8-异戊烯基柑橘素促进体外培养成骨细胞成熟矿化的研究

研究8-异戊烯基柑橘素对体外培养大鼠颅骨成骨细胞(rat skull osteoblasts,ROB)的分化成熟及生物矿化的影响.取新生大鼠颅骨多次酶消化法得到成骨细胞,培养于含10%FBS的MEM培养液中,3天后首次换液,待细胞铺满皿底传代培养.以碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)为检测指标,96孔板梯度筛选作用最佳浓度,在最佳浓度作用并成骨性诱导培养的第3、6、9、12天测ALP活性、钙盐沉积量;第12天进行ALP和钙化结节组织化学染色及计数;成骨性诱导后不同时间点提取Total RNA,RT real-time PCR法检测成纤维细胞生长因子(bFGF)、胰岛素样生长因子-1(IGF-1)、成骨相关转录因子Osterix、Runx-2和骨形态发生蛋白-2(BMP-2)的基因表达情况;成骨性诱导的第4、8、12天裂解获得细胞总蛋白,蛋白质印迹法检测人Ⅰ型胶原蛋白(COL-Ⅰ)的蛋白质表达量.研究结果表明:1×10-6 mol/L能显著促进成骨细胞的成熟分化,表现为提高ROB的ALP活性、促进钙盐沉积、增加钙化结节数量;提高bFGF、IGF-1、Osterix、Runx-2和BMP-2 mRNA表达水平;促进COL-Ⅰ的合成.由此可知终浓度为1×10-6 mol/L 8-异戊烯基柑橘素能显著促进ROB的分化成熟及生物矿化,证明8-异戊烯基柑橘素能促进成骨细胞的分化成熟及生物矿化,作为促进骨修复和抗骨质疏松的有效成分具有较大的药用价值.

8-异戊烯基柑橘素促进体外骨髓基质干细胞成骨性分化的研究

目的研究8-异戊烯基柑橘素对体外培养大鼠骨髓基质干细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)的增殖与成骨性分化的影响。方法取大鼠股骨及胫骨全骨髓,利用全骨髓培养法培养于含体积分数为10%FBS的DMEM-F12培养液中。以碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)为指标,96孔板梯度筛选作用最佳浓度。增殖分析采用MTT法。以1×10-6 mol.L-1的最佳浓度作用并成骨性诱导(1×10-7mmol.L-1地塞米松、10 mmol.L-1β-甘油磷酸钠和50 mg.L-1抗坏血酸)培养的d 4、8、12、16测ALP活性、钙盐沉积量,d 16进行ALP和钙化结节组织化学染色及计数。成骨性诱导后不同时间点提取Total RNA,RT Real-Time PCR法检测bFGF、IGF-1、Osterix、Runx-2、BMP-2及COL-Ⅰ的基因表达情况。结果 8-异戊烯基柑橘素不能促进BMSCs增殖,但8-异戊烯基柑橘素在1×10-6 mol.L-1时能促进其向成骨性分化,表现为提高BMSCs的ALP活性、促进钙盐沉积、增加钙化结节数量、提高bFGF、IGF-1、Osterix、Runx-2、BMP-2及COL-Ⅰ的mRNA表达水平。结论 8-异戊烯基柑橘素可诱导骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化,作为促进骨修复和抗骨质疏松的有效成分具有较大的药用价值。

柑橘素预处理对大鼠离体心脏缺血/再灌注损伤的保护作用

目的探讨柑橘素预处理对大鼠离体心脏缺血/再灌注损伤的保护作用。方法 56只SD雄性大鼠,随机分为正常对照组(CON)、柑橘素1、2.5、5、10、20、40μmol/L组(NARI)。各组大鼠心脏平衡灌流30 min后,对照组给予30 min全心缺血和60 min再灌注处理(或120 min用于测定心肌梗死面积),NARI组大鼠缺血前分别给予1、2.5、5、10、20、40μmol/L Nari灌流10 min预处理,再行30 min全心缺血和60 min再灌注处理(或120 min用于测定心肌梗死面积)。观测各组大鼠左心室舒缩功能,测定心肌乳酸脱氢酶含量、心肌超氧化物歧化酶(SOD)活力和丙二醛(MDA)含量,并计算心肌梗死面积百分比。结果与CON组相比,2.5μmol/L及以上浓度NARI预处理组大鼠缺血/再灌注后心功能恢复提高、乳酸脱氢酶含量降低和心肌梗死面积减少,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。与对照组相比,2.5μmol/L及以上浓度NARI组大鼠心肌SOD活力明显增加,MDA含量明显降低,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论柑橘素对大鼠离体心脏缺血/再灌注损伤具有保护作用,其作用机制可能与增强心肌对缺氧的适应能力相关。

柑橘素抗心肌缺血/再灌注损伤研究进展

柑橘素（即柚皮素）是一种黄酮类的植物化合物,自然界中主要存在于葡萄柚、柠檬、番茄等蔷薇科、芸香科、柑橘属植物的果实或者果皮中。柑橘素在植物中相对含量低,但其来源广泛,随着近年来柑橘素提取和纯化方法的进一步提高,对柑橘素的药理学作用的了解更为深入。

柑橘素预处理对大鼠缺血/再灌注心脏损伤后能量代谢的影响

目的探讨柑橘素预处理对大鼠缺血/再灌注心脏损伤后能量代谢的影响。方法将50只雄性成年Sprague-Dawlay大鼠按照随机数字表法分为五组(n=10):空白对照组、模型组和柑橘素低、中、高剂量组(5、10、20μmol/L)。各组大鼠心脏分别给予30 min全心缺血,然后给予120 min再灌注;柑橘素低、中、高剂量组大鼠分别在缺血前给予5、10、20μmol/L柑橘素预处理;灌注结束后测定各组大鼠心肌乳酸脱氢酶含量、心肌梗死面积,测定心肌组织Na^+/K^+-ATP酶和Ca^(2+)/Mg^(2+)-ATP酶的活力。结果缺血再灌注损伤后,与模型组比较,柑橘素低、中、高剂量组乳酸脱氢酶含量下降(P <0.05或P <0.01),心肌梗死面积减小(P <0.05或P <0.01),心肌组织Na^+/K^+-ATP酶、Ca^(2+)/Mg^(2+)-ATP酶活力升高(P <0.05)。结论柑橘素可能通过增强缺血/再灌注大鼠心肌的能量代谢,发挥心脏保护作用。

柑橘素对癫痫大鼠海马组织氧化应激因子及Caspase-9的作用

目的探讨用戊四氮(PTZ)制造的癫痫模型大鼠海马中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase)-9的改变,分析柑橘素的治疗效果和作用途径。方法30只雄性成年大鼠随机分为空白组、癫痫组、柑橘素组各10只。适应性饲养大鼠7 d后进行实验操作。癫痫组与柑橘素组用PTZ腹腔注射,空白组给同剂量的0.85%生理盐水;连续28 d,灌胃给药。其中,柑橘素组进行柑橘素灌胃;另外两组都给予0.85%生理盐水灌胃。观察各组大鼠每天的行为改变;并用不同检测手段测定海马组织中SOD、GSH-Px、MDA及Caspase-9浓度进行分析。结果经柑橘素灌胃治疗后大鼠相对安静,躁动明显减少,偶会抽搐发作,且潜伏期增长,发作时间变短,海马组织内SOD、GSH-Px升高,而MDA及Caspase-9浓度都下降,差异有统计学意义(P<0.05)。结论柑橘素可有效减轻癫痫大鼠的发作,增加发病潜伏期,同时可下调海马中Caspase-9浓度来减轻脑细胞的凋亡、促进脑细胞的存活。另外,柑橘素还能通过双向调节氧化应激因子的含量,降低氧化反应程度来起到保护脑神经细胞、减轻癫痫发作的效果。

8-异戊烯基柑橘素和柑橘素对体外培养大鼠股骨组织代谢活性的影响

目的:比较研究8-异戊烯基柑橘素和柑橘素对体外培养大鼠股骨组织代谢活性的影响。方法:体外分离培养大鼠股骨组织,然后随机分为4组,其中3组分别给予雌二醇(终浓度为1×10-8mol·L-1)、8-异戊烯基柑橘素(终浓度为1×10-5mol·L-1)和柑橘素(终浓度为1×10-5mol·L-1),另外1组加生理盐水作为对照。分别在培养的第3、6、9、12、15和18 d测定大鼠股骨组织中碱性磷酸酶活性和钙含量,并采用RT-PCR检测骨保护素、Ⅰ-型胶原、Runx-2和骨形态发生蛋白基因的mRNA表达水平。结果:8-异戊烯基柑橘素、柑橘素和雌二醇均可提高股骨组织中碱性磷酸酶的活性,增加钙含量,并上调opg、bmp-2、collagen-I和runx-2 mRNA的表达水平;8-异戊烯基柑橘素活性强于柑橘素。结论:8-异戊烯基柑橘素和柑橘素均能改善体外培养大鼠股骨组织的代谢活性。

8-异戊烯基柑橘素抑制骨髓细胞向破骨细胞分化及骨吸收活性

研究8-异戊烯基柑橘素(8-prenylnaringenin,8-PNG)对骨髓细胞向破骨细胞分化及骨吸收活性的影响。从出生24 h内的青紫兰兔四肢骨髓中分离培养破骨细胞,加入8-PNG(1×10 7、1×10 6和1×10 5mol.L 1),以1×10 7mol.L 117β-雌二醇(17β-estradiol,E2)作为阳性对照。培养5天后进行TRAP染色和TRAP活性检测,7天后进行甲苯胺蓝染色和骨吸收陷窝数量与面积的分析。分别于加药后2、4、8、12、24、36及48 h进行AnnexinV染色,观察破骨细胞凋亡情况;于12、24和36 h提取总RNA,用real-time RT-PCR法检测TRAP(tartrate-resistant acid phosphatase)和CTSK(cathepsin K)的基因表达水平。结果显示,8-PNG(1×10 6和1×10 5mol.L 1)组的TRAP染色阳性细胞即破骨细胞数量明显低于空白对照组(P<0.01),但只有8-PNG(1×10 5mol.L 1)组显著低于E2组(P<0.05);TRAP活性的变化呈相同趋势;骨陷窝数和面积的计量结果亦呈相似变化趋势;E2组使破骨细胞的凋亡高峰大大提前,且凋亡数量最多,其次为8-PNG(1×10 5mol.L 1)组,8-PNG(1×10 7mol.L 1)组与空白对照组比较无差异。8-PNG(1×10 7、1×10 6和1×10 5mol.L 1)可显著抑制TRAP和CTSK的基因表达,且呈剂量依赖性。结果表明,8-PNG能抑制骨髓细胞向破骨细胞分化,并能抑制破骨细胞的骨吸收活性,其机制与诱导破骨细胞凋亡和抑制骨吸收关键酶的基因表达与活性有关。

8-异戊烯基柑橘素与柑桔素对体外培养破骨细胞活性影响的比较研究

目的:研究8-异戊烯基柑橘素(8-prenylnaringenin,PNG)和柑桔素(naringenin,NG)影响体外培养破骨细胞活性和凋亡的差异,探讨8-异戊烯基团的生理活性。方法:从青紫兰乳兔四肢长骨中分离出破骨细胞,培养于含10%FBS的α-MEM培养液中,分别加入浓度为1×10-5mol.L-1的PNG和NG。药物干预4 d后进行TRAP染色和TRAP酶活性测定,7 d后进行甲苯胺蓝染色。于加药后48 h内多个时间点进行Annexin V-FITC染色,观察破骨细胞凋亡情况,并提取总RNA,用Real-time RT-PCR法检测TRAP及Cathepsin K(CTSK)的基因表达情况。结果:与对照组相比,PNG和NG组的TRAP阳性细胞即破骨细胞数均显著减少,TRAP酶活性显著降低,形成骨吸收陷窝的数量和面积明显减少,TRAP和CTSK的基因表达水平明显降低。PNG组与NG组相比,以上所有指标均是前者显著低于后者。此外,PNG组的破骨细胞凋亡高峰于加药后12 h到达,而NG组是24 h后到达,且前者的凋亡总数显著高于后者。结论:PNG抑制破骨细胞骨吸收和诱导破骨细胞凋亡的活性明显高于NG。由于两者分子结构的唯一差别在于8-异戊烯基团,因此,8-异戊烯基团可提高黄酮母核的抗骨吸收活性。

柑橘素通对大鼠缺血再灌注心脏损伤作用后氧自由基和热休克蛋白70水平的影响

目的探讨柑橘素(Nari)对大鼠缺血再灌注心脏损伤作用后保护作用。方法将本研究中心56只雄性成年SD大鼠随机分为4组:对照组、Nari组、Nari+格列苯脲(Gli)组、Nari+5-羟基葵酸(5-HD)组;各组大鼠心脏给予30 min全心缺血、60 min再灌注;记录不同Nari浓度水平对再灌注心脏损伤作用,并评估其对氧自由基、热休克蛋白70水平的影响。结果心脏缺血/再灌注后60 min,2.5μmol/L以上Nari组大鼠心脏功能恢复优于对照组;Nari+Gli、Nari+5-HD大鼠心肌梗死面积、冠脉流出液LDH含量均高于10μmol/L Nari组大鼠;心脏缺血/再灌注后60 min,2.5μmol/L、5.0μmol/L、10.0μmol/L、20.0μmol/L Nari组心肌组织HSP70表达水平、SOD水平高于对照组,呈逐渐增加的趋势,心肌组织MDA水平低于对照组,呈逐渐降低的趋势,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论柑橘素对心肌缺血再灌注心脏损伤具有保护作用。

棕色棉纤维四种类黄酮化合物HPLC测定方法的研究

利用高效液相色谱技术,建立一种同时检测棕色棉纤维细胞杨梅素、槲皮素、柑橘素、山奈酚等四种类黄酮成分含量的方法。实验结果显示,四种类黄酮成分达到完全分离,样品在10 h内稳定性较好,加样回收率在96.3%～99.3%。以鲜重计,棕色棉纤维中杨梅素、槲皮素、柑橘素、山奈酚的含量分别为44.68、28.2、47.2、64.6ng·g-1。

Study on Extraction Method of Carotenoids from Citrus Leaves

In order to explore the extraction method of carotenoids from citrus leaves,the extraction effect of carotenoids from leaves of Honey pomelo by ultrasonic-assisted extraction was investigated by single factor experiment and orthogonal experiment.The results showed that the optimum extraction condition was:the ration of ethanol and acetone 1∶1(v/v,containing 0.1%BHT),solid-liquid ratio 1∶30(g/mL),extraction time 7 min,ultrasonic power 240 W,extraction frequency 3 times.Under the above condition,the extraction rate of carotenoids was 85.98%.