HPLC法同时测定冠心安口服液中蒙花苷、延胡索乙素和2,3,5,4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的含量

目的建立能同时测定冠心安口服液中蒙花苷、延胡索乙素和2,3,5,4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷含量的HPLC分析方法。方法Capcell Pak UG C_(18)色谱柱分离;蒙花苷、延胡索乙素和2,3,5,4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷检测波长分别设定为334、281、320 nm;柱温为室温;进样体积为10μL;以乙腈为流动相A,1 mL·L^(−1)磷酸溶液(三乙胺调节pH至6.0)为流动相B,梯度洗脱。结果蒙花苷、延胡索乙素和2,3,5,4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的质量浓度分别在0.0245~2.4500、0.0457~4.5700、0.0474~4.7400μg·mL^(−1)范围内线性良好;平均回收率分别为100.8%、99.9%、101.4%;精密度和重复性RSD值(n=6)均在5.0%以内;供试品溶液在24 h内稳定。结论此方法具有前处理简单、分析时间短和检测结果准确等优点,适用于冠心安口服液制剂的质量控制。

茵陈蒿中芹菜素6,8-二-C-β-D-葡萄糖苷的确认及含量测定

目的 确认我国内地产茵陈蒿中存在芹菜素6,8-二-C-β-D-葡萄糖苷,并建立测定其含量的高效液相色谱(HPLC)法。方法 采用高效液相色谱-二极管阵列检测器(HPLC-DAD)法鉴定,色谱柱为Symmetry C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-0.1%磷酸水溶液(梯度洗脱),流速为1.0 mL/min,柱温为30℃,检测波长为200~400 nm;采用超快液相色谱-三重四极杆飞行时间串联质谱(UFLC-Triple-Q-TOF-MS/MS)法鉴别,电喷雾电离负离子模式下采集数据,PeakView 1.6软件提取总离子流图;采用对照品比对,比较对照品溶液和供试品溶液色谱图中色谱峰的保留时间、紫外吸收光谱及总离子流图中相同保留时间分子离子峰的一级和二级质谱数据,鉴定茵陈蒿中的芹菜素6,8-二-C-β-D-葡萄糖苷;同时,采用HPLC法,于270 nm波长处测定35批茵陈蒿样品中芹菜素6,8-二-C-β-D-葡萄糖苷的含量。结果 对照品溶液和供试品溶液色谱图中相同保留时间色谱峰的紫外吸收光谱基本相同,总离子流图中相同保留时间分子离子峰的一级和二级质谱数据基本一致。芹菜素6,8-二-C-β-D-葡萄糖苷质量浓度在0.082 3~16.640μg/mL范围内与峰面积线性关系良好(r=0.999 9,n=8);定量限和检测限分别为36.67 ng/mL和20 ng/mL;日内精密度、日间精密度、稳定性和重复性试验的RSD均小于4.10%(n=6);平均加样回收率为96.37%,RSD为1.40%(n=6)。35批茵陈蒿样品中芹菜素6,8-二-C-β-D-葡萄糖苷含量在0.037~0.339 mg/g之间,其中产地为河南的平均含量最高(0.144 mg/g)。结论 确认了我国内地产茵陈蒿中存在黄酮二糖碳苷类成分芹菜素6,8-二-C-β-D-葡萄糖苷。所建立方法操作简单、重复性好,可用于茵陈蒿中芹菜素6,8-二-C-β-D-葡萄糖苷的含量测定。

RP-HPLC测定染料木素-4′-葡萄糖苷及其有关物质

目的 建立染料木素-4′-葡萄糖苷的含量测定方法。方法 采用反相高效液相色谱法。DiamonsilC18柱（4.6mm×250mm，5μm），流动相为乙腈-水（用磷酸调节pH至2.73）（25∶75），流速1.0mL·min^-1，检测波长261nm，柱温35℃。结果 染料木素-4′-葡萄糖苷在0.5055-101.1mg·L^-1内峰面积与浓度呈良好线性关系（r=1.0000，n=6），平均回收率99.2%（RSD=1.1%，n=9），日内精密度RSD〈0.5%，日间精密度RSD〈0.7%，最低检测限0.2ng。同时对样品中所含染料木素、染料木素-7-葡萄糖苷和染料木素-7，4′-二葡萄糖苷等微量有关物质的分离和检测也获得满意的结果。结论 该方法简便、可靠，可用于染料木素及其苷类的质量控制。

染料木素及其葡萄糖苷与DNA相互作用的研究

在pH7.2 Tris缓冲溶液中,采用紫外、荧光、粘度等方法研究了染料木素、染料木素葡萄糖苷、染料木素7,4’-二-O-β-D-葡萄糖苷与小牛胸腺ctDNA的作用。结果表明,在ctDNA存在下,染料木素及其葡萄糖苷的紫外吸收光谱的最大吸收峰均产生明显的减色效应。三种化合物的加入均能有效猝灭EB-DNA体系的荧光,而猝灭方式并不唯一。另外,ctDNA溶液的粘度也都随三种化合物的加入而增大。据此推断,染料木素及其葡萄糖苷与ctDNA之间具有较强的作用,可能以部分插入及氢键作用与ctDNA结合,其作用强弱顺序为染料木素葡萄糖苷>染料木素7,4’-二-O-β-D-葡萄糖苷>染料木素。结果提示染料木素的7位或4’位葡萄糖基化修饰有望作为抗癌活性候选物,值得进一步深入研究。

HPLC法测定板蓝根中落叶松脂素-4,4′-二-O-β-D-二葡萄糖苷

目的建立板蓝根药材抗病毒活性成分落叶松脂素-4,4′-二-O-β-D-二葡萄糖苷(直铁线莲宁B,clemas-tanin B)的定量测定方法。方法采用高效液相色谱法,色谱柱为Lichrospher-C18柱,流动相:甲醇-乙腈-水(24∶1∶75),体积流量:1.0 mL/min;紫外检测波长:280 nm。结果测定了板蓝根主要产地药材中落叶松脂素-4,4′-二-O-β-D-二葡萄糖苷的量,平均质量分数为0.041%,加样回收率为98.8%,RSD为0.60%。结论本方法简便、灵敏、结果可靠,可作为板蓝根药材质量控制的定量方法。

杜仲总木脂素及松脂醇二葡萄糖苷的纯化研究

通过大孔吸附树脂-C18反相硅胶柱层析-正相硅胶柱层析联用技术,对杜仲总木脂素及松脂醇二葡萄糖苷(PDG)进行纯化研究。结果表明,含总木脂素23.33%和松脂醇二葡萄糖苷粗品0.960 5%的杜仲提取液经AB-8树脂一次纯化,可以制得71.61%的杜仲总木脂素有效部位以及8.070%的松脂醇二葡萄糖苷粗品,再经C18反相硅胶柱层析纯化,得到53.12%的松脂醇二葡萄糖苷。最后通过正相硅胶柱层析进一步纯化,得到91.50%的松脂醇二葡萄糖苷产品。

液相色谱-串联质谱法测定人血浆中染料木素及其葡萄糖醛酸代谢物

目的建立液相色谱-串联质谱联用法测定人血浆中染料木素（雌激素类药物）及其葡萄糖醛酸代谢物（GGS）并研究其在健康人体中的药代动力学。方法10例健康受试者空腹口服染料木素50mg，血浆加入内标物地塞米松后，经液-液萃取，色谱柱为Capcell Pak C8（2mm×150mm，5μm），流动相为：甲醇-5mmol·L^-1乙酸铵-乙腈（70：20：10），以ESI源正离子MRM模式测定染料木素的血药浓度，GGS先酶解为原形后间接测定，用DAS2．0程序计算药代动力学参数。结果线性范围为0．3～500．0μg·L^-1（1=0．9983），回收率在92．9％～104．9％，绝对回收率在74．2％～89．2％，13内、13间变异（RSD）均〈15％。染料木素和GGS的主要药代动力学参数：tmax分别为（5．0±I．3），（6．0±2．4）h，Cmax分别为（10．1±6．3），（218．7±68．6）μg·L^-1，AUC0-1分别为（31．2±10．3），（3344．0±1635．0）μg·h·L^-1，AUC0-∞分别为（33．9±11．4），（3703．0±2031．0）μg·h·L^-1。结论测定方法灵敏、准确、快速、特异性强，适用于染料木素药代动力学研究。

亚麻籽木脂素——开环异落叶松树脂酚二葡萄糖苷分析方法的研究

综合有关文献资料,确定用高效液相色谱法和气相色谱/质谱联用法对亚麻籽木脂素—开环异落叶松树脂酚二葡萄糖苷(SDG)进行分析。

花旗松素和3,3'-二甲氧基鞣花酸-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷对肿瘤细胞的增殖抑制作用

目的探讨从红蓼成熟果实中分离出来的花旗松素和3,3'-二甲氧基鞣花酸-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷对人体肿瘤细胞的增殖抑制作用。方法用结晶紫染色法检测花旗松素和3,3'-二甲氧基鞣花酸-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷对人胃癌MGC细胞、人肝癌HepG-2细胞和人盲肠癌Hce-8693细胞的增殖抑制作用。结果花旗松素和3,3'-二甲氧基鞣花酸-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷在1～500μg/mL质量浓度范围内对MGC细胞、HepG-2细胞和Hce-8693细胞均有一定的生长抑制作用,随着剂量的增大和作用时间的延长,呈较好的剂量-时间-效应关系;同等条件下,花旗松素比3,3'-二甲氧基鞣花酸-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷的抑制作用强。结论花旗松素与3,3'-二甲氧基鞣花酸-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷均有体外抗肿瘤活性,能抑制MGC细胞、HepG-2细胞和Hce-8693细胞的增殖。

亚麻籽中开环异落叶松树脂酚二葡萄糖苷的测定——高效液相色谱-二极管阵列检测-电喷雾质谱法

采用高效液相色谱-二极管阵列检测-电喷雾质谱(HPLC-PAD-ESI-MS)法对开环异落叶松树脂酚二葡萄糖苷(SDG)进行定性和定量检测,研究方法的精密度、稳定性、定量检测限及加样回收率,并考察样品制备方法对定量检测结果的影响.采用Sephadex LH-20柱色谱分离制备SDG对照品,并用1H-NMR与13C-NMR对其进行表征.HPLC-PAD-ESI-MS检测所得紫外及电喷雾质谱信息与SDG结构相符.以自制的SDG(纯度96.6%)为对照,采用HPLC绘制定量标准曲线,方法精密度较高(RSD为1.36%),稳定性好(1周后RSD为1.21%),定量检测限较低(LOQ为3.4 mg·L-1),加样回收率达(99.7±3.2)%.此外,制样时采用碱法水解与混合溶剂提取,不仅节省时间,还更充分地提取了SDG.说明用HPLC-PAD-ESI-MS法检测亚麻籽中的SDG方便省时,准确可靠.

4′,7-二辛氧基染料木素的合成及其抗乳腺癌活性研究

目的合成4′,7-二辛氧基染料木素并检测其生物活性。方法在染料木素的7位和4′位引入辛氧基,并采用MTT比色法,以5氟尿嘧啶为阳性对照,评价其对体外培养的人乳腺癌(MCF-7)细胞的作用。结果 4′,7-二辛氧基染料木素对MCF-7细胞的增殖抑制作用强于阳性对照药物。结论提示4′,7-二辛氧基染料木素可作为抗乳腺癌的新型候选药物。

7-二氟甲氧基-4′,5-二辛氧基染料木素对小鼠急性毒性研究

目的研究化合物7-二氟甲氧基-4′,5-二辛氧基染料木素对小鼠的急性毒性。方法给小鼠按剂量2000mg·kg^-1一次性灌胃7-二氟甲氧基-4′,5-二辛氧基染料木素,连续观察9天,统计死亡率,计算出LD50值。结果小鼠按剂量2000mg·kg^-1给予7-二氟甲氧基-4′,5-二辛氧基染料木素后,均无明显中毒反应出现,也无死亡现象。结论 7-二氟甲氧基-4′,5-二辛氧基染料木素毒性极低,属低毒范围。

胎牛血清与矢车菊素-3-葡萄糖苷非共价相互作用机制及对其抗氧化活性的影响

本实验运用超高压高效液相色谱、荧光光谱、圆二色光谱、傅里叶变换红外光谱和抗氧化活性评价等方法,研究矢车菊素-3-葡萄糖苷在不同细胞培养条件下的稳定性,同时探究细胞培养中胎牛血清对矢车菊素-3-葡萄糖苷稳定性影响机制和抗氧化活性的影响。结果表明:胎牛血清能与矢车菊素-3-葡萄糖苷非共价结合,从而提高矢车菊素-3-葡萄糖苷的稳定性;在细胞培养条件下,矢车菊素-3-葡萄糖苷会降解为原儿茶酸和间苯三酚醛,且其动力学模型符合零级动力学;矢车菊素-3-葡萄糖苷会使胎牛血清的内源荧光猝灭,且为静态猝灭,疏水作用力是其主要的相互作用力;其对胎牛血清中色氨酸和酪氨酸的微环境影响不大,但会使其α-螺旋相对含量降低,蛋白质二级结构松散;此外,胎牛血清对矢车菊素-3-葡萄糖苷的1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基清除能力和铁原子还原能力没有明显影响,但会显著降低其2,2’-联氮-双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)阳离子自由基清除能力(P<0.05)。因此,胎牛血清与矢车菊素-3-葡萄糖苷的非共价结合可提高矢车菊素-3-葡萄糖苷的稳定性并影响其抗氧化活性,且该非共价结合也会影响胎牛血清的构象。

6-羟基染料木素和6,8-二羟基染料木素的简便合成

以鹰嘴豆芽素A为原料,通过溴代、甲氧基化和去甲基化三步反应合成了6-羟基染料木素(2b)和6,8-二羟基染料木素(3b),总产率分别为20%和40%,其结构经1H NMR,13C NMR,IR和HR-MS(ESI)表征。

高效液相色谱法测定抗风湿液中染料木苷、染料木素、去氢二异丁香酚、五味子甲素的含量

目的采用多波长HPLC梯度洗脱法建立同时测定抗风湿液中染料木苷、染料木素、去氢二异丁香酚和五味子甲素含量的方法。方法采用C18色谱柱（250 mm×4.6 mm,5μm）;流速：1.0 mL·min-1;流动相A为乙腈,流动相B为0.5%醋酸溶液,梯度洗脱;检测波长：染料木苷和染料木素为263 nm,去氢二异丁香酚为274 nm,五味子甲素为250 nm;柱温为35℃。结果染料木苷、染料木素、去氢二异丁香酚和五味子甲素质量浓度分别在9.65～193.00μg·mL-1（r=0.999 9）、7.25～145.00μg·mL-1（r=0.999 7）、5.90～118.00μg·mL-1（r=0.999 2）、5.30～106.00μg·mL-1（r=0.999 6）时与其峰面积呈良好的线性关系;染料木苷、染料木素、去氢二异丁香酚和五味子甲素的平均加样回收率分别为98.8%、99.1%、96.9%、98.1%,RSD分别为1.0%、1.3%、1.3%、1.5%（n=6）。结论该方法是一种快速、灵敏、准确的分析方法,可作为抗风湿液的含量控制方法。

海藻酸钠固定化β-葡萄糖苷酶的制备及其性质研究

在活性炭、明胶等8种固定化载体筛选的基础上研究了以海藻酸钠为载体,戊二醛为交联剂固定化β-葡萄糖苷酶的条件,并对固定化酶的酶学性质及其在催化制备大豆异黄酮活性苷元染料木素中的应用进行了研究。β-葡萄糖苷酶在0.20%戊二醛溶液中交联2 h后再与20 g/L海藻酸钠混合,然后逐滴加到4 g/LCaCl2溶液中,固化1 h后过滤、洗涤得固定化β-葡萄糖苷酶,固定化酶的酶活回收率为83.67%。固定化酶的最适温度、热稳定性、pH值稳定性以及与底物的亲和力都有所提高,最适pH值基本不变。该固定化酶重复使用6次后其活力仍保持90.94%,染料木苷转化率达60.02%。

固定化β-葡萄糖苷酶双相体系中水解大豆异黄酮

采用共价交联的方法将β-葡萄糖苷酶固定到球形壳聚糖上,并对固定化酶的性质进行表征,得出固定化酶的最佳反应条件:pH=5,温度40℃。据此用乙酸乙酯和pH=5缓冲溶液的双相体系,在40℃条件下水解大豆异黄酮。与游离酶相比,固定化酶在此双相体系中起到了稳定酶的作用;与单相体系相比,双相体系中产物的产率显著提高,反应速率也更快,且能有效去除粗品大豆异黄酮的异味。对于30%左右级别的大豆异黄酮,水解的两个主要水解产物(大豆苷元和染料木素)的产率都能达到70%。

RP-HPLC法测定中药合欢皮中木脂素苷的含量

目的:建立中药合欢皮中(-)-丁香树脂酚-4-O-β-B-D-呋喃芹糖基-(1→2)-B-D-吡喃葡萄糖苷的 RP-HPLC 含量测定方法,考察了10个地区的商品药材中木脂素苷的含量。方法:高效液相色谱法,色谱柱为 Phenomenex PRODI-GY ODS(3)(100,250mm×4.60 mm,5μm),流动相:乙腈-0.04%磷酸水溶液(18:82),流速为1.0 mL·min^(-1),分析时间30 min。检测波长204 nm,进样体积:20μL。结果:(-)-丁香树脂酚-4-O-β-D-呋喃芹糖基-(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖苷进样量与峰面积呈良好的线性关系,线性范围为:0.06～1.06μg,r=0.9998(n=5);回收率为96.1%～100%(n=9)。结论:本方法首次测定了全国10个地区的商品药材中(-)-丁香树脂酚-4-O-B-D-呋喃芹糖基-(1-2)-β-D-吡喃葡萄糖苷的含量,该方法快速,简便,重复性好。

嗜热菌β-葡萄糖苷酶A水解大豆异黄酮的研究

该研究将含嗜热乙醇菌β-葡萄糖苷酶A(Te-BglA)基因的重组质粒pET-20b-Te-BglA导入大肠杆菌JM109(DE3)中,经诱导表达和Ni2+亲和层析纯化,将其用于酶解大豆异黄酮,以染料木素的产量为检测指标,通过正交试验优化Te-BglA水解大豆异黄酮的条件。优化结果显示:最佳的水解条件为加酶量70U,温度80℃,水解时间60min,pH值7.4,在此条件下水解100g大豆粉可得到染料木素58.1mg。

亚麻籽提取物中开环异落叶松树脂酚二葡萄糖苷含量的测定

目的建立亚麻籽提取物中开环异落叶松树脂酚二葡萄糖苷（SDG）含量的HPLC测定分析法。方法色谱条件为Hypersil ODS C18（4．6mm×250mm，5μm），流速1．5mL·min^-1，柱温25℃，检测波长220nm，用乙腈-0．12％磷酸溶液作为流动相进行梯度洗脱。结果SDG在0．3～6．0μg内与峰面积呈良好的线性关系，r=0．9999。平均加样回收率为99．7％，RSD为1．13％。结论本方法精确可靠，可作为亚麻籽提取物质量控制的方法。