柑橘裂皮病类病毒的一步RT-PCR法检测及其在甜橙体内的分布

柑橘裂皮病是由柑橘裂皮病类病毒(Citrusexocortisviroid,CEVd)引起的一种重要的柑橘病害。分别采用快速微量核酸提取法和SDS-KAc抽提法在表现症状的Etrog香橼中提取核酸,采用一步RT-PCR法对CEVd进行检测,结果显示SDS-KAc法可以消除带毒样品中非特异性条带。从嫁接接毒的铜水72-1锦橙植株的接穗部取嫩叶、老叶、皮,从砧木部茎杆上取老皮以及根皮分别提取总核酸进行RT-PCR检测,分析CEVd在甜橙体内的分布情况。初步检测结果表明在接穗的嫩叶、老叶、皮,砧木部茎杆的老皮和根皮上都可以检测到CEVd,以接穗部叶和皮检出稳定性高。

柑橘衰退病、裂皮病和碎叶病的多重RT-PCR检测方法研究

本研究以广东省农业科学院果树研究所隔离网室内通过嫁接分别感染CTV、CEVd和CTLV的柑橘树皮为实验材料,建立了以oligo(dT)为反转录引物的RT-PCR检测体系,成功检测到在病毒RNA 3′末端带有ploy_(A)加尾的CTV和CTLV。实验过程中,发现不具有ploy_(A)加尾的环状类病毒CEVd,同样可以用oligo(dT)反转录的RT-PCR检测出来,通过测序分析,其同源性在96%以上,并发现在CEVd序列中有一个富含A的区段。在此基础上,进一步研究了同时检测CTV、CEVd和CTLV的多重RT-PCR检测体系,该方法能为这3种病害的检测简化步骤、节省时间、降低成本。

桃树病毒病RNA-seq检测分析

选择一桃园内的17份样品,利用转录组测序进行病毒及类病毒鉴定,并用qRT-PCR验证特定病毒的检测情况。结果表明,在17份样品中,共检出10种病毒,其中柑橘裂皮类病毒(CEVd)和桃病毒T(PeVT)感染率分别为58.82%和47.06%;其他8种病毒的感染率为5.88%~17.56%。17份样品中,仅1份种质没有病毒检出;有8份种质感染1种病毒;其余8份种质感染2~5种病毒。研究了解了桃产业的病毒病感染情况,对提出相应的防治措施提供参考。

应用多重PCR技术同步检测柑橘4种重要嫁接传播病原(英文)

柑橘衰退病毒(Citrus tristeza virus,CTV),柑橘碎叶病毒(Citrus tatter-leaf virus,CTLV),柑橘裂皮病类病毒(Citrus exocortis viroid,CEVd)和柑橘黄龙病(Huanglongbing,HLB)亚洲种病原(Candidatus liberobacter asiaticus)是重要的柑橘嫁接传播病原。本文建立了同时检测HLB病菌、CTV、CEVd和CTLV 4种柑橘嫁接病原的一步法、双温多重PCR检测技术体系,同时在体系中设置内参基因。应用该体系快速评价了4种嫁接传播病原在田问侵染情况,结果表明28个田间样品CTV、CEVd、CTLV和HLB感染率分别为89.3%、17.9%、10.7%和28.6%,接近半数样品为混合感染。并且将该方法应用于快速评价茎尖嫁接苗病毒的脱除情况。