血脑屏障通透性在柏子仁油改善大鼠术后认知中的作用

探究血脑屏障通透性在柏子仁油改善SD大鼠手术后认知功能中的作用。方法 选用60只成年SD大鼠,随机分为空白组(20只),实验组(20只),对照组(20只),给予实验组大鼠柏子仁油(0.066g/kg)灌胃15天。实验组和对照组大鼠行切脾手术,使用Morris水迷宫实验来检测柏子仁油对认知功能的影响。在手术后3天,应用酶联免疫吸附实验(ELISA)对炎症因子白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子(TNF-α)进行检测;通过对脑组织伊文思蓝(EB)的含量变化反映大鼠血脑屏障的改变;使用蛋白质印迹法(Western blot)对脑中闭锁蛋白(Occ)蛋白量和紧密连接蛋白-1(ZO-1)蛋白量的表达和脑组织中海马磷酸化核因子-κB p65(p-NF-κB p65)进行检测;应用免疫荧光技术(IF)来检测海马胶质酸性蛋白(GFAP)的表达。结果 手术后3天,与空白组相比,对照组大鼠的认知能力明显降低(P<0.01),脑组织通过血脑屏障的EB含量进一步增多(P<0.01),海马组织p-NF-κB p65、炎症因子TNF-α和IL-6、GFAP的表达进一步增高,脑中ZO-1和Occ表达均进一步减少。与对照组相比,实验组大鼠的认知能力进一步提高(P<0.01),脑组织通过血脑屏障渗出的EB含量进一步减少(P<0.01),海马组织p-NF-κB p65、炎症因子TNF-α和IL-6、GFAP表达均进一步降低,脑中ZO-1和Occ表达均进一步增高。结论 柏子仁油可以使血脑屏障通透性降低,改善SD大鼠术后认知功能。

内质网应激在柏子仁油改善PND大鼠术后认知功能中的作用及机制

本课题研究内质网应激在柏子仁油改善PND大鼠术后认知功能中的作用及机制。方法 60只SD大鼠随机分为对照组(手术处理,n=20)、空白组(n=20)、实验组(以0.066g/kg剂量柏子仁油灌胃15天+手术处理,n=20)。在术前五天对全部动物进行持续5天的Morris水迷宫定位巡航实验,第6天对实验组和对照组进行脾切除术,术后第1天全部大鼠进行Morris水迷宫参考记忆测试及取海马区组织分别进行酶联免疫法(ELISA)检测IL-1β及TNF-α水平,qPCR法检测CHOP mRNA 水平,Western blot法测定海马caspase-12水平。结 果 空间定位巡航实验的数据表明与其余两组相比,实验组逃避潜伏期、逃避潜伏期路程显著减少(P<0.05);随着天数的增加,三组大鼠的逃避潜伏期、逃避潜伏期路程均持续减少(P<0.05);在术后第1天水迷宫实验中,与空白组相比,对照组的平台象限时间百分比及路程百分比均明显减少(P<0.05);与对照组相比,实验组的平台象限时间百分比及平台象限路程百分比均明显增加(P<0.05);与空白组相比,对照组IL-1β、TNF-α、CHOP mRNA、caspase-12、p-PERK表达水平均显著增加(P<0.05);与对照组相比,实验组IL-1β、TNF-α、CHOP mRNA、caspase-12、p-PERK表达水平均显著减少(P<0.05)。结论 柏子仁油通过抑制PERK/CHOP通路及caspase-12蛋白来缓解内质网应激从而改善PND大鼠术后认知功能。

柏子仁皂苷和柏子仁油改善睡眠作用的研究

目的通过观察柏子仁皂苷和柏子仁油对小鼠阈下催眠小鼠只数和睡眠时间的影响,考察两柏子仁成分的药效学作用。方法18－22 g昆明种小鼠,按体重、性别均衡随机分为空白对照组,柏子仁皂苷高、中、低剂量组,柏子仁油高、中、低剂量组,共7组。连续给药10 d观察小鼠入睡只数、阈下剂量催眠时间,计算各组小鼠睡眠延长时间。结果柏子仁皂苷高剂量组入睡小鼠只数明显增多,中低剂量不明显。柏子仁油三个剂量组均能不同程度地增加小鼠睡眠只数,其中低剂量组作用明显,高、中剂量组作用相当。柏子仁皂苷高剂量组能明显延长小鼠睡眠时间,中、低剂量组作用相对较弱。柏子仁油低剂量组能明显延长小鼠睡眠时间,高、中剂量组作用相对较弱。结论柏子仁皂苷和柏子仁油均具有镇静催眠作用,柏子仁皂苷作用在一定范围内随剂量增加镇静催眠作用加强,柏子仁油镇静催眠作用在较低浓度时作用增强,在一定范围内又随浓度的增高而药效学作用降低。

正交设计研究酸枣仁油与柏子仁油配伍对小鼠自主活动的影响

目的观察酸枣仁油与柏子仁油合用对小鼠自主活动的影响,探讨酸枣仁油与柏子仁油配伍的合理性及配伍的最佳组合。方法采用正交设计进行拆方研究,确定因子数和水平,按正交表L9(34)设计,将小鼠分为9个组,每组重复5次,分别给予不同的剂量组合,并观察小鼠用药后的自主活动次数。结果酸枣仁油及柏子仁油均能减少小鼠自主活动次数(P<0.05),两者之间有交互作用(P<0.05)。结论酸枣仁油和柏子仁油均为主要因素,两者配伍合理并且最佳组合为酸枣仁油与柏子仁油均为5.0mL·kg-1。

柏子仁油的化学成分研究

应用气相色谱—质谱测定了中药柏子仁中脂肪油的化学成分。柏子仁油中除含微量挥发油外，主要是脂肪油。脂肪油的主要成分为不饱和脂肪酸，含量为总脂肪酸的６２．３９％，柏子仁油的含量约为５７．４０％（约有０．

响应曲面法优化超声提取柏子仁油的工艺研究

在单因素试验的基础上,采用Box-Behnken设计对超声提取柏子仁油工艺中的液料比、超声温度和超声时间3因素的最优化组合进行了定量研究,建立并分析了各因素与得率关系的数学模型。结果表明:最佳的工艺条件为液料比10.3mL/g,超声温度59℃和超声时间36min。经试验验证,在此条件下,得率为42.88%,与理论计算值42.56%基本一致。说明回归模型能较好地预测柏子仁油的提取得率。

超临界CO_2萃取柏子仁油的β-环糊精包合工艺

采用超临界CO2萃取法提取柏子仁油,然后采用β-环糊精饱和水溶液法制备柏子仁油/β-环糊精包合物.以包合物产率为主要筛选指标,考察影响包合工艺的主要因素,并用正交试验优化最佳包合条件.结果表明,在β-环糊精与柏子仁油的质量体积比为10∶1,包合温度为70℃,包合时间为60 min,水与β-环糊精的体积质量比为12∶1的最优条件下,包合物的平均产率为82.13%,变异系数为1.37%.紫外扫描与红外光谱分析表明,β-环糊精能够对柏子仁油进行有效包合.

CO_2超临界制备的柏子仁油及柏子仁霜的安神功效研究

目的:研究CO2超临界制备的柏子仁油及柏子仁霜安神功效。方法:观察柏子仁油及柏子仁霜对小鼠直接睡眠、小鼠自主活动、戊巴比妥钠阈下剂量引起小鼠睡眠个数、戊巴比妥钠引起小鼠睡眠潜伏期、睡眠时间的影响。结果:柏子仁油及柏子仁霜不能引起小鼠直接睡眠,能显著减少小鼠自主活动次数,增加戊巴比妥钠阈下剂量引起小鼠睡眠个数,延长戊巴比妥钠引起小鼠睡眠时间,但对入睡潜伏期无明显影响。结论:CO2超临界制备的柏子仁油及柏子仁霜与传统方法制备的柏子仁油、柏子仁霜具有相似的安神功效。

柏子仁油对老年大鼠术后海马神经生长因子及其受体的影响

研究柏子仁油对老年大鼠术后海马神经生长因子(NGF)水平的影响。方法 将45只老年大鼠随机分成3组:空白组、实验对照组(脾切除)、实验组(脾切除+柏子仁油0.066g/kg),每组15只。给予实验组以柏子仁油灌胃,给予空白组与实验对照组用生理盐水灌胃,每日一次,连续灌胃15天后行脾切除手术建模。建模后的第1天取3组大鼠的海马组织,使用蛋白免疫印迹法(WB)检测老年大鼠海马区域NGF及其功能性受体TrkA的表达情况。结果 WB检测结果显示实验组的NGF和TrkA的表达水平较实验对照组明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 术前应用柏子仁油能够提升老年大鼠术后海马组织NGF和TrkA水平。

海马神经元自噬在柏子仁油改善大鼠术后认知功能中的作用及相关机制

探索柏子仁油对老年大鼠海马神经元自噬和术后认知功能的影响及其相关机制。方法 选取60只老年雄性SD大鼠,随机分为空白组、实验对照组和实验组每组各20只,给予实验组用柏子仁油0. 066 g /kg灌胃,连续灌胃15天,每天一次。所有动物在脾切除手术前进行连续5天的Morris水迷宫定位航行实验,于第6天对空白组以外大鼠进行脾切除模型构建,在术后第1天对实验动物进行Morris水迷宫空间探索实验测试大鼠认知功能后进行实验取材,应用免疫荧光双标法对海马组织切片中LC3Ⅰ和LC3Ⅱ免疫荧光进行观察;应用实时荧光定量PCR法对海马组织中Beclin-1RNA表达量进行检测;应用 Western blot 法对海马组织中Beclin-1蛋白量和LC3Ⅱ/ LC3Ⅰ比例进行检测;应用酶联免疫法检测对海马组织中肿瘤坏死因子–α(TNF–α)和白细胞介素–1β(IL–1β)的水平。结果 在术后第1天的Morris水迷宫空间探索实验中,除空白组外,其他组大鼠的空间记忆能力均有明显下降,且实验对照组下降程度明显强于实验组(p<0.05)。与空白组相比,对照组和实验组大鼠海马CA1区LC3Ⅰ和LC3Ⅱ的免疫荧光表达均有增强,而实验组大鼠免疫荧光表达强度明显高于对照组大鼠(p<0.05)。实验组大鼠与实验对照组相比,大鼠海马CA1区神经元细胞体内自噬体的表达进一步增强,LC3-Ⅱ/LC3Ⅰ比例进一步增高,Beclin-1水平明显提高(p<0.05)。大鼠海马CA1区促炎因子IL-1β及TNF-α水平,实验对照组明显高于实验组,且空白组最低(p<0.05)。结论 柏子仁油通过增强自噬水平和降低炎性反应来改善大鼠的术后认知功能。

超声波协同微波提取柏子仁油的工艺优化

在单因素试验的基础上,采用Box-Behnken设计对超声提取柏子仁油工艺中的液料比、提取时间和微波功率3因素的最优化组合进行了定量研究,建立并分析了各因素与得率关系的数学模型。结果表明:最佳的工艺条件为液料比10.5mL/g、提取时间154s和微波功率340W。经试验验证:在此条件下,得率为37.95%,与理论计算值38.33%基本一致。说明回归模型能较好地预测柏子仁油的提取得率。

酸柏栀油软胶囊对小鼠镇静催眠促学习记忆作用的影响

目的观察酸柏栀油软胶囊的镇静、催眠、促学习记忆作用。方法利用权重配设计实验,观察小鼠自发活动,研究酸柏栀油软胶囊的组方;利用光电计数法观察灌胃给予酸柏栀油软胶囊对小鼠自发活动的影响和长期使用对小鼠耐受性的影响以及对中枢兴奋药和抑制药的影响;利用直接睡眠实验、戊巴比妥钠睡眠潜伏期实验和延长戊巴比妥钠睡眠时间实验及戊巴比妥钠阈下催眠剂量实验,观察酸柏栀油软胶囊的催眠作用;利用水迷宫法观察酸柏栀油软胶囊的促学习记忆作用。结果组方研究表明,酸柏栀油软胶囊中酸枣仁油是君药,柏子仁是臣药,栀子是佐使药,三药的最佳配比是3∶3∶1,药物间重要程度依次为:酸枣仁油和栀子油>酸枣仁油和柏子仁油>酸枣仁油,且酸枣仁油、栀子油与酸枣仁油、柏子仁油有协同作用;酸柏栀油软胶囊可抑制小鼠自主活动,与地西泮相比,酸柏栀油软胶囊起效较慢,随用药时间延长镇静作用逐渐增强,且无耐受现象,酸柏栀油软胶囊还可增强或减弱中枢抑制药和兴奋药的作用;酸柏栀油软胶囊无直接睡眠作用,有缩短小鼠潜伏期、延长睡眠持续期的作用,并可增加入睡小鼠睡眠数;酸柏栀油软胶囊缩短登台潜伏期,随用药时间的延长,作用逐渐明显。结论酸柏栀油软胶囊组方合理,该复方具有镇静、催眠、促学习记忆作用。

基于网络药理学与肠道菌群的柏子仁脂肪油改善Aβ_(25-35)诱导小鼠脑损伤的作用研究

研究柏子仁脂肪油(Platycladi Semen oil,SP)对Aβ_(25-35)诱导小鼠脑损伤的保护作用及其机制,为临床治疗阿尔茨海默病(Alzheimer′s disease,AD)提供理论依据。雄性昆明(KM)小鼠随机分为对照组、模型组(脑部注射200μmol·L-1Aβ_(25-35)溶液,0.15μL·g^(-1))、阳性药多奈哌齐组(10 mg·kg^(-1))及柏子仁脂肪油低、高剂量(0.5、1 mL·kg^(-1))组。探究各组小鼠的学习记忆功能、神经元损伤、Aβ1-42/Aβ1-40、p-Tau、细胞凋亡、氧化应激相关指标、免疫细胞及鞘氨醇激酶1(sphingosine kinase 1,SPHK1)/鞘氨醇-1-磷酸(sphingosine-1-phosphate,S1P)/鞘氨醇-1-磷酸受体5(sphingosine-1-phosphate receptor 5,S1PR5)通路相关蛋白或mRNA水平。接着利用气相色谱-质谱联用(gas chromatography-mass spectrometry,GC-MS)分析SP中的成分,并通过网络药理学、肠道菌群(gut mircrobiota,GM)16S rDNA测序及分子对接技术探讨SP干预AD的作用机制。结果显示SP可改善Aβ_(25-35)诱导小鼠的学习记忆功能,减少海马神经元损伤,降低脑内Aβ1-42/Aβ1-40、p-Tau、细胞凋亡和氧化应激相关指标的水平,并维持小鼠机体免疫细胞和GM的稳态。网络药理学和GM测序分析显示,SP对AD的治疗作用与鞘脂通路相关。同时,(Z,Z,Z)-9,12,15-十八碳三烯酸和(Z,Z)-9,12-十八碳二烯酸是SP中含量最高的2种成分,与SPHK1和S1PR5有较好的结合活性。因此,推测SP通过调节肠道菌群,抑制SPHK1/S1P/S1PR5通路来发挥抗凋亡和抗氧化作用,从而改善Aβ_(25-35)诱导小鼠的脑损伤;并且(Z,Z,Z)-9,12,15-十八碳三烯酸和(Z,Z)-9,12-十八碳二烯酸可能是SP发挥抗AD作用的物质基础。