枯草芽孢菌B_4菌株基础生物学特性及抗菌物质的研究

通过B_4菌生物学特性及抗菌物质的研究得出:B_4菌最适培养条件为YSP培养基、28℃、PH7和充分供氧,48hr生长量达最大。培养液中抗菌物质活性随培养时间的延长而增高,培养48～72h后达最高。

枯草芽孢杆菌WR菌株对番茄灰霉病的生防潜力

为评估WR菌株对番茄灰霉病的生防潜力,测定了WR对番茄灰霉病菌的离体和活体活性。平板对峙培养和发酵液带毒培养试验表明,WR对番茄灰霉菌落生长的拮抗率达98.2%,WR发酵上清液的30倍稀释液对灰霉菌落生长的抑制率达94.5%。喷施带菌发酵液及其50倍稀释液,对采后番茄果实灰霉病发生的保护作用和治疗作用均达100%,果面光洁;而对照果实上灰霉菌生长旺盛,菌落平均直径1.10~1.13 cm,病害周围果实软化,碰触有臭味汁液流出。WR发酵上清液经11种不同性质的树脂吸附后的残液抑菌活性在2.2%~70.7%,表明发酵液抑菌活性成分丰富,D201和001×7均可作为活性成分富集树脂。经16S rDNA核苷酸序列鉴定,WR为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis),具有防治番茄灰霉病的潜力。

响应面法优化枯草芽孢杆菌BS-1101原生质体制备条件

实验以枯草芽孢杆菌BS-1101原生质体的制备率为目的,通过中心组合试验对影响枯草芽孢杆菌BS-1101原生质体的制备率的三个因素:酶解温度、酶解时间、酶浓度进行了研究评价,通过中心组合试验设计与响应面分析方法得到二次回归模型程,由回归方程得到,在酶解温度37.27℃、酶浓度为5.152 mg.mL-1、酶解时间88.8 min的条件下得到枯草芽孢杆菌BS-1101制备率为77.02%,与方程预测值为较接近。结果表明利用响应面法能够很好地对枯草芽孢杆菌原生质体制备条件进行优化。对于枯草芽孢杆菌原生质体制备条件的优化有一定参考价值。

桑树内生拮抗细菌枯草芽孢杆菌L144对植物生长及营养代谢的影响

桑树内生拮抗细菌枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)L144对多种植物病原菌具有较强的抑制作用。为进一步探讨该内生菌的开发应用价值,研究了该内生菌对植物生长及营养代谢的影响。试验结果表明:适当浓度的L144菌株培养液能明显提高玉米和桑树种子的发芽势、发芽率和胚根长,增加玉米和桑树幼苗的株高及植株鲜质量和干质量,提高植株体内叶绿素、可溶性蛋白和可溶性糖的含量,且以菌株培养液10倍稀释液的促生作用最为显著;该菌株的菌体悬浮液及胞外分泌物对玉米幼苗也表现出不同程度的促生作用;该菌株还具有分泌植物生长激素、溶解无机磷和有机磷的性能,有可能是其促进植株生长的主要作用机制。试验结果提示,L144菌株的培养液及菌体和胞外分泌物对植物有较明显的促生作用。

基因工程菌枯草芽孢杆菌GEB3产生的脂肽类抗生素及其生物活性研究

利用MALDI TOF MS技术 ,鉴定了将lpaB3基因转入枯草芽孢杆菌Bacillussubtilis 168菌株所构建的工程菌GEB3产生的脂肽类抗生素种类。结果表明 ,GEB3仅产生表面活性素 (surfactin) 1种脂肽类抗生素。经LC MS分析 ,GEB3产生由 13、14和 15个碳原子的脂肪酸链构成的标准表面活性素变异体 (standardsurfactinisoforms)。生物活性检测表明 。

吡虫啉等11种农药对枯草芽孢杆菌B36菌株可湿性粉剂防治番茄灰霉病效果的影响

生物农药受环境影响较大已是学界的共识,这也是生物农药药效不稳定的主要原因。通过研究吡虫啉等11种番茄保护地常用农药对枯草芽孢杆菌B36菌株可湿性粉剂防治番茄灰霉病效果的影响,结果表明:1.8%阿维菌素乳油与B36可湿性粉剂混用可以明显提高B36可湿性粉剂防治番茄灰霉病的药效,其预防效果与治疗效果分别提高2.59百分点与5.84百分点。80%代森锰锌可湿性粉剂与B36可湿性粉剂混用降低了B36可湿性粉剂防治番茄灰霉病的药效,其预防效果与治疗效果分别降低1.77百分点与5.28百分点。其余9种农药对枯草芽孢杆菌B36菌株可湿性粉剂防治番茄灰霉病存在一定影响,但均不显著。

桑树内生枯草芽孢杆菌TasA基因的克隆及序列分析与表达产物的抑菌作用

TasA是枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)在芽孢的形成过程中产生的蛋白,对多种动、植物病原菌有较强的抑制作用。从桑树内生枯草芽孢杆菌菌株ME0717基因组DNA中克隆到TasA基因的全序列,包含一个786bp的完整开放阅读框(ORF),GenBank登录号为FJ713582。该序列与来源于B.subtilis的已知同源TasA序列Z99116、AJ871386的相似性达99.0%和98.1%,与芽孢形成相关的基因YqhF(GenBank登录号:BACJH642)的序列相似性也达99.0%,而与来源于地衣芽孢杆菌(B.licheniformis)的TasA序列(GenBank登录号:AE017333)相似性仅有46.0%,与来源于其它芽孢杆菌属的金属蛋白酶基因和芽孢外壳相关蛋白基因也有较高的相似性。构建该基因的原核表达载体,并在大肠杆菌(Escherichia coli)BL21中获得表达,表达产物对桑疫病病原细菌的菌体生长以及桑漆斑病菌和桑炭疽病菌的菌丝生长均有一定程度的抑制作用。

枯草芽孢杆菌壳聚糖酶基因在毕赤酵母中的表达及酶学性质

构建了枯草芽孢杆菌CH_2菌株(Bacillus subtilis CH_2)壳聚糖酶基因的真核表达载体p PIC9K-CH2-Cns,在毕赤酵母GS115(Pichia pastoris)中进行重组表达,获得了有生物学活性的重组壳聚糖酶,对重组壳聚糖酶的酶学特性及酶解产物进行了分析。结果显示,重组壳聚糖酶的分子量为29 k D,粗酶的比酶活达到133.60 U/mg,纯化后重组蛋白的比酶活为338.08 U/mg;该酶的最适作用温度为50℃,最适pH为4.5,酶动力学常数Vmax=24.39(μmol/mg)·min^(-1),Km=5.48 mg/m L;Fe2+、K+等对其酶活力有一定的激活作用,其中Mn^(2+)能使酶活力提升2.4倍,Ag^+、Mg^(2+)、Hg^(2+)、EDTA、EGTA和SDS等存在时则对其酶活力有强烈抑制作用。利用重组壳聚糖酶酶解壳聚糖,酶解产物主要为聚合度2~10的壳寡糖,且分布均匀。以上结果表明,枯草芽孢杆菌CH_2菌株壳聚糖酶基因在毕赤酵母GS115中成功表达,获得了一种内切型的高酶活力重组壳聚糖酶,该重组酶具有反应条件温和、酶解产物均一等特点,可被应用于海洋甲壳质加工应用中。

一株净水枯草芽孢杆菌的分离、鉴定及应用

采用平板稀释涂布法从湖州某水产养殖塘采集的底泥中分离得到12株芽孢菌,从中筛选出产蛋白酶、纤维素酶、淀粉酶能力最强的菌株CM-A12,经菌落形态、生理生化特性及16S rRNA基因序列分析将其鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis),其16S rRNA在GeneBank的登录号为KT891015。对CM-A12净化水质能力特性的初步研究,结果表明,在适宜的环境条件下,枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)对废水中的CODCr和NH3-N的去除率分别达到71%、94%。本研究为枯草芽孢杆菌在湖泊、水库等微污染水体的净化及修复,造纸废水、食品行业排放废水等工业废水应用提供基础依据。

枯草芽孢杆菌活菌产品对皮肤用药的安全性分析

目的探讨皮肤应用枯草芽孢杆菌活菌产品的安全性。方法4只家兔背部皮肤左右分别设给药组和空白对照组，用枯草芽孢杆菌活菌产品多次局部涂抹家兔的皮肤进行刺激，观察皮肤刺激性；将豚鼠完全随机分为空白对照组、给药组和阳性对照组，每组10只，空白对照组给予赋形剂，给药组给予枯草芽孢杆菌产品，阳性对照组给予1％2，4-二硝基氯代苯。对皮肤多次局部涂抹致敏，观察过敏反应。结果枯草芽孢杆菌活菌产品对家兔皮肤刺激强度为0．14分，小于0．5分，后续观察未出现可逆反应，无明显皮肤刺激性反应；给药组豚鼠致敏率为0分，致敏等级为I级，无皮肤过敏反应。结论枯草芽孢杆菌活菌产品局部毒性小，皮肤用药具有良好的安全性。

枯草芽孢杆菌SX3411产抑菌物质的发酵条件优化

枯草芽孢杆菌SX3411菌株自身带有subtilomycin基因簇,其主要的抑菌成分为subtilomycin.该文采用单因素分析法分析了枯草芽孢杆菌SX3411在不同发酵条件和营养成分时对抑菌物质产生的影响.根据单因素分析,对枯草芽孢杆菌SX3411产抑菌物质设计了响应面法分析,通过响应面法获得了最优的发酵条件和最佳营养成分配比.结果表明:最佳培养条件是初始pH值为8.25、转速为169 r·min^(-1)、温度为30.24℃、装液量为37.9%、接种量为1.46%,抑菌圈直径预测值为30.04 mm;最佳培养基的成分为葡萄糖11.4 g·L^(-1)、酵母粉5.0 g·L^(-1)、ZnSO_(4)0.00056 g·L^(-1)、CaCl_(2)0.0595 g·L^(-1),抑菌圈直径预测值为27.83 mm.实际检测值与预测值完全吻合.实验结果为生产羊毛硫细菌素subtilomycin提供了依据.

枯草芽孢杆菌抗菌肽对鲜切山药的保鲜及货架期预测

以鲜切山药为研究对象,研究了枯草芽孢杆菌抗菌肽处理鲜切山药及清水处理鲜切山药在贮藏期间感官变化及菌落总数变化,并确定了最小腐败量,建立微生物生长动力学模型并对剩余货架期进行预测。结果表明:鲜切山药贮藏期间的最小腐败量为6.461 lg(CFU/g);建立的对照组和试验组微生物生长动力学模型分别为:N_(t)=2.054+6.696exp[-exp(0.021(30.959-t)+1)]和Nt=1.949+6.173exp[-exp(0.020(45.771-t)+1)],验证试验表明建立的修正的Gompertz模型能有效地拟合2种处理鲜切山药菌落总数的动态变化,结合感官评价和剩余货架期预测模型得到枯草芽杆菌抗菌肽处理鲜切山药能够将鲜切山药贮藏期延长2 d。

枯草芽孢杆菌活菌制剂促进创伤皮肤愈合的实验研究

目的探讨枯草芽孢杆菌活菌制剂对创伤皮肤愈合的影响。方法以大鼠后背全层皮肤切除创伤愈合过程为模型,局部外用枯草芽孢杆菌活茵制剂并设对照,制作病理组织切片,测定创面羟脯氨酸含量变化,同时测量创面愈合面积,记录愈合时间。结果应用枯草牙孢杆菌活菌制剂可促进成纤维细胞增生,提高胶原含量,创面愈合时间较对照组明显缩短。结论枯草牙孢杆茵活茵制剂具有促进创伤皮肤愈合的作用。

枯草芽孢杆菌β-葡聚糖酶基因的克隆和表达

背景：β-葡聚糖已广泛用于保健和临床治疗。通过酶水解的方法得到分子量大小适中的β-葡聚糖，这一研究日益受到重视。目的：实验旨在构建高表达β-葡聚糖酶的工程菌。并对该酶活性及热稳定性做出分析，为今后能够利用到临床医学奠定基础。方法：通过克隆得到枯草芽孢杆菌β-葡聚糖酶的基因，利用分子生物学技术将β-葡聚糖酶基因与表达载体pET28b＋构建重组质粒后导入大肠杆菌中构建工程菌株。利用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导其表达目的蛋白，通过镍离子螯合树脂纯化得到目的蛋白。结果与结论：实验成功编码枯草芽孢杆菌β-葡聚糖酶的基因被克隆到大肠杆菌中，并能高效的表达。根据酶活力测定发现，该酶在50-60℃有较高的酶活性，在50℃最高。β-葡聚糖酶在30—40℃保持较高的热稳定性。实验初步发现，β-葡聚糖酶的工程菌表达产物能分解它的底物，但是否适用于临床治疗需要进行更多的研究。

采用枯草芽孢杆菌活菌制剂预防和治疗仔猪细菌性腹泻的研究

枯草芽孢杆菌活菌制剂是利用从植物中分离筛选出的枯草芽孢杆菌活制剂TY7210菌株制备的兽用微生物制剂，具有治疗和预防动物细菌性肠道疾病，无抗药性、无药物残留，治疗效果明显好于同类作用的抗生素。

与水稻互作的枯草芽孢杆菌OKB105菌株胞内全蛋白双向电泳条件的优化

用枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)OKB105菌株菌悬液处理水稻种子及幼苗,发现OKB105菌株能够显著促进水稻生长。为了研究枯草芽孢杆菌的促生机制,建立了水稻与OKB105菌株的互作体系,并对互作后的OKB105菌株胞内全蛋白的双向电泳条件进行了优化。结果表明:分离胶浓度为10%,等电聚焦(IEF)程序中最高电压8 000 V,聚焦60 000 Vh且增加低电压慢速除盐步骤能够提高双向电泳图谱质量,为蛋白质组学水平上研究水稻与枯草芽孢杆菌的互作奠定了良好的基础。

细链格孢菌拮抗细菌枯草芽孢杆菌XL12菌株发酵产抗菌蛋白条件研究

为了提高细链格孢菌[Alternaria alternate（Fr）Keissler]拮抗细菌枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）XL12菌株的发酵产抗菌蛋白量,采用单因素法对XL12菌株的培养条件进行了优化,最终确定XL12最适宜的发酵条件为：基础培养基碳源和氮源（摩尔比）的比例为30∶1,接种量为0.5%,配制后灭菌前,培养液的pH调节在6.95~7.05,发酵温度为30~35℃,220 r.min-1摇床振荡培养72 h,用70%硫酸铵对XL12菌株发酵液上清液进行盐析,可以沉淀最多的抗菌蛋白。

枯草芽孢杆菌菌株ZT4-2电击转化体系的建立

【目的】建立枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)菌株ZT4-2的高效电击转化体系。【方法】带有荧光蛋白标记的穿梭质粒pGFP78,通过电击转化法将其转入枯草芽孢杆菌菌株ZT4-2。【结果】菌株培养阶段、感受态细胞浓度、感受态细胞量、质粒体积量、转化电压等条件的不同,会对电击转化效率造成影响。其中试验条件:制备感受态细胞的菌株培养阶段的OD_(600 nm)值=1.0,重悬菌体时每100mL起始菌液加入600μL的40%PEG6000;电击转化体系中,感受态细胞量200μL,质粒体积10μL,转化电压2.5kV。最高转化效率可达6823.67CFU/μg。【结论】建立了枯草芽孢杆菌菌株ZT4-2的电击转化体系,电击转化效率较高。

抑菌型枯草芽孢杆菌在蛋鸡生产上的应用效果评价

为了评估抑菌型枯草芽孢杆菌对蛋鸡生产性能、蛋品质及肠道菌群的影响,本试验选取350日龄海兰褐蛋鸡400只,随机分为2组,每组设5个重复,每个重复40只鸡。对照组饲喂玉米-豆粕型基础日粮,试验组在基础日粮中添加100g/t抑菌型枯草芽孢杆菌(活菌数≥2.0×1010 CFU/g)。预饲期7 d,正饲期30 d。结果表明:与对照组相比,添加抑菌型枯草芽孢杆菌试验组蛋鸡产蛋率提高了3.26个百分点(P<0.05),破蛋率降低了0.87个百分点(P<0.05),沙壳蛋率降低了1.12个百分点(P<0.05),蛋壳厚度和蛋壳强度均显著提高(P<0.05)。同时,添加抑菌型枯草芽孢杆菌试验组能够显著提高蛋鸡肠道乳酸菌等有益菌的数量,显著降低产气荚膜梭菌和大肠菌群等有害菌的数量(P<0.05)。结论:在蛋鸡基础日粮中添加100 g/t抑菌型枯草芽孢杆菌,能够显著提高蛋鸡的生产性能,提高蛋品质,改善肠道菌群。

混凝土自修复菌Bacillus sp.芽孢生产和萌发条件的优化

对一株混凝土自修复菌Bacillus sp.B8芽孢生产条件进行优化,研究芽孢萌发的影响因素.芽孢生产的单因素实验表明,最适接种量为1×107m L-1;最适碳源和氮源分别为淀粉和酵母粉,相应的最适质量浓度分别为0.5 g/L和2 g/L;一定质量浓度的Mg2+(0.24 g/L)和Mn2+(4.8 mg/L)有利于芽孢生成.在单因素实验的基础上利用正交实验对各影响因子进行了优化,结果表明,接种量和酵母粉浓度是影响芽孢产量的显著因子,在接种量、淀粉、酵母粉、Mg2+和Mn2+浓度分别为1×107m L-1、5、5、0.48和4.8×10-3g/L时,芽孢产量达到1.54×109m L-1,比优化前提高150倍.此外,芽孢萌发实验表明,芽孢萌发时间约为4 h;最适萌发剂为肌苷,最适质量浓度为2 g/L,最适pH值为10;金属离子Na+能促进芽孢萌发,但Ca2+对芽孢的萌发有严重的抑制作用.在实验中首次发现一定质量浓度的Na+能消除Ca2+的抑制作用,最适质量浓度为24 g/L.