氰基苯氧氟酰胺的合成及其抗柑橘霉菌活性

以邻羟基苯甲腈、溴氟乙酸乙酯和胺为原料,设计、合成了15个氰基苯氧氟酰胺化合物,通过1HNMR、13CNMR和MS鉴定了产物结构。采用菌丝生长速率法测定了这些化合物对柑橘青霉菌(Penicillium italicum)和柑橘绿霉菌(Penicillium digitatum)的抑制活性。结果表明,这些化合物对所测菌种均有一定的抑制活性。其中,2-(2-氰基苯氧基)-2-氟-N-苯基乙酰胺(Ⅱa)、N-(2-噻唑基)-2-(2-氰基苯氧基)-2-氟乙酰胺(Ⅱf),N-(4-溴-2-噻唑基)-2-(2-氰基苯氧基)-2-氟乙酰胺(Ⅱh)、2-(2-氰基苯氧基)-2-氟代-N-(4-甲基-2-噻唑基)乙酰胺(Ⅱi)、2-(2-氰基苯氧基)-2,2-二氟-N-(噻唑-2-基)乙酰胺(Ⅳc)在质量浓度为200 mg/L下对2种菌的抑制率≥87.41%;化合物Ⅱh的抗菌活性最高,在质量浓度为50 mg/L下对柑橘青霉菌和柑橘绿霉菌的抑制率分别为60.96%和53.95%,质量浓度为25 mg/L下的抑制率>30%。2-氰基苯氧氟酰胺化合物的抗柑橘青、绿霉菌活性均优于2,4-二氯苯氧乙酸。

柑橘叶点霉菌ISSR-PCR反应体系的优化

为了获得最优柑橘黑斑病病原菌柑橘叶点霉菌ISSR-PCR反应体系,利用单因素试验法对反应体系中的5个因素(Mg2+、d NTP、引物、Taq DNA聚合酶和模板DNA)分别设置了不同的浓度梯度进行反应体系的优化。结果表明,在20μL反应体系中,含有1.5 mmol/L的Mg2+、0.15 mmol/L的d NTP、0.3μmol/L的引物、25 ng DNA模板、0.5 U Taq DNA聚合酶为最优。利用优化的ISSR-PCR反应体系对不同地理来源的21株柑橘叶点霉菌菌株进行扩增。结果表明,已建立的体系稳定可靠。柑橘叶点霉菌ISSR-PCR反应体系的建立为利用ISSR分子标记技术对柑橘叶点霉菌进行遗传分析奠定了基础。

韭菜粗提取物对柑橘青霉菌的抑菌效果研究

[目的]研究韭菜乙醇粗提物对储藏期柑橘青霉病菌的抑菌作用。[方法]采用粗提物浓度梯度的平板培养法培养柑橘青霉菌,判断不同溶剂和不同处理的粗提物对柑橘青霉菌是否有抑制作用。[结果]以酒精、丙酮和无菌水为溶剂的新鲜韭菜提取物对柑橘青霉菌都有不同程度的抑制作用,且随着浓度的增大抑菌作用增强,随着培养时间的延长抑菌作用降低;以无菌水为溶剂的药液抑制作用最大,24 h时EC50为431.385μg/ml。以无菌水为溶剂时,不同处理方法所得的韭菜乙醇粗提取物对柑橘青霉菌菌丝生长有明显的抑制作用,以新鲜茎叶对菌丝生长的抑制作用最大,干根次之,以干茎叶的抑制作用最小。[结论]韭菜乙醇粗提物对储藏期柑橘青霉病菌的菌丝有抑菌作用。

乙环唑对柑橘青霉菌Penicillium italicum毒力的生物测定

就乙环唑对柑桔青霉病病菌的抑制毒力与万利得、扑霉灵、甲基托布津及多菌灵进行了比较测定。结果显示,9%乙环唑EC对柑橘青霉菌孢子萌发的最小抑制浓度为2.6μg/L,明显低于70%甲基托布津WP(70μg/L)和50%多菌灵WP(34μg/L),但高于50%万利得EC(0.8μg/L)和45%扑霉灵EC(1.4μg/L)。9%乙环唑EC与50%万利得EC、45%扑霉灵EC混用均能够提高对柑橘青霉菌孢子萌发的抑制效力。9%乙环唑的抑菌毒力EC50=0.56μg/L,EC90=1.93μg/L,抑制效力比90%万利得EC低1.8倍左右。

柑橘黑斑病菌的分子检测技术研究

为了快速区分柑橘黑斑病菌、亚洲柑橘叶点霉菌、首都叶点霉菌和中国柑橘叶点霉菌,在ITS1和18S区域设计了针对柑橘黑斑病菌、首都叶点霉菌和中国柑橘叶点霉菌的上游引物,以ITS4作为下游引物,并对所设计引物的特异性和退火温度进行了筛选,对引物的灵敏度进行了验证,并进行了果园疑似病斑的检测。结果表明,在退火温度为60℃时,引物Pc1/ITS4仅能从柑橘黑斑病菌中扩增出593 bp的特异性条带,引物Pct4/ITS4仅能从首都叶点霉菌中扩增出551 bp的条带,引物Pcc1/ITS4仅能从中国柑橘叶点霉菌中扩增出706 bp的条带,不能从柑橘常见病害病原菌中扩增出任何条带。特异性引物的灵敏度检测结果表明,引物Pc1/ITS4和Pct4/ITS4的检测灵敏度为200 pg,引物Pcc1/ITS4的检测灵敏度为20 pg。筛选的特异性引物Pc1/ITS4可以对果园疑似柑橘黑斑病病斑进行检测。因此,利用设计的特异性引物Pc1/ITS4、Pct4/ITS4和Pcc1/ITS4,结合简单的病原菌基因组DNA提取方法,可以在短时间内完成对病原菌的分子检测。

鱼腥草丁香普鲁兰多糖复配保鲜剂对柑橘青霉病及贮藏品质的影响

为开发新型安全的植物源柑橘保鲜剂,对5种中草药水提液进行抑菌试验,筛选出对柑橘青霉菌有较好抑制作用的中草药,并探讨鱼腥草丁香普鲁兰多糖复配保鲜剂对柑橘采后青霉菌抑制效果。丁香和鱼腥草水提液对柑橘青霉菌有较好抑制作用,抑菌率分别为73.45%和49.85%,对柑橘青霉菌的MIC分别为0.60 mg/mL和1.20 mg/mL,丁香和鱼腥草混合水提液抑制毒力较单一水提液的高,EC50为0.36 mg/mL。复配保鲜剂可有效抑制柑橘的发病率,在柑橘贮藏第9 d,比对照组CK发病率降低16.67%(p<0.05),但对失重率抑制效果不显著(p>0.05)。复配保鲜剂组有效延缓了果实可溶性固形物含量和可滴定酸度含量的增加,维持了较稳定的抗坏血酸含量,抑制了柑橘的呼吸强度。总之,丁香和鱼腥草水提液能有效抑制柑橘青霉菌菌丝体生长和孢子萌发,鱼腥草丁香普鲁兰多糖复配保鲜剂能提高柑橘对柑橘青霉病的抗性,该研究为开发新型安全的植物源柑橘保鲜剂提供理论支持。

四株虫生真菌代谢产物对植物真菌性病害的抑制作用

采用十字交叉法测定4株虫生真菌代谢产物对小麦纹枯病菌(Ceratobasidium cornigerum)、小麦赤霉病菌(Fusarium graminearum)、葡萄炭疽病菌(Glomerella cingulata)、梨黑斑病菌(Alternaria kikuchiana)、柑橘绿霉菌(Penicillium digitatum)的抑菌作用。结果表明,4株虫生真菌代谢产物对5种植物真菌性病害菌落生长均有一定的抑制作用,其中以卵胞白僵菌(Beauveria brongniartii)菌株BE-1对5种供试植物病原真菌菌落生长的平均抑制率最高。表明利用虫生真菌代谢产物对开发抗植物病原菌活性物质具有较大的开发潜力,值得进一步深入研究。

改良TLC-生物自显影引导裸脚菇中抗青、绿霉物质的分离

目的:分离和追踪野生裸脚菇属(0612-9)中抗青、绿霉活性物质。方法:采用正相硅胶柱色谱、ODS柱色谱、半制备HPLC等分离活性成分,用改良薄层色谱-生物自显影(即浇注法)追踪活性成分,牛津杯法、薄层色谱-紫外荧光法、10%浓硫酸乙醇显色等方法作为验证方法。结果:共制备5种化合物,分别为Ⅰ1.1、Ⅰ1.2、Ⅰ2、Ⅰ3和Ⅱ,改良TLC-生物自显影追踪到4种抗菌活性物质,即Ⅰ1.1、Ⅰ2、Ⅰ3和Ⅱ,样品检测量低至18.6μg/mL。结论:本方法具有清晰、准确的优点,适于引导中度极性活性物质,如该裸脚菇抗菌活性物质等的分离。

柑橘叶点霉属(Phyllosticta spp.)真菌的遗传多样性分析

利用筛选的11条ISSR引物对从我国柑橘主产区和国外收集的135株叶点霉属真菌菌株进行扩增,扩增产物进行凝胶电泳,扩增图谱用NTSYS-pc2.10软件进行群体聚类分析。结果显示,共扩增出116个DNA条带,其中多态性位点为112个,多态率为96.55%;平均每个引物可以扩增出10.55个条带,扩增产物大小在250~3 000 bp。聚类分析显示,中国柑橘叶点霉属真菌可以分为4个种,即P.citricarpa、P.citriasiana、P.capitalensis和P.citrichinaensis。以遗传相似性系数0.97为阈值时,柑橘黑斑病病原菌(P.citricarpa)种群可分为5个亚类,subclade-I的菌株来自中国的本地早、温州蜜柑、槾橘和南丰蜜橘,subclade-II的菌株均来自中国的砂糖橘,subclade-III的菌株来自非洲莫桑比克柠檬和葡萄柚、佛罗里达甜橙、南非甜橙和来自杭州市场上进口的澳橘,subclade-IV的菌株来自中国的甜橙,subclade-V的菌株来自中国的柠檬,表明我国柑橘黑斑病病原菌具有丰富的遗传变异,其遗传变异与寄主相关;我国与国外的柑橘黑斑病病原菌在起源上可能存在差异。P.citriasiana、P.capitalensis和P.citrichinaensis种群内也存在遗传变异,但其遗传变异与地理分布和寄主未发现相关性。该研究结果为研究柑橘叶点霉属真菌的遗传多样性奠定了基础。