不同产地“宁杞1号”枸杞果实的多糖合成代谢差异

基于同位素标记相对和绝对定量(isobaric tags for relative and absolute quantity,iTRAQ)技术,以采自宁夏中宁的“宁杞1号”枸杞果实为样品,以采自新疆精河、内蒙古乌拉特前旗、甘肃瓜州和青海德令哈的“宁杞1号”枸杞果实为对照,进行差异蛋白组学的生物信息学分析。结果表明,新疆/宁夏组、内蒙古/宁夏组、甘肃/宁夏组和青海/宁夏组分别有446,166,966个和1015个差异表达蛋白(DEPs),与枸杞多糖合成代谢相关的DEPs共160个。进一步筛选得到23个与枸杞多糖相关DEPs,包括蔗糖磷酸合成酶、β-葡萄糖苷酶和α-半乳糖苷酶等。推测采自不同产地的枸杞果实的多糖合成代谢差异通路主要包括蔗糖、纤维素、半乳聚糖、半纤维素和果胶合成代谢过程,且这些过程均可通过UDP-葡萄糖链接在一起。通过蛋白组学分析枸杞多糖合成途径上的相关蛋白,为深入研究不同产地同种枸杞多糖调控机制提供理论参考。

柘木多糖和枸杞多糖对尾吊小鼠免疫功能的防护效应

目的研究柘木多糖和枸杞多糖对尾吊小鼠细胞免疫功能的防护作用。方法分别以柘木多糖、枸杞多糖的高、低剂量经口给予尾吊小鼠,M TS比色法测定脾T淋巴细胞增殖,EL ISA法测定培养上清中细胞因子分泌评价免疫功能。结果尾吊7d后,小鼠脾T淋巴细胞增殖明显降低,细胞因子IL-2和IFN-γ分泌减少,柘木多糖能提高尾吊小鼠的脾T淋巴细胞增殖及IL-2和IFN-γ分泌。结论柘木多糖对尾吊模拟微重力小鼠细胞免疫功能有一定的防护作用。

枸杞多糖对衰老大鼠蛋白质氧化损伤影响的实验研究

目的探讨枸杞多糖(LBP)对衰老大鼠蛋白质氧化损伤的影响。方法Wistar大鼠40只,随机分为衰老模型组、枸杞多糖大剂量组(100 mg/kg)、中剂量组(50 mg/kg)、小剂量组(10 mg/kg),每组10只。测定各组大鼠肝组织谷胱甘肽(GSH)、羰基蛋白的含量和谷胱甘肽转移酶(GST)活性。结果LBP可明显降低羰基蛋白含量(P<0.01,P<0.05),增加GSH含量和增强GST活性(P<0.01)。结论LBP通过降低蛋白质氧化损伤而发挥抗衰老的作用。

枸杞多糖的碱液提取工艺研究

【目的】在传统水提取枸杞多糖(LBP)工艺的基础上,寻求更优的提取枸杞多糖的方法。【方法】以宁夏枸杞为原料,分析了浸提温度、浸提液pH、液料比和提取时间对LBP得率的影响,并在此基础上进行了正交试验。以LBP得率为衡量指标,优选出碱液提取LBP的工艺条件,分析了碱液提取工艺较传统水提工艺的优越性。【结果】碱液提取LBP的最佳工艺条件是:枸杞粉与浸提液的液料比为70∶1,pH为10,温度65℃,浸提时间3.5 h;各因素影响碱液提取LBP得率的主次因素依次为:浸提温度>浸提液pH>液料比>浸提时间。【结论】得到了碱液提取LBP的最佳提取工艺,该工艺下LBP得率可达7.46%,比传统水提工艺提高了1.59%。

枸杞多糖研究进展

介绍枸杞多糖的成分与生理功能,以及枸杞多糖的提取方法,并对枸杞多糖的发展前景进行预测。

枸杞多糖在UVB辐射人角质形成细胞氧化损伤中的保护作用

目的利用中波紫外线辐射体外培养的人角质形成细胞(HaCaT)建立紫外线损伤模型,探讨枸杞多糖(LBP)在紫外线辐射HaCaT氧化损伤中的作用及其机制,为抗氧化剂的研发提供理论依据。方法在HaCaT培养的基础上设置空白对照组、UVB照射组和不同浓度的LBP干预组,采用UVB辐射HaCaT进行造模,运用酶生化法检测不同浓度的枸杞多糖对UVB辐射HaCaT后的细胞增殖及抗氧化酶的影响。结果 UVB辐射对HaCaT造成明显损伤,LBP可提高UVB辐射后HaCaT细胞增值活性(MTT),提高超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性,降低丙二醛(MDA)产生。(P<0.05)。结论 UVB对HaCaT细胞有损伤作用,LBP可拮抗UVB所致HaCaT细胞抗氧化酶活性的降低,从而具有抗氧化光保护作用。

枸杞多糖通过抑制TLR4/NF-κB信号通路促进LPS诱导的BV2小胶质细胞M2型极化

目的探讨枸杞多糖(LBP)对脂多糖(LPS)诱导的BV2小胶质细胞由M1型向M2型极化的作用及其机制。方法实验分为对照组、LPS组、(0.6、0.9、1.2)g/L LBP处理组。噻唑蓝(MTT)法检测LBP对BV2细胞活性的影响,Griess法检测细胞一氧化氮(NO)释放量,ELISA检测细胞肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)的分泌,免疫荧光细胞化学染色法检测Toll样受体4(TLR4)、核因子κB(NF-κB)、一氧化氮合酶(iNOS)和精氨酸酶1(Arg1)的表达,Western blot法检测钙离子结合接头蛋白分子1(Iba-1)、TLR4、NF-κB、iNOS和Arg1的蛋白水平。结果不同剂量LBP处理后,细胞存活率无明显变化。与正常组相比,LPS组小胶质细胞活化明显,呈阿米巴样,NO释放量增加;Iba-1、TLR4、NF-κB、iNOS、TNF-α、IL-1β、IL-6含量增加,Arg1和IL-10含量降低。LBP组Iba-1、TLR4、NF-κB、iNOS、TNF-α、IL-1β、IL-6含量降低,与剂量呈负相关,Arg1和IL-10含量增加,与剂量呈正相关。结论LBP可能通过阻断TLR4/NF-κB信号通路抑制LPS诱导的BV2细胞活化并促进激活的BV2细胞由M1型向M2型极化。

枸杞原汁、枸杞多糖诱导人正常肝细胞L-O2及卵巢癌细胞株SKOV3、HO8910凋亡的实验研究

目的:对比研究枸杞原汁、枸杞多糖对人正常肝细胞L-O2及人卵巢癌细胞株SKOV3、HO8910的生长抑制,及诱导凋亡的作用及其机制。方法:枸杞原汁、枸杞多糖作用L-O2、SKOV3、HO8910,用MTT法检测细胞生长抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡率并分析细胞周期分布的变化。结果:枸杞原汁组:L-O2、SKOV3、HO8910生长抑制率分别为-58%,-49%,-84%;L-O2、HO8910凋亡细胞含量明显少于空白对照组,正常细胞数明显多于空白对照组;枸杞原汁对L-O2、HO8910无细胞周期阻滞,各期细胞分别较对照组均匀;枸杞多糖组:枸杞多糖(500,1000,2000)mg/L作用下,L-O2生长抑制率分别为28%,31%,20%;SK-OV3为-1%,40%,35%,HO8910为13%,48%,41%;不同浓度LBP对L-O2及HO8910均有诱导凋亡作用,凋亡细胞数以1000mg/L为最大;1000mg/L组L-O2、HO8910细胞周期均阻滞于S期,S期细胞比例高于对照组。结论:枸杞原汁在体外对L-O2、SKOV3、HO8910有促进生长作用,且对HO8910的作用最大;对L-O2、HO8910无诱导细胞凋亡作用。枸杞多糖在体外对L-O2、SKOV3、HO8910都有抑制生长作用,且对HO8910作用最大;对L-O2、HO8910有诱导细胞凋亡作用,以浓度1000mg/L为最大,并未表现出剂量依赖效应。枸杞多糖诱导细胞发生S期阻滞,并且诱导S期细胞发生凋亡是其体外抑制细胞生长的可能机制之一。

物理条件对枸杞水浸提液中枸杞多糖的影响

通过在几种物理条件下 (浸提温度、浸提时间与浸提溶剂比 )对枸杞水浸提液中枸杞多糖的测定 ,得出在实验条件下最佳的实验结果 :浸提温度 90℃、浸提时间 3h、浸提溶剂比 1∶15。

超声波萃取植物多糖的研究

研究了利用超声波萃取枸杞多糖的提取工艺,采用分光光度比色法测枸杞多糖含量,通过止交实验对超声波辅助水浸提枸杞多糖的提取工艺进行了系统研究,确定了最佳工艺,即:在50℃,1:60的料水比,浸泡2.5h,超声波提取5min,得多糖最高提取率为50.36%。

枸杞多糖对生精障碍模型小鼠生精能力作用的研究

目的研究枸杞多糖(LBP)对生精功能和生精干细胞的影响。方法 122只雄性昆明小鼠中随机选取92只,通过35 mg/kg白消安造模,获得生精障碍动物模型,另外30只小鼠为正常对照组。40 d后对造模成功的小鼠随机分为自然恢复组(n=23)和LBP低剂量组(n=16,75 mg/kg)、中剂量组(n=19,150 mg/kg)、高剂量组(n=16,300 mg/kg),连续灌胃给药70 d(小鼠2个生精周期)后进行观察,并与正常对照组进行比较,观察其生理状态和生殖功能变化。结果 LBP在造模动物的外观体征、机能和行为的表现、动物正常发育状态(体质量)、生殖器官组织重量(睾丸、附睾和储精囊、前列腺-会阴复合体)、附睾精子质量、睾丸组织精子生成量、睾丸组织形态学和c-kit表达量、精曲小管直径和空泡化程度、生精上皮厚度和细胞层数、c-kit阳性细胞数、H-score评分、平均吸光度(IA)等系列指标均显示明显高于自然恢复组(P<0.05,P<0.01),并具有剂量效应关系,但仍未达到正常对照动物的水平。结论 LBP具有明显促进白消安生精障碍模型小鼠的生精能力的作用,可以显著增加生精干细胞、附睾精子质量和睾丸精子生成量。

枸杞多糖对小鼠结直肠癌肿瘤生长的抑制作用及对血管形成机制的影响

目的:探讨枸杞多糖(LBP)对小鼠结直肠癌肿瘤生长及血管形成机制的影响。方法:建立小鼠CT26结直肠癌肿瘤模型,LBP给药观察对模型小鼠肿瘤生长的抑制作用,绘制肿瘤生长曲线;肿瘤组织切片,免疫组织化学方法检测CD31表达,观察肿瘤间质血管密度;大鼠动脉环实验观察LBP对血管形成的影响。体外实验QPCR检测LBP对脑组织特异性血管生成抑制因子1(BAI1)表达的影响,同时检测LBP对结直肠癌细胞株(CT26)及人真皮微血管内皮细胞株(HDMEC)增殖的影响。结果:LBP用药组CT26结直肠癌小鼠肿瘤重量为(0.31±0.04)g小于对照组(0.63±0.06)g(P<0.05);绘制肿瘤生长体积曲线,发现LBP可抑制小鼠肿瘤的生长(P<0.05)。CD31染色显示LBP用药组小鼠肿瘤间质血管密度小于模型组(P<0.05)。LBP对大鼠动脉环血管形成具有明显抑制作用,且与浓度有关。体外实验发现,与对照组比较,LBP 500μg/m L及1 000μg/m L处理HDMEC后,BAI1表达上调(P<0.01);LBP药物浓度设定在0~1 000μg/m L之间,随着浓度的增加,LBP对小鼠结直肠癌CT26细胞及HDMEC细胞增殖均无明显的影响。结论:LBP对小鼠结直肠癌生长的抑制作用可能与抑制血管形成、上调BAI1表达有关,但具体的作用机制有待进一步阐明。

枸杞多糖对离体缺血性脑损伤后PARP-1和AIF的影响

目的:探讨枸杞多糖(LBP)对原代培养的大鼠海马神经元氧糖剥夺损伤后调亡通路PARP-1/AIF的影响。方法:以原代培养的新生大鼠海马神经元为研究对象,用无糖培养液结合物理性缺氧建立氧糖剥夺损伤模型。Hoechst 33342染色法、Annexin V-FITC/PI法检测原代培养的新生大鼠海马神经细胞的凋亡;化学比色法测定神经细胞NAD含量的变化;琼脂糖凝胶电泳法检测DNA Ladder;免疫蛋白印迹技术和实时荧光定量PCR技术检测凋亡相关因子PARP-1、AIF和Endo G的蛋白和mRNA的表达。结果:与正常组比较,模型组可显著降低神经细胞NAD的含量;神经元出现明显的DNA梯度;Hoechst 33342和Annexin V-FITC/PI法检测显示神经细胞凋亡率明显升高;出现大量的DNA断裂片段;PARP-1和AIF的蛋白水平明显上调,Endo G蛋白水平明显下调;PARP-1、AIF和Endo G的mRNA水平明显上调。与模型组比较,枸杞多糖治疗组(10、20、40 mg/L)和尼莫地平组可显著提高海马神经细胞NAD的含量;DNA梯度有不同程度的缓解;显著降低神经细胞的凋亡率;对DNA梯度有不同程度的缓解;明显抑制PARP-1和AIF蛋白表达,增强Endo G蛋白的表达;明显抑制PARP-1,AIF和Endo G mRNA表达。结论:枸杞多糖通过抑制PARP-1/AIF凋亡通路对氧糖剥夺再灌注损伤的新生大鼠海马神经元发挥保护作用。

枸杞多糖对人肺腺癌A549细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨枸杞多糖(LBP)对体外培养的人肺腺癌细胞A549的增殖抑制作用及其可能的作用机制。方法用不同浓度的LBP处理A549细胞,MTT法检测24、48、72 h时间点LBP对A549细胞的生长抑制率,实验设为对照组和实验组(1/2IC_(50)作用48小时),MTT法绘制生长曲线、细胞计数计算倍增时间、流式细胞仪检测凋亡率及其细胞周期、RT-PCR检测Survivin mRNA的变化、Western blot检测CyclinB1蛋白的变化,transwell体外侵袭实验观察药物对细胞体外侵袭的影响。结果 MTT显示不同浓度的LBP均能明显抑制A549细胞的增殖且成剂量-效应关系,实验组细胞的倍增时间、凋亡率与对照组相比,均有统计学意义(P<0.05);LBP使细胞阻滞在G_2期,Survivin mRNA表达和CyclinB1蛋白的表达均降低,与对照组相比差异有显著性(P<0.05)。结论 LBP可抑制A549细胞的增殖,其机理可能与LBP使Survivin mRNA表达下降引起细胞凋亡及CyclinB1蛋白的表达降低造成细胞周期阻滞及抑制细胞的侵袭能力有关。

枸杞多糖调控口蹄疫重组腺病毒疫苗诱导DC及T细胞亚群的研究

近年来,随着许多病毒性疾病的发展,社会对于新型疫苗的研发迫在眉睫。与传统疫苗相比,新型疫苗具有安全可靠的优点,但其免疫原性较弱的特点也十分突出,因此,研究出安全稳定有效的免疫调节剂来增强疫苗的免疫效果成为研究学者们共同的关注点。枸杞是传统的名贵补益中药,枸杞多糖(Lycium barbarum polysaccharide,LBP)是其中的主要生物活性成分,具有免疫调节、抗肿瘤、抗衰老等多种生物学作用。本研究通过体内实验观察LBP对口蹄疫重组腺病毒疫苗(rAd5VP1)诱导小鼠脾脏树突状细胞(Dendritic cells,DC)成熟、辅助性T细胞1(T helper cells 1,Th1)、辅助性T细胞2(T helper cells 2,Th2)、滤泡辅助性T细胞(T follicular helper cells,Tfh)及调节性T细胞(Regulatory T cells,Treg)分化的免疫调节作用,为阐明LBP免疫调节的新机制提供实验依据。6周龄的雌性BALB/c小鼠随机分为5组,每组5只,所有小鼠均行腹腔注射rAd5VP1,同时分别给予低剂量(10mg/kg·d)、中剂量(20mg/kg·d)、高剂量(40mg/kg·d)的LBP,阴性对照组和阳性对照组分别给予磷酸盐缓冲液(Phosphate buffer solution,PBS)和脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)(1mg/kg·d)。免疫7d后,应用流式细胞术(Flow cytometry,FCM)检测小鼠脾脏DC(CD11c+MHCⅡ+CD86+)、Th1细胞(CD4+IFN-γ+)、Th2细胞(CD4+IL-4+)、Tfh细胞(CD4+CXCR5+)及Treg细胞(CD4+CD25+FoxP3+)的数量与比例。结果表明,与PBS组相比,LBP能明显诱导DC的成熟,DC表面的共刺激分子CD86的表达量明显升高;LBP能明显促进Th2细胞、Tfh细胞的分化,LBP对Th1细胞的分化无明显影响,LBP能抑制Treg细胞的分化。本研究证实LBP作为疫苗免疫调节剂,可调控DC及Th细胞亚群的分化而发挥免疫调节作用,为LBP的免疫调节机制提供理论依据。