应用改进的多克隆抗体Western blot技术研究柑桔速衰病毒蛋白(英文)

本文利用多克隆抗体发展了一种无背景的 Western blot技术并用于研究柑桔速衰病毒( CTV)的蛋白。结果表明 ,利用 CTV兔多克隆抗体 12 12和 10 52发展的 Western blot技术可以检测到感染 CTV的墨西哥酸橙或 Citrusexcelsa植株内 CTV的 4种蛋白 P1、P2、P3和 P4。在健株或病株内杂交反应均无非特异性背景。从不同寄主上分离到的 CTV不同分离物的蛋白条带是不同的。利用12 12和 10 52抗体均可以检测到感染 6个 CTV分离物的墨西哥酸橙幼苗内的 P1、P2和 P3。利用10 52抗体能检测到感染严重型分离物 T36、T3和 Mm2的墨西哥酸橙幼苗内微弱的 P4 ,但感染轻型分离物 T30、T2 6和 T4的幼苗内则检测不到。利用 12 12抗体检测不到 P4。在 C.excelsa内 ,12 12和10 52抗体均能检测到感染所有分离物的病株内的 P1。在感染 T3、T2 6、T4或 Mm2的病株内能检测到 P2 ,但在感染 T30和 36分离物的病株内则检测不到。在感染 T36、T3、T2 6、T4和 Mm2的病株内可检测到 P3,但在感染 T30的病株内则检测不到。在大多数植物内 ,P1、P2、P3和 P4的分子量分别约为 2 5k Da,2 4 k Da,2 1k Da和 18k Da。在感染 T36分离物的 C. excelsa植株体内 ,P1和 P3的分子量分别约为 2 7k Da和 2 2 k Da,比感染其它分离物的 C.excelsa和墨西哥酸?

柑桔速衰病毒株系特异性单克隆抗体的制备及其免疫学特性

以感染枸橼的柑桔速衰病毒(Citrus tristeza virus,CTV)的部分纯化制备物和浓缩的感染组织粗浸出液免疫BALB/C小白鼠后获得的脾脏细胞,与鼠骨髓瘤细胞株P3-X63-Ag8.653融合制备了杂交瘤细胞.免疫小鼠的CTV株系为T514,杂交瘤细胞以有限稀释法获得纯克隆,并以健康枸橼和CTV不同株系感染枸橼的组织浸出液筛选各克隆,并确认各克隆与CTV各株系的免疫反应性.经以碱性磷酸酶标记的山羊抗鼠IgG进行酶联免疫吸附试验(ELISA),对各杂交瘤克隆的株系特殊性分析证明,从这些杂交瘤细胞中获得了能产生CTV株系特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株.

柑桔速衰病毒的鉴定新技术

文中对鉴别柑桔速衰病毒及株系的4种新技术的程序和存在问题作了详细介绍,这4种新技术包括罹病植株双链核糖核酸(dsRNA)分析,病毒外壳蛋白肽图分析、互补脱氧核糖核酸探针与CTV分子杂交技术。它们将来可望用于CTU的株系鉴别。