柑橘裂皮病类病毒的一步RT-PCR法检测及其在甜橙体内的分布

柑橘裂皮病是由柑橘裂皮病类病毒(Citrusexocortisviroid,CEVd)引起的一种重要的柑橘病害。分别采用快速微量核酸提取法和SDS-KAc抽提法在表现症状的Etrog香橼中提取核酸,采用一步RT-PCR法对CEVd进行检测,结果显示SDS-KAc法可以消除带毒样品中非特异性条带。从嫁接接毒的铜水72-1锦橙植株的接穗部取嫩叶、老叶、皮,从砧木部茎杆上取老皮以及根皮分别提取总核酸进行RT-PCR检测,分析CEVd在甜橙体内的分布情况。初步检测结果表明在接穗的嫩叶、老叶、皮,砧木部茎杆的老皮和根皮上都可以检测到CEVd,以接穗部叶和皮检出稳定性高。

利用RT-PCR扩增和分析柑桔裂皮病类病毒

参考国外CEVd-A株中央保守区段(C区)和左端区段(T区),设计并合成引物Cl(-)、C2(+)、C3(+)、T1(-)、T2(+)。对感染 CEVd中国分离物的柑桔(Citrus L.)和香橼(Citrus medica L.)总核酸进行了cDNA第一链合成和PCR扩增,其中C1/C3、C1/C2分别能从感病香橼和柑桔总核酸中扩增出210bp和370bp左右的特异DNA,分别相当于CEVd的左半部和全长片段,T1/T2未能扩增出产物;健康香橼和柑桔总核酸中均未能扩增出产物。扩增结果用DIG标记的CEVd-cDNA探针进行了确证。扩增结果说明:CEVd中国分离物在左端T区与CEVd-A株存在差异。PAGE-银染法分析扩增产物表明:建立的RT-PCR方法可从约0.1ng柑桔总核酸中扩增出全长CEVd-cDNA。

生物素肼化学标记和DIG标记cDNA探针检测柑桔裂皮病类病毒

分别用生物素肼化学标记和ＤＩＧ标记我国柑桔裂皮病类病毒（ＣＥＶｄ）全长克隆ｃＤＮＡ，用以上探针对不同来源的核酸样品进行斑点杂交。两种探针可检出病柑桔总核酸的最低含量约为４００ｎｇ／斑点和８０ｎｇ／斑点；生物素肼标记ＣＥＶｄ－ｃＤＮＡ探针，可检出ＣＥＶｄ－ｃＤＮＡ的最低含量约为１０ｐｇ／斑点。研制的ＣＥＶｄ检测试剂盒能检测出发病和隐性带毒苗木中的ＣＥＶｄ，灵敏、特异、简便、快速、试剂盒已被用于检测来自我国主要裂皮病病区、湖南、湖北、福建等地的柑桔和香橼材料。

柑桔裂皮病类病毒分子生物学研究进展

本文就柑桔裂皮病类病毒(citrus exocortis viroid,CEVd)的分类地位,分子结构及其生物学鉴定、聚丙烯酰胺凝胶电泳分析和分子杂交、分子生物学检测等方法进行了综述。

柑桔裂皮病类病毒感染的柑桔树中同工酶的变化

柑桔裂皮病是由柑枯裂皮病类病毒(Citrus exocortis viroid,CEV)引起的病害,它的主要症状是砧木韧皮部纵向裂皮,鳞片化剥落,植株矮化,生长缓慢。因为症状有无十分明显,故病树和未发病树肉眼可辨,无需再作其它诊断。实践上的困难在于多数带有类病毒的慢性感染植株在什么条件下发病?如何预测?能否预防?因此,本研究特以慢性感染树作对照,与病树进行同工酶的对比研究。寻找发病的先兆,以期找到早期诊断的参考指标,并为进一步研究病害的预防打下基础。

用光生物素标记F20探针检测柑桔裂皮病类病毒

用光生物素标记Ｆ２０探针检测柑桔裂皮病类病毒陈纯贤，万蜀渊（武汉华中农业大学柑桔研究所４３００７０）关键词柑桔裂皮病类病毒，Ｆ２０探针，光生物素，斑点杂交核酸分子杂交技术因其灵敏度高、特异性强，也广泛用于病毒和类病毒的检测。最初，一般采用放射性同位素...

柑桔裂皮病类病毒感染爪哇三七叶片原生质体

柑桔裂皮病类病毒(Citrile Exocortis Viroid,简称CEV)是一种严重影响柑桔生产的单链闭环RNA致病因子,近年来人们已对它的理化特性、检测方法以及离体培养系统进行了研究。由于利用原生质体出利用整个植物或愈伤组织来研究CEV复制和致病机理更为优越,所以建立一个适合CEV感染的原生质体体系是人们关心的重要课题。

感染柑桔裂皮病类病毒的爪哇三七细胞内的两种闭环RNA

用双向聚丙烯酰胺凝胶电泳—银染法对爪哇三七(Gynura aurantioca, D. C.)进行生化分析,发现在健康爪哇三七细胞质中有一种闭环RNA(Cytoplasmic small circular RNA,简称cscRNA),它的电泳行为与柑桔裂皮病类病毒(CitruS Exocortis Viroid,简称CEV)相似,而点杂交结果显示它的一级结构与类病毒RNA的中心保守区核酸序列没有同源性。进一步分析细胞不同组分的RNA,发现cscRNA仅存在于细胞质中,并与季节的变化有密切关系。在CEV感染的爪哇三七细胞中,可测出CEV-RNA和cscRNA两种闭环RNA分子,但细胞核内仅能检出CEV-RNA一种分子,它与类病毒的中心保守区有明显的同源性。检测CEV感染时,可用细胞核RNA进行测定,以排除细胞质小分子闭环RNA的干扰。

柑橘衰退病、裂皮病和碎叶病的多重RT-PCR检测方法研究

本研究以广东省农业科学院果树研究所隔离网室内通过嫁接分别感染CTV、CEVd和CTLV的柑橘树皮为实验材料,建立了以oligo(dT)为反转录引物的RT-PCR检测体系,成功检测到在病毒RNA 3′末端带有ploy_(A)加尾的CTV和CTLV。实验过程中,发现不具有ploy_(A)加尾的环状类病毒CEVd,同样可以用oligo(dT)反转录的RT-PCR检测出来,通过测序分析,其同源性在96%以上,并发现在CEVd序列中有一个富含A的区段。在此基础上,进一步研究了同时检测CTV、CEVd和CTLV的多重RT-PCR检测体系,该方法能为这3种病害的检测简化步骤、节省时间、降低成本。

利用一步法RT-PCR技术快速检测柑桔裂皮病类病毒

中国农业科学院柑桔研究所和西南农业大学植物保护学院的研究人员已初步建立起能快速灵敏检测柑桔裂皮病类病毒（CEVd）的一步法RT-PCR技术。经过与生物学鉴定和双向聚丙烯酰胺凝胶电泳方法的比较检测，表明该方法检测周期短（只需1～2天），

贵州柑橘裂皮病的调查及鉴定报告

通过对贵州柑橘产区的 2 5个县 (市 )的柑橘园中裂皮病的发生情况进行调查 ,并结合指示植物鉴定 ,结果表明 ,现已有 8个县 (市 )有柑橘裂皮病分布 ,田间发病品种 16个 ,其中宽皮柑橘类品种 5个 ,甜橙类品种 11个。

柑桔裂皮病的凝交电泳鉴定法和指示植物鉴定法简介

柑桔裂皮病(Exocortis)又称剥皮病,因患病柑桔植株之砧木部皮层开裂和剥落而得名。该病广泛分布于世界各柑桔主产国家,我国的四川、广西、广东、湖南、湖北、江西、浙江、福建和台湾等省(区)都有发生。在我区,已知在柳州、钦州、桂林、南宁、梧州等地区有发生。该病几乎可传染所有的柑桔类果树。是一种由类病毒引起的危险性传染性病害。近年的研究表明,我区普遍栽种的新会橙、暗柳橙、改良橙。

类病毒病害及其检疫

类病毒,是目前高等植物上最小的一类寄生物,早在本世纪初就有记载,并且在历史上造成很大损失,如1930年菲律宾由椰子死亡病流行,有3000多万棵椰子死亡,1945～1947年,美国由于菊花矮化病流行,使其商品菊花30％～60％失去观赏价值,而马铃薯纺锤块茎病。

桃树病毒病RNA-seq检测分析

选择一桃园内的17份样品,利用转录组测序进行病毒及类病毒鉴定,并用qRT-PCR验证特定病毒的检测情况。结果表明,在17份样品中,共检出10种病毒,其中柑橘裂皮类病毒(CEVd)和桃病毒T(PeVT)感染率分别为58.82%和47.06%;其他8种病毒的感染率为5.88%~17.56%。17份样品中,仅1份种质没有病毒检出;有8份种质感染1种病毒;其余8份种质感染2~5种病毒。研究了解了桃产业的病毒病感染情况,对提出相应的防治措施提供参考。

柑桔类病毒分类及其相互关系

历来认为,柑桔裂皮类病毒(CEV)导致枳和兰卜来檬砧木树干裂皮,树体矮化。但是,表现矮化的程度不一样,裂皮形成以及症状表现的时期亦有不同。因此,普遍认为裂皮类病毒内存在不同的毒系。近年来的研究表明,从田间病株上分离到的RNA类病毒有5种之多。本试验采用先进的类病毒分离、检测、鉴定方法(包括PAGE聚丙烯酰胺凝胶电泳、CF—11纤维素柱层析、分子杂交以及指示植物鉴定),研究了从西班牙以及从美国加州得到的37种柑桔类病毒分离物。

高糖系温州蜜柑的病毒病对策

对温州蜜柑带来为害的病毒病种类有柑桔衰退病毒(CTV)、柑桔碎叶病毒(CTLV)、柑桔裂皮类病毒(SEV)和温州蜜柑萎缩病毒(SDV).在考虑这些病毒病的对策时,完全可以按同类方法进行处理。 高糖系温州是温州蜜柑中的一个系统,它们都患有柑桔衰退病毒,只是病状程度不同而已,温州蜜柑通常对该病毒具有抗性,即使带毒也很少表现病征。

感染柑桔裂皮病类病毒的悬浮细胞的一些特性

爪哇三七(Gynura aurantiaca D.C.)是柑桔裂皮病类病毒(Citrus Exocortis Vi-roid,简称CEV)敏感的指示植物。我们建立了健康和CEV感染的爪哇三七悬浮细胞培养的体外系统。绘制了悬浮细胞培养的生长曲线、pH曲线和温度曲线。CEV可以在悬浮细胞中复制。对继代培养中CEV和寄主核酸的连续测定表明CEV的扩增阻遏了寄主核酸的复制。

柑橘裂皮病如何防治

柑橘裂皮病是由柑橘裂皮病类病毒引起的重要柑橘病害之一。裂皮病可侵染柑橘类植物的许多种和品种,病状反应有很大差异。其中大多数砧木品种如酸桔、红桔、甜橙、酸橙、粗柠檬等均无可见病状。以枳、枳橙和黎檬作砧的柑橘植株则病状明显,受害严重。带病苗木在苗期无病状表现,田间植株出现树皮开裂所需的时间一般是在定植后4-8年。

柑橘裂皮病的防治

柑橘裂皮病是由柑橘裂皮病类病毒引起的重要柑橘病害之一。裂皮病可侵染柑橘类植物的许多种和品种,病状反应有很大差异。其中大多数砧木品种如酸桔、红桔、甜橙、酸橙、粗柠檬等均无可见病状。以枳、枳橙和黎檬作砧的柑橘植株则病状明显,受害严重。带病苗木在苗期无病状表现,田间植株出现树皮开裂所需的时间一般是在定植后4～8年。

柑橘裂皮病如何防治

柑橘裂皮病是由柑橘裂皮病类病毒引起的重要柑橘病害之一。裂皮病可侵染柑橘类植物的许多种和品种,病状反应有很大差异。其中大多数砧木品种如酸桔、红桔、甜橙、酸橙、粗柠檬等均无可见病状。