柑橘皮内生细菌分离及柑橘青霉病菌拮抗菌筛选研究

柑橘青霉病是柑橘贮藏期的主要病害,为利用拮抗内生菌进行生物防治,本研究选取3个品种柑橘的橘皮,采用研磨液培养法分离纯化得到26株内生细菌。通过对峙培养法,发现5株内生细菌对柑橘青霉病菌有明显拮抗作用,占菌株总数的19.2%。对这5株细菌进行初步鉴定,分属于气芽孢杆菌属(Aerobacillus sp.)、芽孢杆菌属(Bacillus sp.)、气单胞菌属(Aeromonas spp.)、假单胞杆菌属(Pseudomonas spp.)和黄单胞杆菌属(Xanthomonas spp.)5个属。不同的柑橘品种橘皮内的内生拮抗细菌的出现频次不同。抑菌结果表明,培养3天时,H-3抑菌圈直径最大,达到了15.3mm,H-18抑菌圈最小,只有5.6mm;4天时,各抑菌圈直径均有缩小,但缩小幅度不大;5天时H-3拮抗作用仍十分明显,抑菌圈直径为10.3mm。根据H-3的菌体形态特征、生理生化测定及其16S rDNA序列分析,鉴定该菌为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis),该菌的发现对柑橘青霉病的生物防治有较好的应用价值。

2株浅白隐球酵母对葡萄灰霉病和柑橘青霉病采后防治效果的研究

以2株浅白酵母Ca63(Cryptococcus albidus 63)、Ca64(Cryptococcus albidus 64)为研究对象,通过平板对峙、显微观察致病菌和浅白酵母的共培养物。结果表明,2株浅白酵母均能显著抑制葡萄灰霉病菌和柑橘青霉病菌的生长。Ca63和Ca64对葡萄灰霉病菌菌丝生长量的抑制率分别为83.1%、80.7%;Ca63和Ca64对柑橘青霉病菌菌丝生长量的抑制率分别为82.8%、77.1%。采后果实防治试验发现2株酵母菌对葡萄灰霉病菌和柑橘青霉病菌都有良好的抑制效果,菌株Ca63对2种病菌的防治效果均好于菌株Ca64,Ca63防治灰霉病效果为62.6%,防治柑橘青霉病效果为72.6%。该研究为进一步将这2种酵母菌应用于果实采后保鲜提供了基础。

柑橘内生燕麦镰刀菌Gds-1对柑橘青霉病的防治研究

柑橘青霉病是柑橘果实采后危害最大的病害。为得到一株可有效应用于柑橘青霉病防治的柑橘内生真菌菌株,进行了柑橘果实内生菌分离、离体与活体试验筛选、菌株形态学与多基因位点分子系统发育鉴定、菌株活体应用效果与作用特点以及菌株代谢产物稳定性与应用防效试验。结果表明:筛选所得的柑橘内生真菌Gds-1在离体与活体条件下均对柑橘青霉菌有较好的抑制效果;经多基因位点联合系统发育分析,将Gds-1鉴定为燕麦镰刀菌Fusarium avenaceum;提前48 h施用Gds-1菌体,对柑橘青霉病的预防效果最好(防治效果为90.67%);Gds-1菌丝不会损害健康柑橘果实表皮,但可以在柑橘果实表皮伤口和被柑橘青霉菌感染的组织部位发挥作用,从而抑制柑橘青霉菌;当温度在-80~100℃和pH=5~10时,Gds-1无菌发酵液对柑橘青霉菌的拮抗作用高效稳定;单独施用Gds-1无菌发酵滤液28 d和56 d时,对柑橘青霉病的防效与100μg/mL的抑霉唑相当,显著高于清水对照。本研究首次报道了生防镰刀菌F.avenaceum Gds-1对柑橘青霉病的防治作用,为柑橘果实采后生物源防腐剂的选择提供了新来源,为镰刀菌生物防治机理研究提供了新思路。

柑橘青霉病防治的研究进展

柑橘青霉病是柑橘采后在储藏和运输工程中的重要病害,可造成巨大的经济损失,主要由意大利青霉(Penicillium italicum)和指状青霉(P. digitatum)引起。为了更有效地预防和控制柑橘青霉病的发生和发展,为柑橘的运输和保存工作提供科学依据,本文归纳了柑橘青霉病的物理、化学和生物防治方法所采用的主要技术手段和制剂,分析并总结了不同防治措施的优缺点,提出了柑橘青霉病防治后续研究的方向及策略。指出深入探究柑橘青霉病菌的致病机制和生物源制剂对柑橘青霉病的防控机理,推进生物防治方法与化学或物理防治方法联用,能为新型药剂的开发和建立良好的综合防治管理策略奠定基础。

利用壳聚糖防治柑橘采后青霉病的研究

利用平板法测定了不同浓度壳聚糖对柑橘青霉病菌的抑制作用,结果发现,随着壳聚糖浓度的增大,抑制作用逐渐增强。当壳聚糖浓度超过0.5%时,完全抑制病菌的生长。将柑橘用壳聚糖溶液浸泡处理后挑战接种柑橘青霉病菌,发现壳聚糖溶液可以有效防治病害的发生,防治效果达到81%,优于常用杀菌剂多菌灵的防治效果。

白薇生物碱类成分抑制柑橘采后青霉病菌活性

【目的】探究白薇抑制柑橘采后青霉病菌——意大利青霉活性部位的化学成分。【方法】采用抑菌活性靶向分离、溶剂萃取、各种柱层析及制备液相色谱分离单体化合物,核磁共振(NMR)和高分辨离子肼质谱(HR-IT-TOF-MS)鉴定分离的化合物。【结果】白薇乙酸乙酯(CAE)和正丁醇(CAB)萃取物有抑菌活性,正丁醇萃取物抑菌活性最强,大孔树脂进一步分离富集抑菌活性,CAB-C2为白薇抑菌活性部位,质量浓度为0.625 mg·mL-1时其抑菌圈直径达到16.25 mm。采用各种柱层析及制备液相色谱技术从活性部位中分离出5个单体化合物,经NMR和MS鉴定为10β-N-氧化-7-脱甲氧基娃儿滕碱(1)、9-脱氢安托芬(2)、9,14-脱氢安托芬(3)、14羟基-N-氧化-7-脱甲氧基娃儿滕碱(4)、10α-N-氧化-7-脱甲氧基娃儿滕碱(5)。【结论】5种生物碱类活性成分均为首次从白薇中分离鉴定,生物碱类成分为白薇抑制柑橘采后青霉病菌的主要活性成分。

贝莱斯芽孢杆菌对柑橘病原菌皮落青霉的生防初探

【目的】探究贝莱斯芽孢杆菌发酵液对柑橘病原菌的生防效果,为柑橘采后真菌病害绿色防控提供科学依据。【方法】通过分生孢子划线法从腐烂发霉的柚子中分离到1株青霉,命名为DYC1-1,根据形态学和分子生物学鉴定该青霉。采用抑菌圈法,通过贝莱斯芽孢杆菌发酵液对病原菌进行抑菌实验。【结果】分离得到1株柑橘病原菌,鉴定显示为皮落青霉(Penicillium crustosum)。将DYC1-1孢子悬液分别接种到柚子和沃柑表皮上,柚子和沃柑均发生病变,同时,从DYC1-1回接发病的果实上可以分离出与接种菌株形态相同的菌株,根据科赫假设验证表明所分离的DYC1-1是引起柑橘采后霉腐的病原菌。贝莱斯芽孢杆菌SB023经PDB培养基发酵5 d后,离心收集上清液并制备成终浓度分别为0%、1%、2%、3%、10%的发酵液,结果显示发酵液对菌株DYC1-1的生长具有一定抑制作用,发酵液浓度为1%、2%和3%的抑菌率分别为8.41%、8.73%和13.7%,发酵液浓度为10%的抑制率可达到37.8%,抑制率随发酵液浓度的升高而升高。镜检结果显示,与正常菌丝相比,发酵液添加组的DYC1-1菌丝有明显的膨大、形变和扭曲,说明贝莱斯芽孢杆菌发酵液中存在诱导真菌菌丝畸变的活性物质。【结论】贝莱斯芽孢杆菌发酵液对DYC1-1菌株的EC_(50)为8.2%。贝莱斯芽孢杆菌发酵液对柑橘病原菌皮落青霉具有一定的防治效果,相较于化学杀菌剂而言,该菌株来源安全、无农残,并且可以随着微生物的生长源源不断的获取。本研究可为开发利用贝莱斯芽孢杆菌作为生防菌剂奠定基础。