CaSR/自噬信号轴介导枸橼酸二乙酯抑制慢性肾脏病血管钙化

目的探讨钙敏感受体(calcium sensing receptor,CaSR)/自噬信号轴在枸橼酸二乙酯(diethyl citrate,Et 2Cit)抑制慢性肾脏病(chronic kidney disease,CKD)血管钙化中的作用。方法将大鼠和血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)分别分为正常对照组、模型组及低、高剂量Et 2Cit组和高剂量Et 2Cit+NPS-2143(CaSR抑制剂)组进行干预,试剂盒法检测各组大鼠主动脉钙含量;茜素红染色法检测各组细胞钙化情况;qRT-PCR法和Western blotting检测各组大鼠主动脉中钙化相关蛋白、CaSR和自噬相关蛋白的mRNA和蛋白表达。结果与对照组相比,模型组钙化显著增加,Et 2Cit干预呈剂量依赖性地降低钙化程度(P<0.05);高剂量Et 2Cit+NPS-2143组钙含量较高剂量Et 2Cit组显著增加(P<0.05);与对照组相比,模型组平滑肌22α(smooth muscle 22α,SM22α)、CaSR和Beclin1的mRNA和蛋白表达降低(P<0.05),核心结合因子(runt related transcription factor 2,RUNX2)和P62表达升高(P<0.05);Et 2Cit干预能逆转以上变化(P<0.05);与高剂量Et 2Cit组相比,高剂量Et 2Cit+NPS-2143组的SM22α、CaSR和Beclin1显著降低,而RUNX2和P62显著增加(P<0.05)。结论Et 2Cit抑制CKD血管钙化,这一过程依赖CaSR和CaSR/自噬信号轴。

枸橼酸二乙酯介导CaSR降低CRF血管钙化的氧化应激水平

目的探讨枸橼酸二乙酯(diethyl citrate,Et2Cit)抑制慢性肾衰竭(chronic renal failure,CRF)血管钙化氧化应激的作用及其机制。方法SD大鼠分4组:正常对照组、模型组、Et2Cit组,Et2Cit+NPS2143(钙敏感受体抑制剂)组;茜素红染色检测大鼠主动脉钙化水平;利用试剂盒检测大鼠主动脉和血浆中超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)和一氧化氮(nitric oxide,NO)的含量。细胞分4组:正常对照组、高磷组、Et2Cit组和Et2Cit+NPS2143组;超氧化物阴离子荧光探针(dihydroethidium,DHE)染色半定量检测细胞DHE水平,流式细胞仪定量检测细胞DHE和活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平。结果与对照组相比,模型组主动脉钙化程度明显升高,伴血浆和主动脉SOD和NO水平降低(P<0.05);Et2Cit干预能降低主动脉钙化并增加SOD和NO水平(P<0.05);当同时给予NPS2143时,Et2Cit抑制钙化的作用减轻,伴SOD和NO水平降低(P<0.05)。高磷环境下细胞中DHE和ROS含量升高(P<0.05),Et2Cit干预能降低DHE和ROS含量(P<0.05);与Et2Cit干预组相比,当同时给予NPS2143时,细胞DHE和ROS水平升高。结论Et2Cit抑制CRF血管钙化的氧化应激水平,该作用依赖于钙敏感受体。