采用倍性分析仪鉴定柑橘愈伤组织的遗传变异

使用倍性分析仪 ,对 4 8种培养多年不同基因型的柑橘愈伤组织的细胞DNA含量进行了测定。结果发现 ,除了路比葡萄柚、尾张和金诺橘等 3种愈伤组织变异较小 ,未出现第二个峰以外 ,有 93 8%的基因型的愈伤组织的细胞均出现了DNA含量加倍的细胞。通过DPAC分析软件分析得知 ,凤梨甜橙三倍体、宁波金柑、长沙橘、鲁斯脐橙、国庆 4号和卡特夏橙等 6种愈伤组织的细胞DNA含量还出现了三倍增加及非整倍增加的现象。在待测的 4 8种愈伤组织中 ,DNA含量变异细胞的百分率最大者为凤梨甜橙三倍体 ,达 18 5 1% ;最小者为暗柳橙 ,为 4 70 %。通过邓肯氏新复极差分析得知 ,不同基因型的DNA含量变异细胞的百分率之间存在差异显著性。在相同继代培养基和相同继代周期的条件下 。

钙对低温下柑橘愈伤组织渗透物质的调节

研究了不同Ca2+浓度和Ca2+信号系统抑制剂对低温下柑橘愈伤组织中3种主要渗透调节物质的影响。结果表明,外源5 mmol/L Ca2+能明显地增加柑橘愈伤组织可溶性蛋白质、可溶性糖和脯氨酸含量。采用Ca2+螯合剂EGTA或钙调素拮抗剂TFP对柑橘愈伤组织低温处理12 d后,柑橘愈伤组织中可溶性蛋白质、可溶性糖和脯氨酸含量降低。以上结果说明Ca2+信号系统参与了调节柑橘抗寒过程中渗透物质的合成。

反相高效液相色谱法测定柑橘愈伤组织多胺

研究了影响多胺测定的苯甲酰化反应的时间和温度,以及用反相高效液相色谱法测定柑橘愈伤组织多胺的条件.结果表明,苯甲酰化反应的最佳条件为 37 ℃,反应 30 min.采用 Waters C18反向柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),G1314A 紫外检测器,以甲醇-水溶液(体积比为 64∶36)为流动相,流速 0.7 mL/min,柱温 30 ℃,检测波长 230 nm,外标法定量.该法灵敏、准确.

柑橘胚性愈伤组织总多酚含量影响因素的研究

研究了甲醇水溶液浓度和浸提时间、品种/基因型、培养时间对柑橘胚性愈伤组织总多酚含量的影响。结果表明,用40%的甲醇溶液在55℃水浴条件下浸提30min,柑橘胚性愈伤组织总多酚的得率最高;总多酚含量受品种/基因型的影响,在所比较的6个柑橘品种/基因型暗柳橙、椪柑、默科特橘橙、无酸甜橙、锦橙和红马叙葡萄柚中,暗柳橙胚性愈伤组织的总多酚含量最高;总多酚含量随培养时间的改变而变化,在培养40d时各品种/基因型胚性愈伤组织的总多酚含量均达到最大值。

TDZ对柑橘胚性组织生长与遗传转化的影响

噻苯隆(Thidiazuron,TDZ)是一类人工合成的苯基脲衍生物,广泛用于多种植物的组织培养。本文以椪柑胚性愈伤组织和球形胚状体为试材,研究了不同浓度TDZ对柑橘胚性愈伤组织增殖与胚状体发育的影响;在此基础上,研究了TDZ对12种柑橘胚性愈伤组织转化的影响。结果表明,培养基中添加较低浓度的TDZ可促进椪柑胚性愈伤组织的增殖,以0.4mg/L为最佳,超过该浓度则起抑制作用。单独使用TDZ不能促进该品种体胚的发生与再分化,但可促进胚状体体积的增大。在筛选培养基和共培养培养基中附加0.4mg/L TDZ,可明显促进椪柑抗性愈伤组织的增加和提高多种柑橘胚性愈伤组织的GFP瞬时荧光表达率,从而提高转化率。

Ca^(2+)信号系统对低温下柑橘膜脂过氧化和抗氧化酶的影响

研究不同Ca2+处理对低温下柑橘愈伤组织膜脂过氧化和抗氧化酶的变化。结果表明,一定低浓度的Ca2+(5mmol/L)能明显减少柑橘愈伤组织膜伤害率和膜脂过氧化产物MDA的积累,增加渗透调节物质可溶性蛋白质的含量,提高膜保护性酶SOD和POD的活性,从而增强柑橘的抗寒性。采用Ca2+螯合剂乙二醇双乙胺醚-N,N′-四乙酸(ethylene glycol-bis-β-aminoethylether-N,N′-tetraacetic acid,EGTA)或钙调素(cal mod-ulin,Ca M)拮抗剂三氟拉嗪(trifluoperazine,TFP)处理会增加膜伤害率和MDA的积累,减少可溶性蛋白质的合成,降低SOD和POD的活性。说明钙信号系统参与调节柑橘抗寒中膜脂过氧化和保护性酶等生理生化反应。