆菌培养液与牛奶混合,断奶后纳豆菌培养液与犊牛精料混合饲喂。当犊牛开食料采食量达到20g/kg体重时断奶。断奶后每组随机选取4头犊牛屠宰,余下的犊牛继续饲喂,44d后屠宰。采集犊牛瘤胃液和瘤胃组织样品。结果表明,饲喂Na和N1型纳豆枯草芽孢杆菌降低了断奶时和断奶44d犊牛瘤胃液中短链脂肪酸浓度(P<0.05),N1型纳豆枯草芽孢杆菌降低了瘤胃pH及丁酸的摩尔百分比(P<0.05)。Na型纳豆枯草芽孢杆菌降低了断奶犊牛瘤胃中乙酸的摩尔百分比,同时降低游离氨水平(P<0.05),且可以降低断奶后44d犊牛瘤胃中NH3浓度(P<0.05)。与对照组相比,饲喂Na型和N1型纳豆枯草芽孢杆菌可提高断奶时和断奶后44d单位面积瘤胃壁乳头的数目和表面积(P<0.05)。而且,饲喂纳豆菌后犊牛瘤胃乳头表面平滑,呈舌型,无细颈,团块和角质化不全现象。因此,饲喂纳豆枯草芽孢杆菌可促进犊牛瘤胃发育。

生防菌株XF-1的鉴定和抑菌谱的测定

依据传统形态学、生理生化特征及16S rRNA基因序列,将一株对十字花科根肿病有很好防治效果的菌株XF-1鉴定为枯草芽孢杆菌。采用细菌的通用引物P0,P6扩增16S rRNA基因片段,得到1513 bp的DNA片段,其序列与枯草芽孢杆菌的序列的同源性高达99%。与病原真菌对峙培养的结果表明,该菌株能对供试的卵菌、子囊菌、担子菌和半知菌的21个植物病原真菌均有很好的抑制作用。

枯草芽孢杆菌ZC1发酵豆粕产大豆肽的条件研究

在摇瓶条件下,以大豆肽转化率为指标,通过单因素试验和正交试验设计,优化得到最佳发酵培养基为豆粕粉80 g/L、麦芽糖15 g/L、磷酸二氢钾6 g/L。在10 L发酵罐条件下,研究了搅拌速率和通气量对枯草芽孢杆菌ZC1发酵豆粕产大豆肽的影响,结果表明:当搅拌速率150 r/min、通气量5 L/min、发酵温度37℃时,发酵罐运转良好,在发酵48 h左右时,中性蛋白酶酶活力和大豆肽转化率均高于摇瓶培养,分别达到了852.5 U/mL和76.73%。

基于HS-SPME-GC-MS的Bacillus subtilis Czk1挥发性物质的萃取条件优化

旨在建立一种快速测定枯草芽孢杆菌Czk1挥发性物质的方法。以总峰个数和总峰面积为指标,采用顶空固相微萃取气相色谱质谱联用技术鉴定枯草芽孢杆菌Czk1的挥发性物质,采用单因素和正交试验确定最佳萃取条件,并在此条件下对Czk1的挥发性物质组分进行分析。最佳组合为50/30μm DVB/CAR/PDMS萃取头、萃取温度40℃,萃取时间40 min,解吸时间7 min,升温程序4。在此优化条件下,共获得33种挥发性物质,其主要组分含有酮类(28.65%)、酚类(13.51%)、酯类(9.17%)、醛类(15.60%)、醇类(12.08%)、碳氢化合物(4.49%)、其他类物质(10.58%)。该萃取方法的建立可为枯草芽孢杆菌Czk1挥发性物质的分析提供参考。

生防菌株HJX1的鉴定和抑菌谱的测定

依据传统形态学、16S rRNA基因序列及脂肪酸图谱鉴定,将一株对香蕉镰刀枯萎病菌有很好抑制效果的菌株HJX1鉴定为枯草芽孢杆菌。采用细菌的通用引物P0和P6扩增16S rRNA基因片段,得到1521bp的DNA片段,其序列与枯草芽孢杆菌的序列的同源性高达99%;细胞组分脂肪酸的含量同枯草芽孢杆菌最近,其相似度为0.724。与病原真菌对峙培养的结果表明,该菌株能对供试的10个植物病原真菌均有很好的抑制作用。

3-甾酮-1-脱氢酶基因的表达及甾体转化分析(英文)

利用带有P43启动子的表达分泌载体pWB980,实现了简单节杆菌3-甾酮-1-脱氢酶在枯草芽孢杆菌中的表达,表达出的目的蛋白的分子量为55kDa。利用分光光度法检测得到胞内和胞外可溶性部分的酶活分别为每毫克蛋白110±0.5mU和15±0.6mU,比出发菌株简单节杆菌提高了将近30倍。重组芽孢杆菌对甾体底物4-AD(4-烯-雄甾-3,17-双酮)的转化率为45.3%,比出发菌株简单节杆菌提高了近10倍。利用枯草芽孢杆菌对甾体底物进行脱氢为甾体药物的生产开辟了一个新的途径。